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刚果红高效降解菌分离鉴定及降解条件优化
目的:本研究以从长期受到印染废水污染的土样中分离到的一株在厌氧条件下可以高效降解偶氮染料刚果红的细菌为样本,通过形态学观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析鉴定,该菌为克雷伯氏属菌株,并定名为Klebsiella sp.Y12.通过对菌株Y12菌体浓度和刚果红降解率连续24h的测定.发现:菌株在生长到18 h时菌体浓度达到大值;在第16 h时刚果红的降解率达到大,为78%.这表明降解率与菌体生长基本同步.本研究优化了降解培养基的碳源及氮源.结果:适于刚果红降解的碳源为葡萄糖,适投加量为8.0 g/L;适氮源为硫酸铵,适硫酸铵投加量为5.0 g/L.且优化后的降解率达93%,比未优化前提高19%.本研究以刚果红为模式染料,筛选出刚果红降解菌株,这对探讨偶氮染料的有效降解,寻找一种有效的偶氮染料降解方法具有实际意义.
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高等院校食品抽样微生物检测
依据食品安全国家标准实验方法,建立与探讨适合于校园食品微生物检测方法,为校园食品安全预防与卫生管理提供科学依据。选取校园食品“紫菜卷”为检测样本,采用平板菌落计数法测定菌落总数,多管发酵法测定大肠菌群和粪大肠菌群,肠杆菌科E75/15鉴定系统鉴定可疑菌落。样品菌落总数值为385CFU/mL,大肠菌群、粪大肠菌群MPN值为400/100g,菌株鉴定检测到一株普城沙雷氏菌。结论?实验表明平板菌落总数方法成熟可靠,参考国家卫生标准判断卫生学状况可信度高。大肠菌群和粪大肠菌群实验使用乳糖发酵、革兰氏染色、伊红美兰平板鉴别、44.5℃培养、细菌快速生化鉴定方法,检测到大肠菌群,表明鲜加工食品从加工到售卖,经过一段时间卫生安全隐患加大,应规范校园内食品制作及销售单位的生产和货架期管理。
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产B类伏马菌素黑曲霉菌株基因水平鉴定研究
目的 建立基于基因水平的产B类伏马菌素黑曲霉菌株的鉴定方法.方法 通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和反转录-PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)对产B类伏马菌素黑曲霉基因簇中8个关键基因的DNA和mRNA提取方法、扩增条件等进行优化,并对其表达产物进行分析.结果 检测的19株黑曲霉菌株均携带与B类伏马菌素合成相关的8个关键基因的DNA.其中与产毒量相关性较强的基因为fum6 、fum1和fum19,但不同产毒水平黑曲霉菌株中8个关键基因的mRNA表达量各异.结论 DNA水平不足以鉴别黑曲霉菌株B类伏马菌素的产毒能力,需要结合mRNA表达水平综合分析.
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吉林市结核分枝杆菌基因分型成簇性分析
目的:采用可变数目串联重复序列(VNTR)基因分型技术鉴定吉林市辖区307例痰培养呈结核菌阳性感染者,评价此技术的价值.方法:选取吉林市辖区的307例痰培养阳性的结核菌株严格按照标准操作.首先鉴定样本是否为人型结核分枝杆菌,随后进一步对该菌株进行9位点VNTR基因型的分析鉴定.结果:301株MTB结核杆菌中,北京基因型267株,占MTB的88.7%(267/301),显示吉林地区结核杆菌基因分型以北京基因型为主导.结论:9位点的VNTR分型技术具有很好的分辨率,适用于开展结核分枝杆菌分子流行病学研究.
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39株腹泻病病原菌鉴定报告
为了明确现阶段腹泻病原菌的流行特点,对39株由地方医院送检菌株进行了调查鉴定工作.在菌株鉴定中,我们利用常规生化反应与API生物鉴定新技术相对照的方法,分别鉴定致病性肠道弧菌25株,致病性肠道杆菌14株,对于肠道致病菌的流行趋势进行了系统的分析.
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梅里埃血培养仪联合Vitek2 compact在血标本中菌株分离鉴定及耐药检测评价
目的:研究梅里埃血培养仪联合Vitek2 compact在血标本中菌株分离鉴定情况,并分析其耐药检测的效果.方法:选择本院2016年9月~2018年9月临床送检的血液样本80份作为本次研究对象,对其进行菌种的鉴定和耐药性的分析.结果:在80份血液样本中分离出病原菌16株(20.00%),革兰阳性菌9株(56.25%),革兰阴性菌6株(37.50%),真菌1株(6.25%),阴性菌中主要以肠杆菌为主,检出5株,常见检出菌为大肠埃希菌和肺炎克伯菌为主,而阳性菌则以葡萄球菌为主,金黄色葡萄球菌4株;革兰阳性菌对苯唑西林与芐青霉素的耐药率分别为77.78%与66.67%,而革兰阴性菌对头孢素类和青霉素类的耐药率比较高.结论:梅里埃血培养仪与Vitek2 compact联合应用在血标本中菌株分离鉴定中的效果显著,能够准确分离出血标本中的菌株,且在血液感染中的诊疗效果较为明显,值得应用.
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结核分支杆菌株水平鉴定技术及其研究进展
结核分支杆菌菌株分型对结核病流行病学调查和监测、传染源的发现、传播途径的阻断以及发病机制的研究都极为重要.结核分支杆菌的分型方法,主要分为非核酸法和核酸法.非核酸分型方法即传统分型方法,多是在细菌表型特征的基础上认识细菌的,包括生化分型法、血清分型法和噬菌体分型法.但由于结核分支杆菌分离株具有高度同源性,通过常规的生化试验和血清学方法是无法鉴别的,所以,对于结核分支杆菌,唯一可用的传统的菌株鉴定方法只有噬菌体分型法.随着分子生物学理论和技术的飞速发展,1980年以后,逐步建立了一些根据核酸序列进行菌株鉴定的高度特异的基因分型方法,即核酸法.主要包括:限制性片段长度多态性(RFLP)、DNA指纹图谱分析、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、聚合酶链反应(PCR)酶切分型、随机扩增多态性(RAPD)DNA、DNA序列分析以及基因芯片技术等等.随着上述方法的应用,使结核分支杆菌的菌株分型进入了一个全新的领域,也进而使结核病流行病学的研究取得了很大的进展,现将对上述各分型方法综述如下.
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烧伤感染铜绿假单胞菌对16种β-内酰胺类抗生素的耐药性分析
对天津市第四医院烧伤感染患者分离的铜绿假单胞菌551株做16种β-内酰胺类抗生素的耐药性变化分析.利用头孢噻吩、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢哌酮、头孢他啶、头孢噻肟、头孢西丁、氨曲南、亚胺培南、氨苄西林、优立新、替卡西林、替卡西林/棒酸、美洛西林、哌拉西林、羧苄西林VITEK-AMS鉴定所有菌株鉴定标准化百分率均在95%以上.
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多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳技术辅助鉴定肠炎沙门菌
伤寒沙门菌和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起肠热型感染,而肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸭沙门菌等则多引起急性胃肠炎型感染.准确的沙门菌菌株鉴定对于传染病的预防控制有重要意义.笔者应用肠杆菌科细菌鉴定系统ATB ID32E和API 20E对一起食源性疾病暴发事件中分离到的2株沙门属菌株及1株分离自住院患者的沙门属菌株进行生化鉴定,同时进行血清凝集试验.
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肠出血性大肠埃希杆菌O157:H7溶血毒素的检测方法
我们曾和美国马利兰大学发展了鉴定肠出血性大肠埃希杆菌的探针,其特异性和灵敏性极高。经序列分析发现该探针是溶血素基因的部分片段。我们又从溶血表型进一步完善了这一鉴定方法。由于其溶血条件特殊,人们一直认为该菌不溶血。我们将经验总结报告如下。 一、材料和方法 1.菌种来源:肠出血性大肠埃希杆菌882364,1986年江苏省徐州市卫生防疫站分离,经本实验室鉴定,并保存。851006为本实验室筛选到的溶血素基因的天然缺失株(对照菌株)。 2.菌株鉴定:生化鉴定为大肠埃希菌。O157单抗和H7血清为本实验室制备。用O157:H7 PCR诊断试剂盒检测882364、851006的溶血素基因,882364的扩增结果为阳性,851006为阴性。 3. 血平板的制备[1]:脱纤维羊血用磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次,加入至终浓度为3%。培养条件:于混合气(8%CO2,40%H2,52%N2)环境中37℃培养16 h,然后置21℃空气中6 h。 4.液体溶血活性检测[2]:(1)标准1%羊红细胞的制备;(2)活化菌体;(3)活性检测。 二、结果血平板检测的结果需对光观察,如发生溶血,可见菌落周围透明溶血环。液体溶血检测的结果如只需定性,则A值大于完全不溶血管即可;如需相对定量,可用溶血单位(HU)表示,一个溶血单位(HU)为裂解50%羊红细胞的检测样品的量。
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阜外心血管病医院PICU深部真菌感的病原菌分类及耐药性分析
目的:探讨阜外心血管病医院2013-2014年儿童重症监护室(PICU)患者深部真菌感染的病原菌分类及耐药现状。
方法:21例病原菌采用全自动微生物鉴定仪进行真菌菌株鉴定,并用酵母样真菌药敏试剂盒进行药敏试验。 -
正常儿童上呼吸道卡他布兰汉菌调查
近年的研究表明卡他布兰汉菌(Branhemella Catarrhalis,BC)可引起临床的多种感染[1],儿童和免疫缺陷者更具易感性[2].我院对243名学龄前儿童进行了咽拭子培养及产酶情况调查,现报告如下.材料和方法(1)标本来源:菌株来自2000年1月,北京某幼儿园体检者共243例,年龄3~6岁,男122例,女121例,标本采集时无口腔,咽喉,气管与肺等相关感染性疾病.(2)培养基:血平板粉末购自OXIOD公司;含50 μɡ/ml万古霉素的兔血巧克力平板为本实验室自配;DNA平板粉末来自法国生物梅里埃公司.(3)可疑菌株以法国生物梅里埃公司的API-NHI条(奈瑟菌及嗜血杆菌的鉴定系统)进行确认.(4)β-内酰胺酶纸片为英国OXOID公司产品.(5)菌株鉴定 :将标本接种于血平板和巧克力平板,置8% CO2环境中,于培养的24 h,48 h,72 h挑选可疑菌落作革兰染色,若形态为革兰阴性双球菌,肾形;则作DNA酶,DNA酶阳性者进一步以API-NHI条验证.(6)β-内酰胺酶:被确认为BC的菌株,以OXOID公司提供的β-内酰胺酶纸片进行验证,变为粉红色者为产酶株.
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怀柔地区临床分离300株念珠菌分布情况及耐药性分析
不同菌种的念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性存在较大差异,菌株鉴定对避免盲目经验用药尤为重要.现回顾分析2010年1月至2011年12月期间我院临床送检标本中分离出的300株念珠菌的菌种构成及药敏试验结果,报告如下.
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小儿下呼吸道感染的菌株鉴定和药敏试验结果分析
目的:分析小儿下呼吸道感染的菌株鉴定及药敏试验结果,为临床用药提供参考。方法选择本院2013年1月~2014年3月收治的1000例下呼吸道感染患儿作为研究对象,所有患儿均接受痰培养试验及药敏实验,观察菌株鉴定及药敏试验结果。结果1000份标本中鉴定出病原菌310株,其中检出多的分别为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌,分别占33.23%、19.68%及16.77%。另外,肺炎克雷伯菌耐药性大的抗生素为头孢噻吩,占45.63%,大肠埃希菌耐药性大的抗生素为头孢呋辛,占55.74%。结论小儿下呼吸道感染菌株主要为革兰氏阴性菌,耐药性复杂多变,需根据痰培养及药敏试验结果选择合适药物,以提高治疗效果,减少不良反应。
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西瓜霜发酵菌种的分离及鉴定
目的 对西瓜霜中的发酵菌种进行分离、鉴定,探讨西瓜霜发酵炮制的内涵,为西瓜霜的规范化生产和质量控制方法的建立提供依据.方法 模拟传统工艺生产西瓜霜的温度、湿度等条件,以西瓜为培养基,发酵制备西瓜霜,分别用PDA、CZA及Sabourand等培养基,采用平板划线法,分离、纯化西瓜霜发酵液中的微生物.采用形态学鉴定及DNA的ITS序列对比法鉴定分离出的菌种.结果 西瓜霜炮制发酵中共分离鉴定出6种真菌,分别为镰孢霉属Fusarium的WF-1,青霉属Penicillium的WF-2,毛霉属Mucor的WF-3,交链孢霉属Alternaria的WF-4、WF-5、WF-6.结论 西瓜霜的制备是以西瓜为培养基,在特定的环境条件,尤其是高盐条件下,通过耐高盐自然真菌发酵炮制而成,而不是传统上认为的渗析制成的芒硝的细小结晶.
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牙龈卟啉菌rRNA基因间隔区的序列测定
目的通过rRNA基因间隔区碱基序列测定,建立对牙龈卟啉菌(Pg)菌株进行鉴定的技术.方法利用种特异性引物对Pg rRNA基因间隔区进行套式PCR扩增,用glass-milk纯化PCR扩增产物,对纯化的扩增产物进行碱基序列测定.结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,Pg rRNA基因间隔区PCR扩增产物为 0.88kb,经放射活性测序反应技术测得Pg rRNA基因间隔区的碱基序列.结论 rRNA基因间隔区DNA扩增后进行测序,对Pg菌株鉴定是一种精确、重复性好的分子遗传学方法.
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菌株鉴定及药敏试验对败血症新生儿抗菌药物合理使用的影响
目的:探讨菌株鉴定及药敏试验对败血症新生儿抗菌药物合理使用的影响.方法:选取2014年12月~2017年9月我院败血症新生儿46例,采集血液标本进行细菌培养及药敏试验.结果:本组46例患儿共培养出67株病原菌,革兰阳性菌占58.21%、革兰阴性菌占35.82%、白色假丝酵母菌占5.97%;主要革兰阳性菌对苯唑西林、氨苄西林、青霉素耐药性较高,对阿米卡星、环丙沙星、头孢哌酮舒巴坦耐药性较低;主要革兰阴性菌对磺胺甲恶唑、头孢噻肟、头孢呋辛、氯霉素、氨苄西林耐药性较高,对美罗培南、亚胺培南、环丙沙星耐药性较低.结论:对败血症新生儿进行细菌培养及药敏试验,利于准确掌握致病菌分布情况及其对抗生素耐药情况,利于确保抗菌药物治疗方案合理性.
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志贺氏菌实验室检测的漏检和误诊因素分析
志贺氏菌属细菌(简称志贺氏菌)是人类感染的常见病原菌之一,其健康人群检出率为1%~2%[1],腹泻病为20%左右[2],有的地区高达30%以上[3],严重危害人民的身心健康.近年来我们从常规检测、外来菌株鉴定和文献资料发现,某些因素影响试验结果,从而导致菌株的漏检和误判.现就有关因素综合分析如下.1 志贺氏菌与大肠杆菌表型特征的相似性志贺氏菌与肠杆菌科某些属(种)表型特征的相似性是引起漏检和误诊的重要因素.现已查明,志贺氏菌与大肠埃希氏菌(简称大肠杆菌)不仅生化特性近似,而且抗原密切相关,特别是与低活性大肠杆菌(E.coli inactive).
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不同时期小儿肺炎克雷伯菌耐药性检测及分析
为探讨肺炎克雷伯菌的耐药性及变迁,我们对我院儿科1997~1998年和2001年7月至2003年4月两个时期送检的痰、粪、血液标本进行细菌培养,采用法国生物-梅里埃公司生产的ATB全自动细菌及药敏测试仪进行菌株鉴定及药敏测试,探讨2个不同时期细菌耐药性的差异.将粪、痰液标本接种于EMB及S-S平板上,35℃18~24h;将血液标本接种于梅里埃公司生产的双相血培养瓶中,35℃,每24h观察1次,如有细菌生长,转血平板.取上述平板中的可疑菌落进行革兰染色,并按ATB鉴定系统标准程序进行菌种鉴定及药敏测试.
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小米自然发酵菌株的鉴定及发酵菌株特性分析
目的 自然发酵筛选对小米改性起主要作用的菌种,并对发酵菌株的特性进行分析.方法 用培养基筛选小米自然发酵液中主要菌种,分离纯化后,进行菌株生理生化鉴定、26S rDNA、16S rDNA序列测定,菌株纯培养后的pH、微生物菌落数曲线绘制,发酵菌株有机酸含量检测,并对不同菌株的产酸、产胞外淀粉酶的能力进行检测.结果 从自然发酵液中筛选出的菌种主要为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、屎肠球菌(Enterococ cus faecium)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、芽孢菌(Bacillus).植物乳杆菌在发酵12 h时菌落数达到生长的指数期,之后pH迅速下降;戊糖片球菌及屎肠球菌在发酵24h时菌落数达到生长的指数期,之后pH迅速下降,培养40h时戊糖片球菌的pH明显低于二者;酿酒酵母及芽孢菌在发酵36 h时菌落数达到生长的指数期,之后pH略有下降.相同时间内,戊糖片球菌的产酸能力>植物乳杆菌>屎肠球菌,而酿酒酵母和芽孢杆菌不具产酸能力;戊糖片球菌有较强的产酒石酸及乳酸的能力,植物乳杆菌具有产酒石酸及乳酸的能力,但弱于戊糖片球菌,而屎肠球菌有较强的产乳酸的能力;植物乳杆菌、戊糖片球菌、屎肠球菌、酿酒酵母不能产胞外淀粉酶,而芽孢杆菌具有较强的淀粉降解能力.结论 确定了自然发酵小米中的主要菌种,为研究自然发酵小米淀粉老化特性等奠定了基础.