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纯化和标记抗人轻链β2m单克隆抗体的方法
背景:通过杂交瘤细胞株接种小鼠腹腔可获得含大量抗体的腹水,但以往纯化腹水中单克隆抗的方法较复杂,不易操作.目的:制备、纯化和标记抗人类白细胞抗原Ⅰ类分子轻链的单克隆抗体,以检测肿瘤细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达.方法:将杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔,获得含抗人轻链β2m抗体的腹水,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水,将纯化后的单克隆抗体标记异硫氰酸荧光素(FITC),标记后的抗体用于检测外周血单个核细胞、表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞和白血病K562细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子,并用流式细胞仪和荧光显微镜观察人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达.结果与结论:纯化后的抗人轻链β2m-FITC单克隆抗体纯度为96%.流式细胞检测结果表明,人类白细胞抗原Ⅰ类分子在外周血单个核细胞表面高表达,在表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞表面低表达,而在白血病K562细胞表面不表达.结果证实,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水以此制备的抗人轻链β2m-FITC能有效区别不同细胞表达人类白细胞抗原Ⅰ类分子的强弱,其纯化方法简便易行.
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恶性血液病患者血清sHLA-Ⅰ水平的变化及临床意义
目的 探讨白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等恶性血液病患者体内可溶性人类白细胞抗原Ⅰ(sHLA-Ⅰ)水平的变化及其临床意义.方法 用ELISA方法检测112例恶性血液病患者的血清sHLA-Ⅰ水平.结果 血清sHLA-Ⅰ水平白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤均高于正常对照组(P均<0.01),淋巴瘤、多发性骨髓瘤高于白血病(P均<0.05),淋巴瘤组与多发性骨髓瘤组比较无统计学意义(P>0.05);白血病初治组、复发或未缓解组血清sHLA-Ⅰ水平高于缓解组(P均<0.01),初治组与复发组比较无统计学意义(P>0.05).血清sHLA-Ⅰ水平与患者外周血乳酸脱氢酶及β2-微球蛋白水平有关.结论 血清sHLA-Ⅰ可以作为一种辅助监测及判断恶性血液病预后及复发的指标.
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杂色曲霉素对人食管鳞状上皮细胞人类白细胞抗原I分子表达的影响
目的探讨杂色曲霉素(ST)对体外培养的人原代食管鳞状上皮细胞人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)蛋白表达的影响.方法从手术切除的正常食管组织分离食管黏膜鳞状上皮,立即进行人食管鳞状上皮细胞的原代培养.以不同浓度ST(2、1、0.5、0.25、0.125 mg/L)处理24 h.采用免疫细胞化学(IHC)和流式细胞分析(FCM)方法分析ST对体外培养的人食管上皮细胞HLA-Ⅰ表达的影响.结果IHC和FCM结果均表明,经不同浓度ST处理24 h后,较高浓度ST(0.5、1、2mg/L)组食管鳞状上皮细胞HLA-Ⅰ分子表达明显下降(P＜0.05).在0.125 mg/L到2 mg/L浓度范围内,随ST处理浓度的升高,HLA-Ⅰ表达逐渐降低,两者呈明显的负相关.结论在0.125 mg/L到2mg/L浓度范围内,ST可抑制人食管上皮细胞HLA-Ⅰ分子的表达,在一定程度上影响食管鳞状上皮的抗原递呈功能.
