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一株与志贺菌有共同抗原的无丙二酸柠檬酸杆菌的检出
目的 为肠道细菌鉴定工作提供参考.方法 形态学观察、生化反应、血清凝集等检测程序与试验方法,均按照《食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数》(GB/T 4789.5-2012)执行.结果 检出一株与志贺菌在SS和HE平板上菌落形态相似、与志贺菌属种多价血清及痢疾志贺菌、鲍氏志贺菌分型血清产生强凝集的无丙二酸柠檬酸杆菌.结论 无丙二酸柠檬酸杆菌与志贺菌存在共同抗原.
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小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体的制备
目的 利用杂交瘤技术制备小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株的分型鉴定.方法 用小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株作为抗原,以骨髓杂交瘤细胞融合技术制备小肠结肠炎耶尔森单克隆抗体,用玻片凝集筛选法进行单克隆抗体的特异性鉴定.结果 筛选到1株与小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株呈现阳性反应,并与日本的抗血清检测结果相一致,而与被检测的其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌和常见肠道致病菌无交叉凝集反应.结论 本实验筛选获得的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株鉴定,具有良好的特异性,避免了免疫血清难以避免的交叉凝集现象.
关键词： 小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型 单克隆抗体 交叉凝集 -
与痢疾志贺菌8型发生交叉凝集的O29:K? EIEC的分离鉴定
肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)所致疾病很象细菌性痢疾,又称志贺样大肠埃希菌,主要侵犯较大儿童和成人,EIEC为国际公认的食物中毒病原菌.
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2株与霍乱弧菌O139诊断血清发生凝集的麦氏弧菌鉴定
目的 对2株疑似O139群霍乱弧菌进一步鉴定,以排除或确诊霍乱.方法 以试管凝集和交叉吸收实验复核玻片凝集结果 ,用生化实验和BIOFOSUN微牛物鉴定系统进行生化鉴定,PCR技术检测O139霍乱弧菌特异性脂多糖基因(LPS).结果 玻片凝集阳性,试管凝集1株菌可达原诊断血清效价的1/4,1株菌达1/2,交叉吸收后均证实为非特异性凝集;未检出LPS基因;系统生化鉴定判定为麦氏弧菌.结论 2株菌不是O139霍乱弧菌,而是麦氏弧菌.
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1株与致病性大肠埃希氏菌O114∶K90(B)交叉凝集的阪崎肠杆菌
目的 对从奶粉中食源性致病菌考核样中检出的与致病性大肠埃希氏菌O114∶K90(B)发生交叉凝集的阪崎肠杆菌进行鉴定和分析.方法 依据食品安全(或食品卫生)国家标准食品微生物学检验部分相关章节,对考核样分离到的菌株采用血清学和生化反应进行检验.结果 从考核样中初步检出的血清学凝集结果疑似为致病性大肠埃希氏菌O114∶K90(B),经全面的细菌生长特性实验、全自动细菌鉴定系统,终鉴定为阪崎肠杆菌.结论 在肠道致病菌的鉴定中,即便血清学反应符合的菌株也要结合全面的生化反应结果和生长特性再做出终的判断.
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钩端螺旋体主要属特异性蛋白抗原分布及其免疫性研究
目的 确定致病性问号钩端螺旋体(钩体)属特异性外膜蛋白的抗原性和交叉免疫反应性,为研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒提供依据.方法 采用Ni-NTA亲和层析法,提取了4种钩体外膜蛋白主要基因型重组表达产物rLipL21、rLipL32/1和rLipL32/2、rLipL41/1和rLipL41/2、rOmpL1/1和rOmpL1/2,并用SDS-PAGE检测表达及提纯效果.上述重组蛋白常规皮下免疫家兔获得抗血清,显微镜凝集试验(MAT)检测各抗血清交叉凝集效价.采用盐变法提取了我国15群问号钩体参考标准株及非致病的双曲钩体Patoc Ⅰ株的外膜蛋白.以兔抗血清为一抗,采用Western blot检测上述4种外膜蛋白自然表达情况及其免疫反应性.结果 rLipL21、rLipL32/1和rLipL32/2、rLipL41/1和rLipL41/2、rOmpL1/1和rOmpL1/2表达量分别约占细菌总蛋白的10%、40%和35%、15%和10%、30%和15%,各重组蛋白SDS-PAGE提纯后均仅见单一的蛋白条带.重组蛋白兔抗血清在同一基因不同基因型表达产物之间有广泛的交叉免疫反应性,与不同钩体血清群的MAT效价为1:2～1:128.各血清群钩体外膜中均可检出上述4种外膜蛋白,但LipL21仅存在于问号钩体中.结论 LipL21、LipL32、LipL41、OmpL1均为钩体属特异性表面抗原,可作为通用性钩体疫苗及检测试剂盒的候选抗原.
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中国主要问号钩端螺旋体血清群外膜蛋白OmpL1的基因型,原核表达系统构建表达及免疫学鉴定
目的探讨15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)中国参考标准株及2群2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在外膜蛋白OmpL1基因,克隆并构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性. 方法常规酚-氯仿法提取上述钩体的基因组DNA,高保真PCR扩增全长OmpL1基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统,不同浓度IPTG诱导后用SDS-PAGE检测重组蛋白rOMPL1表达情况.分别用兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原、rOMPL1血清的Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性.分别用显微镜凝集试验(MAT)和钩体细胞黏附模型检测兔抗rOMPL1血清的交叉凝集效价和细胞黏附阻断作用. 结果上述17株钩体均具有OmpL1基因,但至少可分3种基因型:OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3.与文献报道比较,所克隆的OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3基因核苷酸序列同源性分别为93.87%～94.08%、89.82%～100%和80.89%～81.72%,其氨基酸序列同源性分别为93.13%～98.75%、91.87%～100%和85.63%～88.44%.IPTG诱导后pET32a-OmpL1/1-E.coliBL21DE3和pET32a-OmpL1/2-E.coliBL21DE3的rOMPL1/1和rOMPL1/2表达量分别占细菌总蛋白的30%和20%.rOMPL1/1和rOMPL1/2均能与兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原血清发生免疫结合反应,免疫家兔可获得抗体.兔抗rOMPL1/1和rOMPL1/2血清对上述17株钩体的MAT效价为1∶2～1∶32,1∶2～1∶16稀释时均能有效地阻断钩体黏附J744A.1细胞. 结论所检测的钩体均有OmpL1基因,但至少可分为3种不同的基因型.所构建的原核表达系统表达的rOMPL1/1和rOMPL1/2具有良好的免疫原性和免疫反应性.rOMPL1/1和rOMPL1/2具有属特异性、钩体表面的膜蛋白抗原,能诱生交叉凝集抗体,并具有钩体黏附阻断的作用.
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1株与志贺氏菌生化相似、抗原相同的大肠埃希氏菌
目的 为正确鉴定肠侵袭型大肠埃希氏菌与志贺菌提供参考.方法 对采集到的1份感染性腹泻标本进行致病菌分离,对初步鉴定为志贺氏菌的可疑菌进行进一步生化鉴别试验及血清学诊断试验.结果 检出1株一般生化特性符合志贺氏菌,并与其诊断血清发生交叉凝集反应的肠侵袭型大肠埃希氏菌.结论 肠侵袭型大肠埃希氏菌与志贺氏菌有极其相似的生化特征,相同的抗原成分,在分离志贺氏菌时,为避免鉴定错误应当使用经典可靠的生化试验方法,以确保菌株鉴定的准确性.
关键词： 志贺氏菌 肠侵袭型大肠埃希氏菌 交叉凝集 生化试验 -
一株三糖铁反应似志贺菌属血清学交叉的产毒型大肠埃希菌
目的 对实验中发现的一株与鲍氏志贺菌属诊断血清1～6型发生凝集反应的低活性肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)进行较详细的生化和血清学鉴定,为今后相关细菌鉴定工作提供参考.方法 参考GB/T4789.5-2003和GB/T4789.6-2003检验.结果 对分离到的疑似志贺菌经全面生化反应及血清学鉴定证实为1株肠产毒性大肠埃希菌O6:K15.结论 在肠道致病菌的鉴定中,即使是血清学反应符合的菌株也应结合生化检验结果做出判断.
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3株与O139群霍乱弧菌血清交叉凝集的麦氏弧菌的分离鉴定
目的 2011-2012年对3株疑似O139群霍乱弧菌进行检测与分离鉴定.方法 依据检验标准对样本进行分离培养、血清学试验、生化反应等鉴定.结果 该3株菌为麦氏弧菌,与O139群霍乱弧菌诊断血清有交叉凝集.结论 该3菌株不是O139群霍乱弧菌,而是麦氏弧菌.为避免实验结果出现假阳性,必须进行系统生化鉴定,以确保菌株鉴定的准确性.特别是在处理霍乱疫情时,病原菌的正确鉴定可为控制疫情提供科学依据.
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与O1群霍乱弧菌多价血清交叉凝集的肠道产毒性大肠埃希氏菌的鉴定
目的 对5株疑似O1群霍乱弧菌进行检测及研究.方法 依据《霍乱防治手册(第6版)》和《食品卫生微生物学检验致泻性大肠埃希氏菌检验》(GB 4789.6-2003)进行增菌、分离培养、生化鉴定、血清学检测.结果 5株菌先疑似O1群霍乱弧菌,经全面生化鉴定及血清学试验证实为肠道产毒性大肠埃希氏菌.结论 肠杆菌科、弧菌科某些种属细菌存在相关抗原,因此在鉴定此类细菌时,除进行血清学检测外,还应结合生化结果进行判定.
关键词： O1群霍乱弧菌 肠道产毒性大肠埃希氏菌 交叉凝集 -
宋内志贺菌食物中毒分离株型别分析
志贺菌传统分型方法主要是生化鉴定、血清学和噬菌体分型等,由于志贺菌的血清型别与部分大肠埃希菌存在交叉凝集,因此,无法体现暴发菌株间的遗传信息.为了探讨用于细菌性传染病监测、传染源追踪、传播途径调查和识别等暴发调查的适宜技术,本研究采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法[1],对1起由宋内志贺菌引起幼儿园食物中毒中的菌株进行了分子流行病学分析.现将结果报告如下.
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供血者罕见的A3B亚型误定为B型1例报告
1 病例介绍供血者赵某,男,30岁.1998-04-05以B型血献血200ml,因当时判定有多凝集现象,故把血浆弃掉,加上红细胞保养液,以"B”型红细胞悬液供给临床.在输血之前做相合实验时,医生甲某将供血者赵某"B”型血样与B型受血者王某血样做相合实验,为阴性,但是受血者当日术中没输血.次日,医生乙某将赵某该"B”型血样与患者陈某血样做相合实验,结果主交叉凝集,重新取1袋B型血做相合实验时,结果相合.但因医生乙某刚毕业没有临床经验,没有把配血凝集情况提示给科室其他医生.第3d,医生丙某又将赵某"B”型血样与患者杜某血样做相合实验,结果相合.当杜某某手术中需要输血时,医生丁某在做后一次配血复查时,发现了主交叉凝集.经过对献血者赵某某的血型进一步复查,确定为A3B亚型,从而避免了一次严重的输血事故.
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一起沙门菌爆发的菌株鉴定和分子溯源研究
[目的]1起沙门菌爆发的菌株鉴定和分子溯源研究. [方法]收集2007年上海市黄浦区1起食源性沙门菌爆发病例的菌株,使用3种不同产地沙门菌分型血清进行菌株比对鉴定,测试菌株耐药性并对部分菌株进行多位点基因序列分型(MLST).通过Pluse Net China非伤寒沙门菌数据库聚类分析上海市与重庆市爆发菌株的脉冲凝胶电泳(PFGE)图谱. [结果]发生在上海市黄浦区某工地爆发的1起食源性菌株,经血清学和MLST鉴定为汤卜逊沙门菌ST 26型;菌株对6种抗生素(四环素、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、氯霉素、萘啶酸、磺胺异恶唑)的耐药率均为100%.2007年重庆市报告多起食源性爆发案例中的C群沙门菌,经鉴定亦为汤卜逊沙门菌ST 26型,与上海市的菌株间存在高度遗传同源性. [结论]兰州生物制品研究所和泰国S＆A的沙门菌分型血清的H因子"c"和"k"间存在交叉凝集.2007年上海市黄浦区发生的食源性爆发病例可能为输入性汤卜逊沙门菌ST 26型的多重耐药克隆株引起.
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64株与沙门菌、志贺菌血清凝集的肠杆菌鉴定
我县每年一次的从业人员健康体检粪便检测标本中,经常发现有符合沙门菌、志贺菌三糖铁反应的可疑菌落与沙门、志贺菌诊断血清发生凝集,而系统生化鉴定又不符合的交叉凝集现象. 因为工作量大,血清凝集很费时间,我们采用可疑菌落-三糖铁-多价血清凝集-系统生化-血清分型的操作流程. 一经多价血清凝集先做系统生化,生化确证后再血清分型. 在检测中我们发现有64株与沙门菌、志贺菌多价血清凝集的菌株,经系统生化鉴定,血清学分型,与沙门菌AF-O多价血清凝集的菌株有37株,其中5株确诊为沙门菌;与志贺菌多价血清凝集的菌株有27株,其中2株确诊为宋氏志贺菌. 检测结果显示,与肠道主要致病菌交叉凝集的常见肠道杆菌,第一是蜂房哈夫尼亚菌,其次是大肠埃希菌. 现将64株菌株鉴定过程分析如下.
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沙门菌分型血清对比研究(上海市,1999至2007年)
目的 比对国产和进口沙门菌诊断血清,并了解本地区沙门菌血清型的分布和特征.方法 对1999至2007年收集和分离的1 077株沙门菌进行血清学鉴定;2006和2007年全球沙门菌监测(GSS)项目病例分离沙门菌以泰国产血清的分型结果作为参照,分别和成都生物所、兰州生物所产血清进行分型比对试验.结果 除肠炎沙门菌外,不同来源沙门菌间的优势血清型分布没有规律性特征.成都生物所血清与泰国血清的分型符合率为94. 4%(185/196);兰州生物所血清的符合率为89.9%(151/168),"H"相因子c、i、e,h、r、k存在交叉凝集现象,易产生错误的结果.包括GSS分离到的7个血清型在内确认有8株沙门菌血清型为国内首次报道.结论 泰国产沙门菌诊断血清在使用性能、分群及分型能力和准确性方面均优于国产的配套血清.建议基层实验室在掌握正确的使用习惯和建立相对标准化的沙门菌分型及相位诱导方法的前提下,使用国产血清搭配部分泰国因子血清的组合,即能达到低成本和高效率的分型效果.
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志贺氏菌iPaH基因PCR法检测结果
从业人员健康体检和临床腹泻病人都要做大便三线培养.但这种传统的细菌培养及生化鉴定方法,步骤较烦琐,出结果时间较长,血清凝集还有交叉凝集现象影响结果的判断.随着PC R技术的发展和推广应用,我们用PCR技术来验证和鉴定志贺氏菌.本文通过PCR法检测iPaH基因来验证肠道致菌病的属、种,以确定病原体.
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1株与福氏志贺菌Y变种交叉凝集的摩根摩根菌鉴定结果
目的：分析研究摩根摩根菌与福氏志贺菌Y变种的生物学关系，以避免志贺菌的误诊。方法分离培养后，结合形态学、血清学及生化试验确定检验结果。结果该菌株与福氏志贺菌Y变种发生交叉凝集，根据形态学、生化试验确定为摩根摩根菌。结论摩根摩根菌与福氏志贺菌Y变种存在共同抗原。
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与霍乱弧菌O22血清群发生交叉凝集的温和气单胞菌
温和气单胞菌广泛存在于土壤、水及水生动物中,与人类活动关系密切,其感染途经是通过受损皮肤接触带有温和气单胞菌的水或食用该菌污染的食物而感染,主要引起创伤感染、尿路感染、脑膜炎等疾病,也可引起食物中毒性腹泻.但温和气单胞菌与霍乱弧菌O22发生交叉凝集现象的报道尚少.因此,我们对从健康人群中分离到的2株与霍乱O22血清发生交叉凝集的温和气单胞菌进行系统鉴定.现报告如下.
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检出一株双糖铁反应似志贺菌属血清学交叉的产毒性大肠埃希菌
[目的]介绍1株来自腹泻病人的与志贺菌属多价或单价血清交叉凝集的优势菌,经全面生化反应,微生物鉴定è仪及血清学鉴定结果为产毒性大肠埃希菌.[方法]参照GB 4789.5-94和GB 4789.6-94检验.[结果]2份标本分离到的优势菌,先疑似志贺菌,经全面生化反应、微生物鉴定系统及血清学证实为1株产毒性大肠埃希菌O25K19(L).[结论]在肠道致病菌的鉴定中,即使是血清学反应符合的菌株也应结合生化检验结果做出判断.
