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LAMP与RT-PCR法检测痰结核分枝杆菌的效果比较
目的 比较环介导等温扩增技术(LAMP)和实时荧光PCR技术(RT-PCR)检测结核分枝杆菌的效果.方法 可疑肺结核患者痰标本118份,分别采用痰涂片镜检、罗氏固体培养基培养、LAMP、RT-PCR方法进行结核分枝杆菌检查.结果 结核分枝杆菌阳性检出率痰涂片镜检38%、罗氏固体培养基培养41%、LAMP 45%、RT-PCR 55%,4种方法阳性检出率比较差异有统计学意义(P＜0.05);以常规罗氏固体培养法为标准,LAMP法的灵敏性和特异性分别为92.0%(46/50)和86.8%(59/68),与罗氏培养法比较差异无统计学意义(P＞0.05),一致性强(Kappa=0.777);PCR法的灵敏性和特异性分别为86.0%(43/50)和66.2%(45/68),与罗氏培养法比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 RT-PCR检测法阳性率高,但特异性低;LAMP法灵敏性和特异性较高,与传统培养法一致性好,操作简便易行、快速准确.
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环介导等温扩增技术在疾控机构微生物检测中的应用
环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型的体外等温扩增特异核酸片段的技术,具有特异性强、灵敏度高、快速简便等优点.本文综述了近年来LAMP在微生物检测领域的具体应用实例和研究进展,并对其应用前景做了展望.
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改良环介导等温扩增技术在疟原虫耐药基因SNP检测中的价值及可行性
目的 探讨改良环介导等温扩增技术(LAMP)对常见药物抗性基因SNP的检测价值及可能性.方法 采集非洲赤道几内亚马拉博地区医院提供的500例当地疟疾患者的外周血液样本,以巢式PCR为金标准,比较改良环介导等温扩增技术与其在恶性疟原虫耐药基因SNP检测中的反应效率、敏感性及特异性.结果 对照金标准巢式PCR方法,对500例患者进行检测,两种方法的检测符合率为96.4%,差异无统计学意义(P>0.05).检测效率比较显示,通过与金标准进行比较,改良LAMP的初反应时间较快,在10 min内即起跳并迅速达到阳性反应阈值,而巢式PCR扩增效率相对较低,明显落后于改良LAMP(q浑浊度=6.492,P<0.001;q反应速率=0.931,P=0.079);敏感性比较显示,改良LAMP扩增的阳性反应阈值较巢式PCR出现得早,并且随着时间推移,反应扩增量逐渐增加,在反应的20 min内,改良LAMP反应起跳时间较早(q浑浊度=20.171,P<0.001;q反应速率=0.326,P=0.674);特异性比较显示,改良LAMP对四种疟原虫均有较好的特异性,无论是起跳时间、扩增产物速率均优于巢式PCR(q浑浊度=18.619,P<0.001;q反应速率=1.927,P=0.073).结论 改良环介导等温扩增技术具有较好的反应速率、特异性及敏感性,操作简便、诊断效率高,值得推广.
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环介导等温扩增技术的临床应用进展
环介导等温扩增技术(LAMP)是由日本荣研株式会社的纳富继宣博士带领团队建立的,其基本原理是在具有置换活性的DNA聚合酶作用下,利用特别设计的4段引物识别靶基因的6个区域,以达到对目的基因的高效、特异复制的目的[1].传统PCR反应需要经过反复热变性从而获得单链模板,而LAMP大大节省了反复升降温的时间,实现对核酸的恒温扩增.其结果可以根据反应的副产物白色沉淀焦磷酸镁来判断是否发生扩增,也可以在反应管中加入荧光染料,反应后观察是否变色来进行鉴别[2].
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环介导等温扩增技术用于疱疹病毒和黄病毒等检测的研究现状
疱疹病毒和黄病毒是多种病毒性疾病的病原体.2000年,日本科学家Notomi等[1]首先提出了环介导等温扩增技术(LAMP),利用一种具有链置换反应的DNA聚合酶和2对特殊引物,对靶序列上的6个特异序列进行特异扩增,在65 ℃的等温条件下反应1 h即可将靶序列DNA扩增109～1010倍,产生肉眼可见的白色焦磷酸镁沉淀,具有敏感性高、特异性强、简便、快速和结果易于鉴定等优点.随后,国内外学者迅速开展了LAMP技术检测疱疹病毒和黄病毒等的研究,本文拟就这方面的进展进行综述.
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LAMP法在临床诊断的肺结核患者BALF标本中的应用评价
目的 评价环介导等温扩增法(LAMP)在临床诊断的肺结核与非肺结核两组患者中支气管肺泡灌洗液(BALF)结核分枝杆菌的检测效果.方法 收集2017年6月至2018年2月于遵义医学院附属医院住院的患者130例,其中临床诊断肺结核51例,非肺结核79例,分别行支气管肺泡灌洗(BAL)进一步寻找病原体.所有标本均送支气管刷检物行涂片抗酸染色,支气管肺泡灌洗液分别行结核分枝杆菌罗氏培养及LAMP检测,并进行统计学分析.分别计算LAMP法及培养法的阳性率及阳性检出率.结果 51例临床诊断肺结核患者中,抗酸染色阳性3例,阳性率为5.9％(3/51),18例BALF培养阳性,阳性率为35.3％(18/51),28例LAMP阳性,阳性率为54.9％(28/51).非肺结核组79例标本中,支气管刷检物行涂片抗酸染色及肺泡灌洗液培养均阴性,LAMP法阳性2例(1例临床诊断为肺癌,1例临床诊断为肺炎).结论 在BALF标本中,TB-LAMP法具有较高的灵敏度及特异度,对结核分枝杆菌的阳性率及阳性检出率高于罗氏固体培养,并明显高于抗酸染色法,且LAMP法具有快速、简便、准确的特点,可替代抗酸染色法用于临床上早期发现结核病患者.
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LAMP法在肺结核患者痰标本中的应用评价
目的 评价环介导等温扩增技术(LAM P)在肺结核患者痰标本中的应用.方法 收集该院2016年12月至2017年4月门诊及住院诊断为肺结核且抗结核治疗涂片阳性的患者痰标本75份、涂片阴性患者痰标本72份,每份痰标本同时进行LAMP法结核分枝杆菌复合群核酸快速检测、罗氏固体(L-J)培养,分别计算LAMP法及L-J培养的阳性率.结果 75份痰涂片抗酸染色阳性标本中,LAMP法检测阳性75份,L-J培养阳性64份,LAM P法阳性检出率[(100%)75/75]显著高于L-J培养阳性检出率[(85.3%)64/75],且差异具有统计学意义(χ2=9.09,P<0.05).72份痰涂片抗酸染色阴性标本中,LAM P法检测阳性23例,L-J培养阳性12例;与痰涂片阴性标本比较,LAM P阳性检出率[31.9%(23/72)]显著高于L-J培养阳性检出率[16.7%(12/72)],且差异具有统计学意义(χ2=6.67,P<0.05).结论 LA M P法具有较高的灵敏度及特异度,对结核分枝杆菌的阳性检出率高于痰涂片和L-J培养,且LAMP法具有快速、简便、准确的特点,可用于临床上早期发现结核病患者.
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快速检测金黄色葡萄球菌环介导等温扩增方法的建立与评价
目的：探讨环介导等温扩增技术（LAMP）作为快速检测方法对金黄色葡萄球菌快速检测的可行性和可靠性。方法建立LAMP反应体系，优化反应条件，进行灵敏度和特异度试验。结果筛选出了LAMP反应检测金黄色葡萄球菌 nuc基因的佳引物组，佳反应温度为62℃，LAMP和PCR检测 nuc基因的低检测限分别为1．47、14．7 pg／μL ，检测金黄色葡萄球菌的特异度为100％。结论 L A M P具有操作简单、敏感度高、特异性强的特点，能够满足基层实验室、应急检测或现场检测等方面的使用需求。
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环介导等温扩增技术用于消化道和呼吸道病毒检测的研究进展
消化道病毒包括肠道病毒、肝炎病毒和急性胃肠炎病毒等，可分别引起肝炎、急性胃肠炎和手足口病等疾病，呼吸道病毒是呼吸性疾病的一种病原体。据报道90％以上急性呼吸道感染是由呼吸道病毒引起的。在收集到的消化道和呼吸道标本中检测到相应病毒是诊断这类疾病的金标准，但通常阳性率较低，需要花费大量的物力和人力等资源；随后人们利用免疫学方法检测这些病毒刺激机体产生的循环抗原或循环抗体，尽管敏感性较高，但存在较多的假阳性；接着人们采用PCR方法检测这些病毒，敏感性和特异性有了较大的提高，但昂贵的PCR仪购置限制了它的广泛应用，研制新的病毒检测技术已迫在眉睫。
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LAMP法和PCR法快速检测阪崎肠杆菌的比较
[目的]建立阪崎肠杆菌环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测技术,并与PCR检测方法进行比较,为阪岐肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据.[方法]根据阪崎肠杆菌外膜蛋白OmpA基因,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术体系,并对2种方法检测的灵敏度、特异性和实际样品的检测结果进行比较.[结果]建立了优化的LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限为101 cfu/ml,PCR检测限为102 cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对36株近源菌进行特异性检测,结果显示,LAMP仅8株阪崎肠杆菌得到阳性结果,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP特异性比PCR高.应用于46份奶粉样品的检测,LAMP和PCR均有清晰、特异的预期条带和结果产生,并与常规检测结果一致.[结论]LAMP检测技术作为一种快速检测阪崎肠杆菌的方法具有简便、灵敏快速,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速检测阪岐肠杆菌的有效手段.
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环介导等温扩增技术用于消化道细菌检测的研究现状
消化道细菌是消化道疾病的一种病原体。环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新的核酸扩增技术，具有敏感性高、特异性强和简便快速等优点，可用于消化道细菌的快速诊断。本文拟就 LAMP 检测消化道细菌的研究现状加以阐述。
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因检测的LAMP方法建立
目的:探讨环介导等温扩增技术(LAMP)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) mecA特异性基因的可行性和可靠性.方法:建立LAMP反应体系,优化反应条件,进行灵敏度和特异性试验.结果:LAMP反应检测mecA基因的佳引物组为引物组2+环引物1,佳反应温度为62℃,LAMP检测mecA基因的低限为14.7 pg/μl,PCR检测mecA基因的低限为147 pg/μl(引物量与LAMP一致),敏感性较PCR高10倍.LAMP检测mecA基因的特异度为100％,假阳性率为15％,假阴性率为0.结论:LAMP是一种操作简单、检测灵敏度和特异度高的扩增方法,仅靠检测mecA基因来鉴别MRSA假阳性率高,需结合金黄色葡萄球菌特异nuc基因同时扩增鉴定效果好.
关键词： 实验室诊断 环介导等温扩增技术 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 快速检测 -
环介导等温扩增快速检测铜绿假单胞菌的研究
建立环介导等温扩增技术快速检测铜绿假单胞菌的方法。以铜绿假单胞菌特异性基因ETA为靶基因，设计特异性引物，同时对扩增条件进行优化，以41株铜绿假单胞菌测定该方法的灵敏度，并以15株其他菌株对环介导等温扩增技术方法的特异性进行检验。结果显示，建立的环介导等温扩增方法特异性好，灵敏度达到2.2 pg DNA/管。
