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半夏凝集素蛋白与半夏毒针晶毒性的相关性研究
目的:研究半夏凝集素蛋白与半夏毒针晶毒性的相关性,揭示半夏产生毒性的机制.方法:采用大鼠腹腔炎症模型,以腹腔渗出液中PGE2含量为指标,研究半夏凝集素致炎作用的量-毒、时-毒曲线;采用家兔眼结膜刺激模型,以眼结膜的病理切片观察半夏凝集素与半夏毒针晶刺激性的相关性.结果:半夏凝集素可引起大鼠腹腔渗出液中PGE2、蛋白含量显著提高,呈剂量依赖性;半夏凝集素可显著加重半夏毒针晶对家兔眼结膜的刺激性,且随着半夏凝集浓度的升高,刺激性显著增强,但单给药半夏凝集素对家兔眼结膜无刺激性.结论:半夏凝集素蛋白具强烈的致炎作用.半夏产生强烈炎症刺激的机制是半夏刺入机体,凝集素蛋白随针晶进入机体组织,诱导炎症反应发生而产生刺激性.
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掌叶半夏(虎掌南星)矾制前后致炎毒性比较研究
目的:探索掌叶半夏致炎毒性及白矾炮制对其致炎作用的影响.方法:自掌叶半夏鲜品中分离毒针晶及掌叶半夏凝集素蛋白;采用整体动物及细胞水平模型,以炎症介质为指标,考察掌叶半夏毒性成分毒针晶和凝集素蛋白的致炎效应,及矾制对致炎作用的影响.结果:腹腔注射掌叶半夏毒针晶混悬液可使小鼠腹腔渗出液中炎症介质PGE2,NO含量显著增加,矾制后生品及毒针晶诱导的PGE2,NO释放显著下降;掌叶半夏凝集素蛋白刺激小鼠巨噬细胞后,在一定时间内可导致剂量依赖性的炎症因子TNF-α及IL-6含量显著增加.矾制后凝集素蛋白诱导的小鼠腹腔渗出液中PGE2含量显著下降.结论:掌叶半夏的刺激性毒性在机体表现为炎症反应,其所含的毒针晶及凝集素蛋白是其毒性成分,均可导致显著的炎症介质释放.矾制可显著降低掌叶半夏毒性成分的致炎毒性.
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牙龈卟啉单胞菌临床菌株fimA基因变异性和表达频率及其重组表达产物的致炎作用
目的了解牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)fimA基因变异性,构建fimA基因原核表达系统,鉴定其表达产物(rFimA)的致炎作用,检测FimA在Pg临床菌株中表达频率,了解FimA与慢性牙周炎的关系.方法采用高保真PCR从6株Pg临床菌株中扩增fimA基因并测定其核苷酸序列.构建fimA基因原核表达系统,制备rFimA兔抗血清.采用Western blot鉴定rFimA抗原性和免疫反应性.建立ELISA检测38株Pg临床菌株FimA表达情况和97例慢性牙周炎患者212份龈下菌斑标本中的FimA.检测rFimA诱导人脐静脉内皮EVC-304细胞分泌IL-1、IL-8、TNF-α和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的作用.结果 6株Pg临床菌株fimA基因核苷酸序列完全相同.所构建的原核表达系统rFimA产量高达细菌总蛋白的50%左右.rFimA可与Pg全菌抗血清发生结合反应,免疫家兔可获得高效价抗体.94.7%(36/38)菌株和91.5%(194/212)龈下菌斑标本ELISA结果阳性.1和10μg的rFimA作用EVC-304细胞48 h,其分泌的IL-1α水平升高(P＜0.05);但作用12 h即可出现高水平的ICAM-1(P＜0.05),未发现有诱导IL-8和TNF-α的作用(P＞0.05).结论 fimA基因序列保守,在Pg临床菌株中有很高的表达频率.rFimA有良好的抗原性和免疫反应性,可作为Pg血清学检测试剂盒和段疫苗的候选抗原.rFimA有较强的诱导细胞分泌ICAM-1的作用.
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牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导不同细胞分泌炎性细胞因子的差异性
目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(LPS),诱导人口腔上皮细胞KB和人牙龈成纤维细胞HGF-1及人单核-巨噬样细胞THP-1,分泌炎性细胞因子的能力及其差异.方法:采用酚水法提取Pg ATCC33277株的脂多糖(Pg-LPS).采用鲎试验和红外光谱对提取的Pg-LPS进行鉴定.采用ELISA试剂盒,定量检测不同浓度和时间Pg-LPS作用的上述3种细胞培养物上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8变化水平.实验中采用商品化大肠杆菌O111:B4脂多糖(E-LPS)为对照.结果:Pg-LPS和E-LPS凝固鲎试剂所需低浓度均为15 ng/ml,其红外光谱也极为相似.在Pg-LPS或E-LPS作用下,HGF-1细胞分泌的TNF-α和IL-1β水平呈单峰形增高(P<0.01),但THP-1细胞为持续性升高(P<0.01).Pg-LPS或E-LPS具有促HGF-1和THP-1细胞持续性增强IL-6分泌的作用(P<0.01).Pg-LPS和E-LPS均可诱导THP-1细胞增强IL-8的分泌(P<0.01),但对HGF-1细胞仅Pg-LPS有促IL-8分泌的效应(P<0.01).Pg-LPS和E-LPS均不能诱导KB细胞分泌上述细胞因子.结论:Pg-LPS有很强的促靶细胞分泌多种炎性细胞因子的生物学活性,从而引发初始的局部炎症反应.Pg-LPS致炎作用与E-LPS相似,但诱导不同炎性细胞因子的模式颇有差异.KB细胞不能作为LPS致炎作用的效应靶细胞.
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NLRP3炎症小体对肾脏疾病的作用研究进展
NLRP3炎症小体是一种多蛋白复合体,在肾脏相关疾病中发挥致炎作用,本文旨在探讨NLRP3炎症小体在肾脏疾病中激活的机制及其在肾脏疾病发展中起到的作用,进一步清晰地认识到NLRP3炎症小体与肾脏疾病的联系,指导药物的开发和应用.
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藤黄不同炮制品对小鼠腹腔炎症的影响
目的:研究藤黄不同炮制品对小鼠腹腔炎症的影响.方法:小鼠腹腔分别给予藤黄及其炮制品,观察不同剂量(5、10、15、20、25、30 mg/kg)、不同时间(1、2、3、4h)下,藤黄生品、藤黄高压蒸制品、藤黄豆腐制品、藤黄清水制品对小鼠腹腔渗出液中蛋白含量和炎症介质前列腺素(PG)E2含量的影响.结果:藤黄生品及各炮制品均能导致小鼠腹腔的炎症反应,当藤黄生品给药剂量为25 mg/kg、给药3h时,其所致炎症反应强；藤黄经炮制后,其致炎作用有所下降,致炎作用顺序为:藤黄生品＞藤黄豆腐制品＞藤黄清水制品＞藤黄高压蒸制品.结论:藤黄具有致炎作用,但经炮制能降低藤黄的致炎作用.
