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鼠疫耶尔森菌caf1M基因的克隆表达及其产物免疫学评价
目的 原核表达有免疫学活性的重组caf1M蛋白(rEaf1M),并以此建立检测鼠疫抗体的辅助诊断方法.方法 将去掉信号肽编码序列的caf1M基因片段与载体pGEX4t-1通过Nco Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点进行连接,构建重组质粒caf1M-pGEX4t-1;将caf1qM-pGEX4t-1转化入E.coli BL21(DE3)中诱导表达;表达产物rlCaf1M经亲和层析进行纯化;以纯化rCaf1M及天然F1抗原喷制鼠疫抗体双检测NC膜,并以浙江各6份F1抗体阳性及阴性人血清标本进行应用评价.结果 含有重组质粒caf1M-pGEX4t-1的BL21,经诱导产生了分子量约为55×103的rCaf1M融合蛋白;rCaf1M融合蛋白与鼠疫菌免疫血清有较好反应;在浙江人血清标本的检测中,rCaf1M与F1抗体阳性者有明显反应,与F1抗体阴性者无反应.结论 本研究制备的rCaf1M,与鼠疫菌免疫血清具有良好的免疫反应性,该rCaf1M可用于鼠疫辅助免疫学检测.
关键词： 鼠疫 cajqf1M基因 rcaf1M融合蛋白 克隆表达 免疫学活性 -
霍乱弧菌宿主整合因子β亚单位的可溶性克隆表达
目的 克隆表达霍乱弧菌全局性调节子宿主整合因子(integration host factor,IHF)β亚单位基因ihfB.方法 以C7258染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增ihfB基因,扩增产物经Nhe Ⅰ和SapⅠ酶切后克隆人表达载体pXTB1;将ihfB的N端和α亚单位基因ihfA的C端通过搭桥PCR重组,重组片段N-ihfB-C-ihfA经Nhe Ⅰ和SapⅠ双酶切后克隆入表达载体pXTB1.重组质粒导入大肠埃希菌EB2566,0.4 mmol/L IPTG诱导表达,超声裂解,上清经CBD柱吸附纯化,二硫苏糖醇(DTT)柱上裂解洗脱.结果 成功构建表达野生型ihfB基因和嵌合体N-ihfB-C-ihfA的重组表达质粒pXTB1-ihfB和pXTB1-N-ihfB-C-ihfA,并在宿主菌ER2566中诱导表达.pXTB1-ihfB为不溶性的包涵体表达,pXTB1-N-ihfB-C-ihfA为可溶性表达,并获得高纯度的表达产物.结论 克隆表达了IHF β亚单位基因ihfB,IHF-α的C端可显著提高IHF-β的可溶性,获得可溶性表达的纯化IHF-β嵌合体蛋白,为后续调控功能研究奠定了基础.
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结核分枝杆菌抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的克隆表达及血清诊断学初步评价
目的 评价结核分枝杆菌蛋白抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的血清诊断价值和潜在应用前景.方法 以结核分枝杆菌H37Rv标准株全基因组DNA为模板扩增得到Rv2654c、Rv1985c和Rv3868基因的完整序列,并与表达载体pET-32a构建重组质粒.原核表达Rv2654c、Rv1985c和Rv3868蛋白,利用亲和层析的方法进行纯化.采用棋盘滴定的方法,确定各抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)佳反应条件,并应用190份血清进行血清IgG抗体检测,结合受试者工作特征曲线(ROC)对其诊断效能进行分析和评价.通过ROC计算各抗原组合的诊断效能,确定佳组合方案.结果 成功构建了重组蛋白,对重组后的片段进行测序,经BLAST比对与目的基因完全一致,且能够稳定表达.对经纯化后的3种蛋白进行ELISA检测,经统计学分析,Rv2654c、Rv1985c和Rv3868抗原的诊断效能分别达到73.16％、56.84％和71.05％.结合ROC得到佳的抗原组合方案为Rv2654c+ Rv3868,其敏感性、特异性和诊断效能分别达到78.95％、72.63％和75.79％.结论 结核分枝杆菌重组抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868具有作为结核病诊断抗原的潜力,可以作为结核病免疫学快速诊断的候选蛋白.抗原组合Rv2654c+ Rv3868具有较高的诊断效能,有较好的潜在应用价值.
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结核分枝杆菌Ag85B蛋白的重组及表达
目的 对结核分枝杆菌Ag85B蛋白进行重组表达,初步评价其免疫反应性.方法 用PCR方法得到Ag85B蛋白的编码基因,构建重组质粒,转化到大肠杆菌BL21中.经IPTG诱导表达,得到高效稳定的表达株,并用蛋白免疫印迹方法检测免疫反应性.结果 获得了高效稳定的重组Ag85B的表达株,并且重组Ag85B有较好的免疫反应性.结论 重组Ag85B有较好的免疫反应性,为结核病快速诊断研究及新疫苗研究提供了基础.
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鼠疫耶尔森菌caf1基因的克隆表达及其产物免疫学评价
目的 表达具有免疫学活性重组F1抗原(rF1),并以其构建检测鼠疫抗体胶体金试纸条.方法 将去掉信号肽编码序列的caf1基因片段与载体质粒pET32a(+)通过BamHI和Not I双酶切位点进行连接,将重组质粒[caf1-pET32a(+)]转化入BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物经亲和层析纯化,以纯化rF1及天然F1抗原制备双检测鼠疫抗体胶体金标试纸条,并对浙江省528份人血清标本进行检测.结果含caf1-pET32a(+)的BL21(DE3),经诱导产生相对分子质量(M_r)约为35.5×10~3的rF1融合蛋白;rF1融合蛋白检测鼠疫抗体的敏感性等同甚至超越天然F1抗原;在528份人血清标本的检测中,rF1与天然F1的符合率为97.9%(K=0.466),有较好一致性.结论 制备的rF1,具有良好免疫学活性,该rF1可替代天然F1抗原,用于鼠疫免疫学检测.
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中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体PD91鞭毛蛋白的基因克隆和表达
目的对中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因种参照菌株PD91的鞭毛蛋白编码基因进行克隆表达与基因序列分析.方法设计引物,用聚合酶链反应(PCR)技术获得PD91的鞭毛蛋白编码基因片段,经酶切、连接,插入质粒pET-11d中,构成重组质粒pET11d-fla,转化致大肠埃希菌BL21,提取质粒进行酶切、DNA测序和氨基酸序列分析鉴定,诱导表达,筛选高效表达株,应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(WB)方法,鉴定重组蛋白及其抗原性.结果成功地获得了鞭毛蛋白的编码基因片段和基因重组,重组蛋白在宿主菌BL21中高效表达.WB结果显示重组鞭毛蛋白与PD91的鞭毛蛋白具有相同的抗原性.经测序显示该鞭毛蛋白的基因片段长度为1011 bp,与北美莱姆病螺旋体标准株B31的DNA碱基序列及氨基酸序列比较分析,同源性分别为94.70%、95.85%.结论在国内首次成功地对中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因种的鞭毛蛋白基因进行了克隆表达,并证实具有良好的抗原性,为莱姆病血清学诊断研究提供了较好的基础.
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猪传染性胃肠炎病毒S基因全抗原位点片段及猪呼吸道冠状病毒缺失片段表达产物的反应原性比较
猪呼吸道冠状病毒(PRCV)是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的自然缺失株,二者主要区别在于PRCV的S基因缺失B、C两个主要抗原位点.因此,利用RT-PCR技术分别扩增TGEV Purdue毒株S基因近N端的S1和S1-2两个片段,将之克隆到pGEX-KG原核表达载体的GST基因下游,经表达,获得大小约52kD和108kD两种融合蛋白,表达量分别占菌体总蛋白的45%和35%,主要以包涵体的形式存在.利用TGEV和PRCV两种阳性血清进行Western blot检测,当第一抗体为TGEV阳性血清时,可检测到52kD和108kD两条带;而当第一抗体为PRCV阳性血清时,只检测到108kD一条带.结果表明这两种融合蛋白具有良好的反应原性,且可用于TGEV和PRCV的鉴别诊断,为进一步研制开发TGEV和PRCV的鉴别诊断试剂盒奠定了基础.
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家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析
目的 探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性. 方法 运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能.构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta (DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体.运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况. 结果 家蝇GAPDH基因ORF全长999 bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3 ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta (DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别. 结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用.
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炭疽芽胞杆菌致死因子在大肠埃希菌中的表达与纯化
目的 在大肠埃希菌中表达炭疽致死因子,获得纯化蛋白,用于炭疽快速诊断方法以及炭疽致病机制研究.方法 PCR方法扩增炭疽致死因子,构建表达质粒pET-LF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,通过Ni离子金属螯合树脂进行纯化,Western blot(WB)试验检查免疫原性,MTT方法检查生物学活性.结果 获得重组炭疽致死因子,WB结果显示重组蛋白具有良好的免疫反应性,MTT方法进行的生物学活性测定表明致死因子与保护性抗原联合,细胞毒性与文献报道相比有明显降低.结论 所获得的重组炭疽致死因子,对于发展炭疽快速诊断方法,以及研究炭疽毒素的作用机制具有一定的促进作用.
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鼠疫菌caf1基因特异性片段的克隆表达及其抗原与抗体反应
目的 克隆表达鼠疫菌caf1基因上的特异性片段并检测.方法 分别选取F1上C端(caf1-C)及N端(caf1-N)两段B细胞表位进行克隆表达;PCR扩增目的基因,并与表达质粒pET32a(+)进行连接,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)并诱导表达;表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化,并以Western-blot法检测其抗原与抗体反应.结果 分别诱导表达出大小为26000的Caf1-C和25000的Caf1-N两个片段,2个重组蛋白均以可溶形式存在,并与鼠疫免疫血清有良好的反应.结论 克隆表达出具有抗原与抗体反应的鼠疫菌F1抗原上的两段B细胞表位,为鉴定是否是F1位点交叉奠定了基础.
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KIR2DL4在NK-92细胞上的超表达及其功能分析
目的克隆KIR2DL4 cDNA,并使其在NK-92细胞上获得稳定表达,分析KIR2DL4分子对NK-92细胞功能的调节作用. 方法采用RT-PCR方法,从人蜕膜单个核细胞扩增出KIR2DL4 cDNA,将目的基因亚克隆于逆转录病毒表达载体构建成KIR2DL4-pLNCX 表达载体,将重组质粒转入NK-92细胞,利用单克隆抗体#33进行FACS检测,观察KIR2DL4分子在靶细胞表面的表达.ELISA检测KIR2DL4对IFN-γ分泌的影响,同时根据LDH的释放实验,分析KIR2DL4分子对NK-92细胞毒功能的调节. 结果 KIR2DL4分子在经KIR2DL4-pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达,且不影响其他受体在NK-92细胞上的表达水平.KIR2DL4分子能够部分限制NK-92细胞对HLA-G阳性靶细胞的杀伤作用,交联KIR2DL4分子能够诱导IFN-γ的分泌. 结论成功构建了KIR2DL4-pLNCX逆转录病毒表达载体,并使KIR2DL4分子在NK-92细胞上获得功能性的高表达.
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CPSIT_p7重组表达产物免疫原性检测及其在鹦鹉热嗜衣原体持续性感染中表达的研究
目的：构建鹦鹉热嗜衣原体（ Chlamydophila psittaci，Cps） CPSIT_p7原核表达载体，表达并纯化CPSIT_p7，检测其免疫原性，观察其在持续性感染过程中的mRNA和蛋白动态表达情况。方法原核表达和纯化His-CPSIT_p7融合蛋白，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，ELISA分析His-CPSIT_p7蛋白的免疫原性。采用青霉素与Cps共同处理细胞来制备持续性感染模型， RT-PCR和Western blot检测CPSIT_p7在其持续性感染过程中的表达情况。结果成功构建了pET30a-CPSIT_p7原核表达载体，并表达和纯化较稳定的重组蛋白；该蛋白免疫小鼠40 d后，ELISA 检测血清特异性抗体效价为1∶1000000；RT-PCR和Western blot 结果显示在Cps急性感染与持续性感染过程中CPSIT_p7 mRNA和蛋白表达水平均呈时间依赖性增加，感染后mRNA在36 h表达量达到高峰，之后急性感染呈时间依赖性下降，而持续性感染CPSIT_p7 mRNA高表达水平至少持续到60 h。结论成功克隆表达了His-CPSIT_p7，该蛋白具有较好的免疫原性；CPSIT_p7基因和蛋白在Cps持续性感染中呈高表达。
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芝麻主要过敏原清蛋白基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定
了芝麻是亚洲地区重要的油料作物,主要含有两种储存蛋白,为11S的球蛋白和2s的清蛋白,这两种蛋白占芝麻中总蛋白的80%～90%,清蛋白是其中主要的致敏蛋白之一.
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花生主要过敏原Ara h2的克隆表达、纯化及免疫学鉴定
花生中的Ara h2蛋白是花生的主要过敏原,本研究从化生中克隆出Arah2的基因并表达了该蛋白,该蛋白具有特异的变应原性.
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中国主要问号钩端螺旋体血清群外膜蛋白OmpL1的基因型,原核表达系统构建表达及免疫学鉴定
目的探讨15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)中国参考标准株及2群2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在外膜蛋白OmpL1基因,克隆并构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性. 方法常规酚-氯仿法提取上述钩体的基因组DNA,高保真PCR扩增全长OmpL1基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统,不同浓度IPTG诱导后用SDS-PAGE检测重组蛋白rOMPL1表达情况.分别用兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原、rOMPL1血清的Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性.分别用显微镜凝集试验(MAT)和钩体细胞黏附模型检测兔抗rOMPL1血清的交叉凝集效价和细胞黏附阻断作用. 结果上述17株钩体均具有OmpL1基因,但至少可分3种基因型:OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3.与文献报道比较,所克隆的OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3基因核苷酸序列同源性分别为93.87%～94.08%、89.82%～100%和80.89%～81.72%,其氨基酸序列同源性分别为93.13%～98.75%、91.87%～100%和85.63%～88.44%.IPTG诱导后pET32a-OmpL1/1-E.coliBL21DE3和pET32a-OmpL1/2-E.coliBL21DE3的rOMPL1/1和rOMPL1/2表达量分别占细菌总蛋白的30%和20%.rOMPL1/1和rOMPL1/2均能与兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原血清发生免疫结合反应,免疫家兔可获得抗体.兔抗rOMPL1/1和rOMPL1/2血清对上述17株钩体的MAT效价为1∶2～1∶32,1∶2～1∶16稀释时均能有效地阻断钩体黏附J744A.1细胞. 结论所检测的钩体均有OmpL1基因,但至少可分为3种不同的基因型.所构建的原核表达系统表达的rOMPL1/1和rOMPL1/2具有良好的免疫原性和免疫反应性.rOMPL1/1和rOMPL1/2具有属特异性、钩体表面的膜蛋白抗原,能诱生交叉凝集抗体,并具有钩体黏附阻断的作用.
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问号钩端螺旋体血清群LipL41基因型分析及其表达产物的免疫学鉴定
目的确定我国15群15株问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株和2群2株双曲钩体国际标准株携带LipL41基因情况,构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫原性. 方法常规酚-氯仿法提取上述17株钩体基因组DNA,高保真PCR扩增全长LipL41基因片段,T-A克隆后测序分型.构建LipL41基因原核表达系统,SDS-PAGE检测重组目的蛋白(rLipL41)表达情况.分别用钩体属特异性TR/patocⅠ抗原、rLipL41兔抗血清的Western blot鉴定其免疫反应性和抗原性.分别用显微镜凝集试验(MAT)、钩体黏附J774A.1细胞模型检测兔抗rLipL41血清的交叉凝集效价和黏附阻断作用. 结果 15株问号钩体均有LipL41基因,并可分为LipL41/1和LipL41/2两种基因型,2株双曲钩体则否.11个LipL41/1基因和4个LipL41/2基因克隆之间的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为88.61%～88.67%和93.24%～97.18%.所构建的原核表达系统rLipL41/1和rLipL41/2的表达量分别占钩体总蛋白的30%和40%.rLipL41/1和rLipL41/2均能与TR/patocⅠ抗血清发生结合反应,免疫家兔能产生抗体.rLipL41/1和rLipL41/2兔抗血清对上述15株问号钩体MAT效价为1∶8～1∶128、1∶16～1∶256稀释时均能有效地阻断钩体对细胞的黏附. 结论我国主要的15群问号钩体代表株均有LipL41/1或LipL41/2基因.所构建原核表达系统能高效表达rLipL41/1和rLipL41/2.rLipL41/1和rLipL41/2是具有良好抗原性和免疫反应性、广泛存在于不同血清群问号钩体表面的蛋白抗原.
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致肾盂肾炎大肠埃希菌新基因R049免疫保护作用的研究
目的 克隆和表达致肾盂肾炎大肠埃希菌(UPEC)132新基因R049,研究R049重组蛋白对小鼠的免疫保护作用. 方法 利用PCR定向克隆方法构建R049基因原核表达系统,表达后通过镍亲和层析纯化获得R049重组蛋白,制备鼠多克隆抗体.重组蛋白与UPECl32全菌蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,继而R049重组蛋白免疫BALB/c小鼠,用同源菌对小鼠经尿道上行感染,比较免疫组与对照组小鼠尿液与肾脏细菌计数差异. 结果 成功构建重组株E.coli BL21(DE3)/pET32a-R049 ORF,重组蛋白相对分子质量(M,)约为66.9×103,纯化后其纯度达到95%,制备多克隆抗体效价为≥l:102 400.Western blot证实重组R049蛋白与UPECl32全菌蛋白均能与小鼠抗血清发生特异性反应.动物实验结果表明尿液和肾脏菌落计数在免疫组均明显低于对照组(P
关键词： 致肾盂肾炎大肠埃希菌 R049基因 克隆表达 免疫保护 动物实验 -
中国莱姆病螺旋体鞭毛蛋白中央区的基因克隆和表达
目的对中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因种参照菌株PD91的鞭毛蛋白中央区的编码基因进行克隆表达,对重组鞭毛蛋白作为莱姆病血清学诊断抗原进行初步的研究,并进行基因序列和氨基酸序列分析.方法设计引物,用PCR技术获得PD91的鞭毛蛋白中央区的编码基因片段,经酶切、连接,插入质粒pET-30a中,构成重组质粒pET30a-mfla,转化到大肠杆菌BL21,提取质粒进行酶切、DNA测序和氨基酸序列分析鉴定,诱导表达,筛选高效表达株,应用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白及其抗原性.结果成功地获得了鞭毛蛋白中央区的编码基因片段和基因重组,重组蛋白在宿主菌BL21中高效表达.Western blot结果显示重组鞭毛蛋白的中央区与PD91的鞭毛蛋白具有相同的抗原性.经测序显示该中央区基因片段为鞭毛蛋白基因的409～786bp,与北美莱姆病螺旋体标准株B31的DNA碱基序列比较分析,同源性92%.结论成功地对中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因种的鞭毛蛋白中央区进行了克隆表达,并证实具有抗原性,为我国莱姆病血清学诊断研究提供资料.
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不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6的重组表达及免疫保护作用研究
目的 研究不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)重组外膜蛋白P6的理化性质和对小鼠的免疫保护作用.方法 利用PCR技术,以NTHi基因组为模板,扩增出编码外膜蛋白P6的基因片段;构建pET-32a-P16重组质粒;转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,并对表达条件进行了优化.通过阴离子交换和凝胶过滤层析对蛋白进行纯化.经SDS-PAGE、Western blot等对蛋白的理化性质进行初步分析,继而免疫BALB/c小鼠,用同源菌经腹腔攻击,比较免疫组和对照组小鼠死亡率.结果 实现了该蛋白在大肠杆菌中的高效表达,产物表达形式为可溶性表达,纯化后蛋白纯度可达95%,收率可达5 mg/g(蛋白/湿菌),相对分子质量(M_r)为14 145.848,Western blot证实重组P6蛋白能与菌源提纯P6蛋白免疫小鼠后的抗血清发生特异性反应.动物实验结果表明重组P6蛋白在小鼠体内能诱生高滴度的抗体,显示免疫组小鼠存活率明显高于对照组(P<0.01).结论 重组NTHi外膜蛋白P6的原核表达产物为可溶性蛋白,在小鼠体内能诱生高效价抗体,在小鼠感染模型中具有保护作用,为NTHi疫苗的研发提供了基础资料.
关键词： 不可分型流感嗜血杆菌 外膜蛋白 P6 克隆表达 免疫保护 -
牙龈卟啉单胞菌临床菌株fimA基因变异性和表达频率及其重组表达产物的致炎作用
目的了解牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)fimA基因变异性,构建fimA基因原核表达系统,鉴定其表达产物(rFimA)的致炎作用,检测FimA在Pg临床菌株中表达频率,了解FimA与慢性牙周炎的关系.方法采用高保真PCR从6株Pg临床菌株中扩增fimA基因并测定其核苷酸序列.构建fimA基因原核表达系统,制备rFimA兔抗血清.采用Western blot鉴定rFimA抗原性和免疫反应性.建立ELISA检测38株Pg临床菌株FimA表达情况和97例慢性牙周炎患者212份龈下菌斑标本中的FimA.检测rFimA诱导人脐静脉内皮EVC-304细胞分泌IL-1、IL-8、TNF-α和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的作用.结果 6株Pg临床菌株fimA基因核苷酸序列完全相同.所构建的原核表达系统rFimA产量高达细菌总蛋白的50%左右.rFimA可与Pg全菌抗血清发生结合反应,免疫家兔可获得高效价抗体.94.7%(36/38)菌株和91.5%(194/212)龈下菌斑标本ELISA结果阳性.1和10μg的rFimA作用EVC-304细胞48 h,其分泌的IL-1α水平升高(P＜0.05);但作用12 h即可出现高水平的ICAM-1(P＜0.05),未发现有诱导IL-8和TNF-α的作用(P＞0.05).结论 fimA基因序列保守,在Pg临床菌株中有很高的表达频率.rFimA有良好的抗原性和免疫反应性,可作为Pg血清学检测试剂盒和段疫苗的候选抗原.rFimA有较强的诱导细胞分泌ICAM-1的作用.
