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环介导等温扩增技术检测调味粉中罂粟可待因
目的 基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP),建立调味粉中罂粟可待因的检测方法.方法 根据可待因特异性基因序列设计引物,通过对12种罂粟种子、1 1种香辛料叶或种子、1种虞美人种子的DNA样品进行特异性实验、佳温度筛选实验、敏感性实验,并以此确立LAMP反应体系,对市售8种调味粉进行检测.结果 12种罂粟和虞美人的DNA样品发生了特异性反应,佳反应温度为66℃,LAMP检测低浓度达9 pg/μL,敏感性是PCR检测(0.9 ng/μL)的100倍.市售8种调味粉中,有1种含有可待因成分.结论 LAMP检测法灵敏度高、特异性强、操作方便、快速,适用于调味粉中罂粟可待因的检测.
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环介导等温扩增技术在细菌性肠道传染病诊断中的应用研究进展
环介导等温扩增(LAMP)技术属于新型的分子生物学检测技术,主要在温度为60～65℃的恒温条件下发生反应,并于1 h内将目的基因扩增至109倍,具有操作简单、迅速、灵敏度及特异度高等优势,在多种感染疾病检测中被广泛应用.目前,临床上结合LAMP技术的优势,将其应用于肠道传染病的检测中,可提升检测准确率,且更加可靠,还可节约检测成本,缩短检测时间,为肠道传染病的治疗提供依据.现主要对LAMP技术在细菌性肠道传染病诊断中的应用研究进行综述.
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LAMP技术快速检测沙门氏菌方法的建立及其应用
目的 建立和评价一种适合国境口岸及基层检验部门使用的沙门氏菌快速检测方法,在2010年上海世博会保障期间开展应用研究.方法针对沙门氏菌agfA基因,运用环介导等温扩增技术(loop mediated isothermalamplification,LAMP),设计引物进行检测,在65℃恒温条件下、60 min特异性扩增,荧光显色观察结果.对建立的方法进行特异性、灵敏度试验及模拟样本灵敏度试验,与荧光定量PCR、胶体金方法进行比对.并对54株临床分离阳性样本加以验证.结果沙门氏菌属6种不同血清型菌株LAMP检测都呈阳性,其他4种肠道细菌均为阴性；LAMP法的灵敏度与RT-PCR方法接近,达103CFU/ml,是胶体金检测法的100～1 000倍；54株沙门氏菌临床分离样本实验符合率达到100％.结论LAMP技术能够在简易的实验条件下快速报告结果,检测成本较低、特异性高、灵敏度高,适合口岸从业人员及基层检验部门进行沙门氏菌的初步筛查工作.
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结核分枝杆菌LAMP检测方法的建立及应用
目的 建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)的结核分枝杆菌核酸快速检测方法,并应用于出入境人群的肺结核样本检测.方法 针对结核分枝杆菌插入序列6110(IS6110)设计5组LAMP引物,利用LAMP实时浊度仪筛选出1组佳引物,用20株临床致病菌株进行特异性检测,用10倍梯度稀释法进行灵敏度测定,用25份痰培养阳性样本对阳性率进行评估.结果 筛选出1组佳引物TB159,该引物特异性良好,与20株常见致病菌株无交叉反应.此方法的低检测限为24.77 pg/μ1,对25份痰培养阳性样本检测的阳性率为100％.结论 建立了一种特异性好、灵敏度高的LAMP快速检测方法,可以应用于结核病检测.
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环介导等温扩增技术在农村食源性致病菌检测中的应用分析
环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是近年建立起来的一种分子生物学检测技术.该文针对LAMP技术在农村食源性致病菌检测中的应用进行研究,旨在为农村食品安全检测建立灵敏高、快速、可视化的现场检测新技术.
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基于LAMP法快速检测羊肉及其制品中的猪、鸭和羊源性成分
目的 建立肉制品中猪、鸭和羊源性成分的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,对市售羊肉片、羊肉卷、羊肉串进行猪、鸭和羊源性成分检测分析.方法 针对猪、鸭和羊线粒体Cytb基因分别设计2条外引物、2条内引物和2条环引物,优化LAMP反应条件,对猪、鸭和羊源性成分进行特异性和灵敏度试验,对羊肉制品进行上述动物源性成分监测.结果 在0.2 μmol/L外引物(F3和B3)、1.6 μmol/L内引物(FIP和BIP)、0.8μmol/L环引物(FLP和BLP)、1 mol/L甜菜碱、6 mmol/L MgSO4、1.6 mmol/L dNTP等参数的优化条件下,LAMP法对内制品中猪、鸭和羊源性成分的检测灵敏度达0.5％.SYTO-9荧光染料的荧光实时检测结果与SYBR Green Ⅰ染料肉眼观察结果一致.调查发现,该批市售羊肉及制品中存在掺假现象,掺假率为34.5％.结论 LAMP法具有操作简便、特异性强、灵敏度高、检测结果准确的特点,能有效地对内制品中的猪、鸭和羊源性成分进行检测,可作为羊肉制品掺假的一种快速检测方法.
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应用LAMP方法检测动物源性食品中沙门菌
目的 运用两种方法对动物源性食品中沙门茵进行检测,找出一种更加快速、敏感、特异、简便的检验方法.方法 采集60份市售的禽、畜等生肉及60份奶制品,分别采用LAMP方法和国家标准方法GB/T 4789.4-2008对沙门茵进行分离与鉴定.结果 120份采集样品中,LAMP方法检出2例,阳性率1.67%;国家标准方法检出1例,阳性率0.83%.LAMP方法的符合率为99.2%,敏感性为100%,特异性为99.2%.结论 LAMP检测法快速、特异、简便,该方法与国标法的阳性率差异无显著性.
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鉴别绵羊肉中狐狸源性成分的环介导等温扩增检测方法的建立
目的 建立一种能够快速区分出绵羊肉中掺入的狐狸源性成分的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法.方法 针对狐狸线粒体CoxⅠ基因分别设计两条外引物和两条内引物,优化LAMP反应条件后并进行特异性和灵敏性试验,对绵羊肉中狐狸源性成分进行检测.结果 在0.2 μmol/L外引物(F3和B3)、1.6 μmol/L内引物(FIP和BIP)、0.5 mol/L甜菜碱、0.4 mmol/L dNTP、4 mmol/L MgSO4等参数的优化条件下,可检测出掺假率为1.0％的羊肉制品,即低检测浓度为2×10-4 ng/μl.结论 本文所建立的LAMP法特异性强、灵敏度高,能有效地对绵羊肉中狐狸源性成分进行检测,可作为羊肉掺假的一种快速检测方法.
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环介导等温扩增技术在检测妊娠期女性沙眼衣原体感染中的应用
目的：评价酶联免疫吸附试验(ELISA)和环介导等温扩增方法(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)在检测妊娠期女性沙眼衣原体(Chlamydiae trachomatis，Ct)感染中的应用价值。方法：根据Genebank公布的Cpn基因序列设计6条 LAMP 引物(2条内引物，2条外引物，2条环引物)，优化并建立 LAMP 检测体系。收治 Ct 感染患者80例，进行LAMP法检测Ct DNA，同时用ELISA检测Ct特异性脂多糖抗原。结果：80例患者中，ELISA检测出阳性46例(57.5%)，而LAMP检测出阳性56例(70.0%)，两者比较差异无统计学意义(P＞0.05)。80例患者中有51例服用过大环内酯类抗生素，ELISA 检测出阳性26例(50.9%)，而 LAMP 检测出39例(76.5%)，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：LAMP检测泌尿生殖道Ct感染方法简便、快捷，尤其是对服用过抗生素的患儿也具有较高的检出率。
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环介导等温扩增技术的研究与应用
本文介绍环介导等温扩增技术(LAMP)原理、特点及应用前景.因LAMP具有特异性高、灵敏度高、易操作、污染风险低的特点,因而目前在传染病、真菌、细菌,检测领域中作为诊断工具得到了认可.
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LAMP?技术在乳腺癌前哨淋巴结转移快速检测中的应用
乳腺癌是女性发病率高的恶性肿瘤，前哨淋巴结（sentinellymph node，SLN）是肿瘤转移的第一站，通过前哨淋巴结的转移状态可以判断患者是否需要进行腋窝淋巴结清扫(axilary lymph nodesdissection，ALND)。本研究采用环介导等温扩增（LAMP?）技术在术中对前哨淋巴结进行快速检测，通过分析细胞角蛋白（CK19）基因、泌乳素诱导蛋白（PIP）基因和胆色素原脱氨酶（PBGD）基因的存在与否，来判断前哨淋巴结是否发生转移，与GeneSearch法判断的结果一致，LAMP?方法具有快速、简便、准确等优点，具有巨大的发展潜力。
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LAMP?技术在肺炎支原体快速检测中的应用
环介导等温扩增技术具有快速、特异、灵敏度高、操作简便等特点，本文介绍了LAMP?技术在肺炎支原体上的应用，结果表明，MP-LAMP方法具有较高特异性和灵敏度，是一种非常适用于临床检测的方法。
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嗜肺军团菌环介导等温扩增快速检测方法的建立与应用
目的 建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速检测嗜肺军团菌的方法.方法 应用环介导等温扩增技术(LAMP),针对嗜肺军团菌mip基因设计5条引物(2条内引物、2条外引物及1条环引物),并对LAMP反应条件和反应体系进行优化.为验证该方法的特异性、敏感性,针对种系背景明确的12株嗜肺军团菌实验对照菌株、45株嗜肺军团菌地方分离株、6株非嗜肺军团菌、11株其他细菌以及59份外环境水样本进行检测,并将其结果与传统培养分离方法及定量PCR方法比较.结果 所检测的菌株样本中不同血清型嗜肺军团菌经LAMP检测均呈绿色为阳性,非嗜肺军团菌及其他菌株检测均呈橙色为阴性.实验结果表明,LAMP方法的检出率高于传统培养分离方法及定量PCR.应用该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1.5 h左右,该体系检测灵敏度为5 cfu/ml,而且其检测结果在日(灯)光下通过肉眼即可判断.结论 实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测嗜肺军团菌,适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用.
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罗氏沼虾野田村病毒中国株RT-LAMP-LFD快速检测方法的研究
罗氏沼虾白尾病(White tail disease,WTD)是流行于罗氏沼虾苗种阶段的重要疾病,该病病原被确定为罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV),为了建立罗氏沼虾野田村病毒中国分离株(MrNV-chin)的便捷、灵敏、特异的分子诊断方法,本研究根据罗氏沼虾野田村病毒RNA2基因保守序列的6个区域设计了4条特异性引物和1条检测探针,将环介导等温扩增技术与侧向流层析试纸(Lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立了MrNV的RT-LAMP-LFD检测方法.结果表明,该方法的灵敏度是常规琼脂糖凝胶电泳的10倍;从核酸提取到检测结果判定仅需45min;反应特异性强,对其他虾类病毒WSSV、IHHNV、IMNV、TSV和YHV扩增结果均为阴性;操作简单,不需要复杂的仪器,在61℃水浴反应即可;利用LFD试纸显示结果,肉眼可直接观察判定.作为一种快速灵敏实用的分子诊断技术,该方法有利于罗氏沼虾白尾病的诊断与预防.
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环介导等温扩增技术的改进及其在现场检测平台上的应用进展
环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型核酸体外扩增技术,具有等温、快速、高特异性和灵敏度、产物检测简便等特点.自建立以来,该技术被广泛应用于病原检测、动物胚胎的性别鉴定、转基因食品检测和肿瘤的基因检测等领域并得到不断改进和完善,主要体现在特异性提高,反应速度加快,样本处理简化,检测方法特异化,多重扩增得以实现.由于LAMP满足现场检测的诸多要求,当前基于LAMP技术的现场检测平台正向着微型化、集成化、自动化方向发展,并呈现出与芯片实验室和数字扩增等技术联合应用的趋势.本文综述了近年来LAMP技术的改进及其在现场检测平台上的应用进展.
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环介导等温扩增技术检测间日疟原虫的研究
目的 应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测间日疟原虫(Plasmodium vivax,P.V). 方法 酚氯仿法提取P. V基因组 DNA,设计4条扩增P.V环子孢子蛋白基因的LAMP引物,以恶性疟原虫、弓形虫、人全血DNA为对照,进行LAMP,LAMP产物经显色、电泳鉴定.将P.V血样用健康人血稀释为1.5×10-3、1.5×10-4、1.5×10-5、1.5×10-6、1.5×10-7、1.5×10-8 6个浓度后进行LAMP,检测其敏感性. 结果 P.V LAMP扩增产物检测管显色后呈阳性,对照组均阴性.P.V LAMP产物电泳后呈LAMP 特征性梯状条带,对照组均无扩增条带.LAMP检测P.V的敏感度为1.5个疟原虫/107RBC. 结论 检测间日疟原虫的LAMP方法敏感、特异,简便.
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基于颜色判定的环介导等温扩增检测人型支原体的研究
目的 建立一种基于颜色判定的快速、灵敏、简便的人型支原体环介导等温扩增(LAMP)方法. 方法 使用PrimerExplorer V5软件设计针对人型支原体MHO_2540基因保守区域的4条特异等温扩增引物,用羟基萘酚蓝(H NB)作为结果判读指示剂并优化体系中dNTPs、MgSO4浓度,建立人型支原体LAMP检测方法,进行灵敏度、特异度等的检测并与普通PCR比较. 结果 LAMP对标准浓度人型支原体核酸的检测限约为102 CFU,与普通PCR相同,但比实时荧光定量PCR差一个数量级.人型支原体阳性临床标本拷贝数＞103 CFU者LAMP阳性率100％,与普通PCR检出率(100％)一致,拷贝数101～103 CFU的弱阳性标本LAMP检出率为63.6％(14/22),普通PCR检出率为31.8％(7/22),差异有统计学意义(x2=4.46,P＜0.05). 结论 LAMP检测人型支原体敏感、特异且操作简便,可在基层推广应用.
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环介导等温扩增技术用于肠杆菌检测的研究现状
肠杆菌是肠道疾病的一种病原体.环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新的核酸扩增技术,具有敏感性高、特异性强和简便快速等优点,可用于肠杆菌的快速诊断.本文拟就LAMP检测肠杆菌的研究现状进行综述.
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刚地弓形虫分子生物学检测技术应用研究进展
本文综述了刚地弓形虫的分子生物学检测技术,主要包括PCR技术、限制性片段长度多态性分析技术和环介导等温扩增技术,以及各种技术在实验及临床上的应用和发展前景.
关键词： 刚地弓形虫 和PCR 限制性片段长度多态性 环介导等温扩增技术 综述 -
应用LAMP技术对4种疟原虫进行属种鉴定的初步研究
目的 建立对4种感染人的疟原虫虫属及定量的环介导等温扩增法(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)基因检测方法.方法 根据恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、间日疟原虫的18S rRNA基因共有保守序列及LAMP技术原理,设计一套含有6条疟原虫虫属特异性引物的LAMP反应体系,产物经SYBR Green Ⅰ进行显色反应及电泳分析,观察其特征条带的情况,利用LAMP技术检测上述4种疟原虫DNA及其它12种相关寄生虫DNA评价反应特异性,利用PCR技术为参照对LAMP技术检测疟原虫虫属试验的敏感性,利用疟原虫重组质粒探索建立疟原虫LAMP定量的可能性.结果 4种疟原虫LAMP产物经显色后呈绿色,经电泳后呈特征性梯状条带,阴性对照及其它相关寄生虫DNA无明显扩增,重组质粒浓度在1.42×104～1.42×109拷贝/μl范围内时,反应循环阈值与模板浓度有良好的线性关系(r=0.9995).与PCR方法相比较,建立的疟原虫虫属LAMP检测方法的敏感性是其10倍,检出限达到1.42×101拷贝/μl.结论 建立的检测疟原虫属种、数量的LAMP方法具有较高的特异性和敏感性,适合疟疾防治检测的需要.
关键词： 环介导等温扩增技术 属种 疟原虫 18S rRNA基因
