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2株与霍乱弧菌O139诊断血清发生凝集的麦氏弧菌鉴定
目的 对2株疑似O139群霍乱弧菌进一步鉴定,以排除或确诊霍乱.方法 以试管凝集和交叉吸收实验复核玻片凝集结果 ,用生化实验和BIOFOSUN微牛物鉴定系统进行生化鉴定,PCR技术检测O139霍乱弧菌特异性脂多糖基因(LPS).结果 玻片凝集阳性,试管凝集1株菌可达原诊断血清效价的1/4,1株菌达1/2,交叉吸收后均证实为非特异性凝集;未检出LPS基因;系统生化鉴定判定为麦氏弧菌.结论 2株菌不是O139霍乱弧菌,而是麦氏弧菌.
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O1血清群霍乱弧菌在甲鱼体表定殖模式的建立及与O139血清群霍乱弧菌定殖能力比较
目的 分析O1血清群霍乱弧菌在甲鱼体表的定殖能力,并比较O1与O139血清群霍乱弧菌菌株在甲鱼体表定殖能力的差异.方法 所用O1及O139血清群霍乱弧菌均为中国疾病预防控制中心传染病预防控制所腹泻病室保存,各4株.实验用甲鱼选择背甲直径约9 cm、体重约150 g的甲鱼,共63只.利用小动物活体成像直接观察生物发光标记的O1血清群霍乱弧菌菌株在甲鱼体表的定居部位及增殖;构建O1血清群霍乱弧菌主要定居因子的基因缺失株(mshA,gbpA,tcpA基因),通过竞争定殖实验计算竞争定殖系数(CI),分析O1血清群霍乱弧菌在甲鱼体表定殖的主要决定因子;对O1及O139血清群霍乱弧菌两两配对,组成16个竞争组,通过竞争定殖实验比较两种血清群霍乱弧菌在甲鱼体表定殖能力的差异.结果 O1血清群霍乱弧菌在甲鱼体表的定殖具有位置聚集性,以甲鱼背部裙边和背甲定殖强,腹甲定殖很少.竞争定殖实验显示,mshA基因缺失后,O1血清群霍乱弧菌在甲鱼体表的定殖能力下降了7.26倍.16个竞争组中有11组的CI值(O139/O1)大于2,在2.07~59.84之间;有2组分别为1.43及0.93;有3组的CI值低于0.7.结论 确定了霍乱弧菌在甲鱼体表的定殖部位;mshA基因为O1血清群霍乱弧菌在甲鱼体表定殖时发挥作用的主要定居因子;O139血清群菌株比O1血清群菌株有更强的定殖优势,且直接分离自甲鱼的菌株定殖能力更强.
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应用环介导等温扩增法快速检测O139群霍乱弧菌
目的 建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速检测O139群霍乱弧菌的方法.方法 应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),针对O139霍乱弧菌wbfR基因设计4条引物(2条内引物、2条外引物);优化LAMP反应条件和反应体系,对反应体系中的引物、dNTP、Mg2+/Mn2+离子及Calcium等浓度进行优化;并对13株种系背景明确的霍乱弧菌不同实验对照株、30株O139群霍乱弧菌地方分离株、10株O1群霍乱弧菌地方分离株、32株其他肠道菌进行检测,验证该方法的特异性;通过肉眼目测或电泳检测比较结果.结果 所有O139群霍乱弧菌经LAMP榆测均呈绿色并电泳有阶梯状条带为阳性,O1群霍乱弧菌及其他肠道菌均检测呈橙色并电泳无相应条带为阴性;该体系低检测限为63 CFU/反应;检测结果在白光下通过肉眼即可判断;从菌株核酸的提取至检测完成仅需1.5 h左右.结论 本研究建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测O139群霍乱弧菌,无需昂贵的仪器,简单方便,非常适合基层检验部门或小型实验室以及流行病学人员于应急车上或现场监测等使用,值得推广.
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9株O139群霍乱弧菌的药敏试验、CT基因检测及分子生物学分型结果分析
目的：通过对一起霍乱疫情中分离的9株 O139群霍乱弧菌进行药敏试验，为疫情防控提供科学依据。方法运用K-B法检测9株O139群霍乱弧菌对七种抗生素的敏感性，实时荧光定量PCR检测霍乱毒素基因，采用PFGE对19株O139群霍乱弧菌分子分型。结果9株O139群霍乱弧菌对环丙沙星、头孢噻肟、头孢哌酮、诺氟沙星和庆大霉素敏感，部分菌株对阿莫西林和四环素两种药物耐药；霍乱毒素基因检测阳性。19株O139群霍乱弧菌有17株属于同一PFGE型别。结论这次霍乱疫情的原因可能是卤菜拼盘制作（卤牛肉、卤牛肚等卤制品和凉菜）过程中受到霍乱弧菌的污染所致，头孢噻肟可作为此次疫情首选治疗和预防用药。
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3株与O139群霍乱弧菌血清交叉凝集的麦氏弧菌的分离鉴定
目的 2011-2012年对3株疑似O139群霍乱弧菌进行检测与分离鉴定.方法 依据检验标准对样本进行分离培养、血清学试验、生化反应等鉴定.结果 该3株菌为麦氏弧菌,与O139群霍乱弧菌诊断血清有交叉凝集.结论 该3菌株不是O139群霍乱弧菌,而是麦氏弧菌.为避免实验结果出现假阳性,必须进行系统生化鉴定,以确保菌株鉴定的准确性.特别是在处理霍乱疫情时,病原菌的正确鉴定可为控制疫情提供科学依据.
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鳖卵带菌情况与实验感染霍乱弧菌的研究Ⅲ. O139群霍乱弧菌污染鳖卵的实验观察
[目的] 实验观察鳖卵携带或感染O139霍乱弧菌的情况. [方法] 用O139霍乱弧菌菌悬液浸泡或经染有该菌的湿沙污染鳖种卵. [结果] 2种污染方法都能在全部或大多数实验卵的外壳和约1/4(10/40)卵内容物中检出O139霍乱弧菌. [结论] 鳖种卵外壳不仅能机械携带O139霍乱弧菌,该菌还能穿过卵壳进入卵内,形成卵内带菌或使卵受感染.
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O139群霍乱弧菌L型诱导实验观察
[目的]探讨O139群霍乱弧菌的L型变异。[方法]采用抗生素、胆盐和蒸馏水等实验室诱导方法进行观察。[结果]发现O139群霍乱弧菌MO45菌株经上述3法诱导可发生L型变异，其菌落特征和菌体形态均与L型的描述相符。[结论]实验结果证实O139群霍乱弧菌可诱导成L型，其变异过程与El Tor 弧菌相似，推测自然界中亦存在O139群霍乱弧菌的L型。
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O139群霍乱弧菌ctxAB基因序列分析
目的探讨O130群霍乱JX株的ctxAB基因序列,分析该株基因特点.方法采用PCR扩增技术,检测含O130群霍乱标本,对ctxAB阳性者进行核苷酸序列测定,分析基因变异情况.结果发现阳性标本中,对其中一株进行了ctxAB基因序列测定,该序列与853(O139群)和N16961(Eltor)同源性为100%,与569B(古典型)同源性99.7%.结论该研究证明本株与O1群(EVC)遗传关系近,可能属于B型.
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1起由O139引起的霍乱暴发调查
[目的]查找霍乱暴发的原因,分析其流行病学特征,为制订疫情控制措施提供科学依据.[方法]对2007年8月孝感市孝南区发生的1起霍乱暴发疫情进行调查.[结果]本起霍乱暴发疫情发生在家庭丧宴就餐者中,161人就餐,发病15例,发病率为9.32%;粪检161人,检出霍乱感染者11例,感染率为6.83%,其中3例为健康带菌者,无死亡病例.没有出现二代感染者.未聚餐者中未发现霍乱病人,粪检64人,均未检出霍乱弧菌.从11例感染者和1份厕所粪便检出的霍乱弧菌均为O139群.[结论]这是一起农家丧宴引起的O139群霍乱暴发.
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2株与O139群霍乱弧菌血清交叉凝集的麦氏弧菌
目的 对2株疑似O139群霍乱弧菌进行系统分离鉴定,以确诊是否为霍乱.方法 对疑似菌株进行系统鉴定,包括血清学诊断、生化试验及CT、rfb基因等分子生物学检测.结果 该2株菌均不是O139群霍乱弧菌,而是麦氏弧菌.结论 霍乱弧菌的鉴定除了血清学诊断外还应该结合系统生化试验和分子生物学试验,排除假阳性,为疫情处置提供科学依据.
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O139群霍乱弧菌L型变异和诱导实验的观察及致病性的探讨
[目的]探讨O139群霍乱弧菌L型变异及其与El Tor型的R型血清的关系.[方法]2002～2005年,我们采用酚肉汤传代、抗生素、胆盐和蒸馏水等实验室诱导方法进行观察.[结果]发现O139群霍乱弧菌6菌株经上述方法诱导可发生L型变异,其菌落特征和菌体形态均与L型的描述相符.[结论]实验结果证实O139群霍乱弧菌可诱导成L型,通过与O1群的R型血清凝集状况,表明其L型菌株未见到抗原的完全消失,其变异过程与El Tor弧菌相似,关系密切,推测自然界中亦存在O139群霍乱弧菌L型,且仍具有致病性.
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52株O139群霍乱弧菌脉冲场凝胶电泳分析
目的:为探讨宁波市不同地区、不同年份、不同来源的霍乱病原菌之间的分子分型和遗传相关性,研究宁波市霍乱分子流行病学特点.方法:采用限制性内切酶Not Ⅰ对2004～2006年宁波地区霍乱疫情中分离的52株O139群霍乱弧菌进行脉冲场凝胶(PFGE)分子分型研究.结果:52株O139群霍乱弧菌基因组DNA经Not Ⅰ酶酶切、PFGE图谱分析,DNA条带得到有效分离,在20～500 KB区问产生约20条带.所有菌株按条带数量和位置的不同分为5个型别.结论:PFGE对来自不同地区、不同年份、不同来源的霍乱弧菌遗传相关性有较好的分辨能力.
关键词： 脉冲场凝胶电泳(PFGE) O139群霍乱弧菌 PFGE型 分子分型 -
用脉冲场凝胶电泳方法对O139霍乱弧菌分型的研究
目的:利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术探讨O139群霍乱弧菌的分子分型方法.方法:用Sfi Ⅰ酶和Not Ⅰ酶切O139群霍乱弧菌染色体DNA,经脉冲场凝胶电泳进行片段分离.结果:14株O139群霍乱弧菌经Sfi Ⅰ酶切后电泳分离可得一个PFGE型,用Not Ⅰ酶切电泳可分为2个PFGE型.结论:脉冲场凝胶电泳技术分析O139群霍乱弧菌,分型发现微小差别有助于分析追踪疫情和来源.
关键词： 脉冲场凝胶电泳(PFGE) O139群霍乱弧菌 分子分型 -
龙泉市首例O139群霍乱弧菌耐药性及毒力基因携带情况研究
目的:研究龙泉市首例O139群霍乱弧菌耐药性及毒力基因携带情况.方法:运用药敏试验及PCR方法,分析该霍乱弧菌的耐药性以及携带ctxA、tcpA毒力基因的情况.结果:该O139群霍乱弧菌对庆大霉素等9种抗生素多重耐药,仅对丁胺卡那、诺氟沙星和环丙沙星敏感;该O139群霍乱弧菌携带ctxA、tcpA毒力基因.结论:在对O139群霍乱弧菌引起霍乱的防治工作中应密切监测其耐药性以及携带毒力基因的情况.
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O139型霍乱弧菌在四种4号琼脂培养基上的生长特性研究
目的:了解O139型霍乱弧菌在四种4号琼脂平板上的生长特性,为选择其合适的培养基提供参考.方法:将本实验室分离的0139型霍乱菌株经增菌后按一定比例稀释,分别接种到正常人群肛拭样中,按照<霍乱防治手册>(第五版)同时用四种4号琼脂进行分离培养.结果:四种4号琼脂平板均发现有可疑菌落0139型霍乱弧菌生长.在"北京陆桥"、"杭州天和"平板上10 h～12 h内能分离培养出可供试验的可疑菌落;16 h分离培养后菌落特征分别为:在"杭州天和"平板上呈圆形、中心深褐色、边缘无色、2 mm～3 mm大小菌落,在"北京陆桥"平板上呈圆形、部分菌落边缘有1-2个棘、似椭圆、中心褐色凹陷呈脐窝状、周围乳白色、2 mm～3 mm大小菌落,在"广东环凯"平板上呈圆形、中心浅褐色呈点状隆起、周围无色透明、2 mm大小菌落,在"青岛海博"平板上呈圆形、乳白色、扁平、1 mm大小菌落.结论:四种4号琼脂培养基均能分离出O139型霍乱弧菌;而菌落大小、形状、色泽等菌落特征差异明显,部分4号平板上其典型菌落特征未见文献报道;同时在有的平板上生长较快,能及时检测病原菌.此次实验提示,"杭州天和"等厂家生产的4号琼脂比较适合本地区O139型霍乱弧菌分离培养.
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O139群霍乱弧菌及出血性大肠杆菌O157:H7细菌性腹泻新病原
感染性腹泻(infectious diarrhea)为一组广泛存在并流行于世界各地的胃肠道传染病,也是当今全球性重要的公共卫生问题之一,其发病率仅次于上呼吸道感染.在我国感染性腹泻的发病率居所有传染病之首位[1].
关键词： 病原学 诊断 治疗 O139群霍乱弧菌 出血性大肠杆菌O157:H7 -
O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研制
目的 本研究旨在建立一种准确、快速、简便的O139群霍乱弧菌检测方法. 方法 以荧光纳米颗粒为标记物,采用双抗体夹心法模式制备O139群霍乱弧菌免疫层析检测试纸条.在紫外灯下观察试纸条上质控线和检测线上的荧光信号强度作为结果判定依据. 结果 用所制备的O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条对9属20种105株菌进行检测,所有20株O139群霍乱弧菌检测结果呈阳性,其余85株非O139群霍乱弧菌均呈阴性反应;用该试纸条检测人工污染的海鱼样品,灵敏性为3.5×104CFU/mL.用自制试纸条和标准法同时检测77份样品(均为水产品),两种方法的总符合率为85.7%.结论 O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功为O139群霍乱弧菌的快速检测提供了一个极好的检测方法,便于野外检测的开展.具有广阔的应用前景.
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杭州市93株O139群霍乱弧菌携带毒力基因及药敏研究
目的 研究2004-2007年杭州市O139群霍乱弧菌毒力基因携带情况及其药物敏感性. 方法 分别采用PCR法和K-B法,检测分离得到的93株O139群霍乱弧菌株携带ctxA、tcpA毒力基因,并测定对12种常用抗生素的耐药性.结果 所检菌株中,91.40%的菌株携带ctxA、tcpA毒力基因.所有菌株均对丁胺卡那和环丙沙星敏感,而对氨苄青霉素耐药率高,并且携带毒力基因的菌株耐药率均高于未携带毒力基因菌株.结论携带ctxA、tcpA毒力基因的O139群霍乱弧菌致病性与耐药性更强,提示多重耐药现象与毒力基因相关.
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广西2000～2010年O139群霍乱弧菌毒力检测及耐药性分析
目的 研究广西O139群霍乱弧菌毒力基因携带情况及其药物敏感性.方法 采用PCR方法检测广西2000～2010年分离到的14株O139群霍乱弧菌霍乱肠毒素(ctxA)毒力基因,同时用K-B法对10种推荐用抗生素氟哌酸(NOR)、庆大霉素(GEN)、复方新诺明(SXT)、四环素(TET)、氨苄青霉素(AMP)、阿米卡星(AMI)、环丙沙星(CIP)、强力霉素(DOX)、氯霉素(CHL)和链霉素(STR)进行耐药性检测.结果 64.29％的菌株携带ctxA毒力基因,其中病人株携带ctxA毒力基因为100％；所有菌株对氟哌酸、阿米卡星和环丙沙星敏感,对其余7种抗生素高度耐药；病人及病家环境菌株的耐药性高于外环境菌株.结论 庆大霉素、复方新诺明、四环素、氨苄青霉素、强力霉素、氯霉素和链霉素7种传统药物已不宜用于临床病人治疗,提示在疫情监测中应关注试验检测结果,指导临床用药,及时做好防控工作.
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34株O139群霍乱弧菌耐药性分析
目的 了解O139群霍乱弧菌对常见抗菌药物的耐药性.方法 按K-B法对2次疫情中分离的O139群霍乱弧菌分别进行药敏试验.结果 34株O139群霍乱弧菌对诺氟沙星、环丙沙星、丁胺卡那霉素等抗菌药物敏感,对氨苄青霉素、链霉素、庆大霉素等高度耐药.结论 在传染病疫情控制中应及时开展细菌的药物敏感试验监测工作,为临床提供针对性的指导用药,对疫情控制起到重要作用.
