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宿主整合因子文献资料
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霍乱弧菌宿主整合因子β亚单位的可溶性克隆表达
目的 克隆表达霍乱弧菌全局性调节子宿主整合因子(integration host factor,IHF)β亚单位基因ihfB.方法 以C7258染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增ihfB基因,扩增产物经Nhe Ⅰ和SapⅠ酶切后克隆人表达载体pXTB1;将ihfB的N端和α亚单位基因ihfA的C端通过搭桥PCR重组,重组片段N-ihfB-C-ihfA经Nhe Ⅰ和SapⅠ双酶切后克隆入表达载体pXTB1.重组质粒导入大肠埃希菌EB2566,0.4 mmol/L IPTG诱导表达,超声裂解,上清经CBD柱吸附纯化,二硫苏糖醇(DTT)柱上裂解洗脱.结果 成功构建表达野生型ihfB基因和嵌合体N-ihfB-C-ihfA的重组表达质粒pXTB1-ihfB和pXTB1-N-ihfB-C-ihfA,并在宿主菌ER2566中诱导表达.pXTB1-ihfB为不溶性的包涵体表达,pXTB1-N-ihfB-C-ihfA为可溶性表达,并获得高纯度的表达产物.结论 克隆表达了IHF β亚单位基因ihfB,IHF-α的C端可显著提高IHF-β的可溶性,获得可溶性表达的纯化IHF-β嵌合体蛋白,为后续调控功能研究奠定了基础.
