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卵巢癌ES-2、SK-OV3和JHOS-3细胞系TSLC1基因启动子区甲基化状态与表达
TSLC1(tumor suppressor in lung cancer 1,TSLC1)属肿瘤抑制基因,研究发现,恶性肿瘤中存在TSLC1基因表达降低或缺失,并且与肿瘤侵袭转移密切相关[1];并且TSLC1基因表达缺失多与启动子甲基化状态相关[2].卵巢癌是女性常见生殖系统肿瘤,较早发生侵袭和转移,严重威胁妇女的健康.本研究旨在探讨TSLC1基因在卵巢癌细胞系中CPG位点的甲基化状态及该基因的表达情况,为寻找卵巢癌基因治疗的靶点提供理论依据.
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淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病转基因小鼠大脑皮质神经元 DMT1、FPN1的影响
目的::观察淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病APPswe/PS1△E9双转基因小鼠模型大脑皮质神经元DMT1、FPN1表达情况的影响,探讨淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病小鼠大脑皮质的保护作用及其机制。方法:6月龄雄性APPswe/PS1△E9双转基小鼠60只,随机分为6组,模型组、淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组、DFO组,每组各10只。6月龄雄性C57 BL/6 J小鼠10只作为正常对照组。淫羊藿组小鼠灌胃给予淫羊藿苷水溶液,黄芪组灌胃给予黄芪甲苷水溶液,葛根组灌胃给予葛根素水溶液,复方组灌胃给予淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方,DFO组肌肉注射DFO,模型组和阴性对照组小鼠灌胃给予等量生理盐水。连续给药3个月,取各组小鼠脑组织,分别采用免疫组织化学、Real time PCR和Western方法检测各组小鼠大脑皮质DMT1和FPN1的表达情况。结果:免疫组织化学结果显示:阴性对照组均未见DMT1及FPN1阳性细胞。与正常对照组相比,模型组DMT1的表达增高,模型组FPN1的表达降低;与模型组相比,复方组和DFO组DMT1的表达降低,模型组和DFO组FPN1的表达增高;与DFO组相比,复方组DMT1和FPN1的表达无明显差异。 Real time PCR结果、Western结果与免疫组化结果相一致。结论:应用淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以下调AD小鼠大脑皮质DMT1的表达,上调AD小鼠大脑皮质FPN1的表达,从而抑制AD小鼠脑铁超载,缓解铁超载带来的中枢神经系统功能衰退。
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大鼠肝脏 X受体在低雌激素状态下对肝脏脂肪代谢的作用
目的::肝脏X受体是核受体超家族成员之一,可以调控机体的新陈代谢、发育增殖以及炎症反应,在肝脏的脂肪代谢中起重要作用。旨在观察卵巢被切除的情况下大鼠肝脏内脂质含量以及肝脏X受体在肝脏的表达情况,并调查更年期肥胖的可能机制。方法:用28只大鼠,随机分为4组:SHAM组、OVX组、OVX+E2组、OVX+iCR组,每组7只。卵巢切除术后,给予大鼠相应药物4周。通过油红O染色、免疫组织化学染色以及Western Blot的方法,观察大鼠肝脏组织切片以及相关蛋白表达。结果:OVX脂滴数量增加,在OVX+E2组和OVX+ICR组表达有所下降;大鼠肝脏X受体在OVX组表达降低,并在OVX+E2组和OVX+iCR组表达有所增加,但仍低于SHAM组。肝脏X受体可能是更年期肥胖的重要机制之一。
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纯化和标记抗人轻链β2m的单克隆抗体在细胞表面HLA-Ⅰ类分子检测中的应用
HLA-Ⅰ类分子在单个核细胞(PBMC)表面表达丰富,HLA-Ⅰ类分子除了参与全身免疫应答外,还有调节免疫和参与免疫细胞分化的作用.研究表明,PBMC的HLA-Ⅰ类分子在细胞免疫中发挥着极为重要的作用,其表达降低可能会减弱机体对肿瘤细胞的杀伤力,从而导致肿瘤细胞逃避机体免疫监视[1].
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实验性大鼠肝纤维化TGFβ1及其受体mRNA与Smad3,7的表达
目的:研究四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子pl(TGFβ1)及其Ⅰ,Ⅱ型受体(TGFR)、Smad3、Smad7的定位及表达.方法:将24只大鼠随机分为正常对照组与模型组,模型组大鼠予以40%四氯化碳皮下注射8 wk后处死.RT-PCR检测肝组织TGFβ1,TGFR Ⅰ与TGFRⅡ;免疫组化技术检测TGFβ1,Smad3,Smad7在肝脏的表达及细胞内的定位;放射免疫方法检测透明质酸,肝组织病理检查.结果:与正常组大鼠比较,RT-PCR显示模型组大鼠肝内TGFβ1、TGFR Ⅰ与TGFRⅡmRNA表达明显增高;免疫组化结果显示TGFβ1与Smad3表达增加,而Smad7的表达降低,TGFβ1与Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞质,Smad7主要在肝细胞质表达(正常组与模型组大鼠TGFβ1、Smad、Smad7平均光度分别0.61±0.33与1.57±0.53,0.248±0.042与0.785±0.904,4.674±1.143与0.470±0.097,P<0.05);模型组大鼠血清透明质酸水平明显增高(正常组大鼠78.4±19.2 μg/L,模型组263.2±107.0 μg/L,P<0.01),肝组织HE染色支持肝纤维化改变.结论:肝内TGFβ1,TGFR Ⅰ,TGFRⅡ,Smad3表达增强、Smad7表达减弱,提示TGFβ1及其受体与Smad信号通道蛋白参与了肝纤维化的发生发展,可作为防治肝纤维化发生发展的新途径之一.
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肝硬变大鼠肝部分切除术后残肝TGF-α、HGF、PCNA和IGFBP-1s mRNA的变化
目的:探讨肝硬变状态下肝部分切除术后肝细胞和KCTGF-α、HGF、PCNA和IGFBP-1s的mRNA表达,进一步阐明KC在肝细胞再生中的作用.方法:复制我们建立的大鼠肝硬变肝切除模型,分离肝细胞和KC,提取RNA,采用Northern杂交.结果:KC其HGF mRNA表达较肝细胞为早,在术后6 h点达到高峰.但肝细胞TGF-αmRNA表达含量明显高于KC的表达.肝细胞IGFBP-1s mRNA的表达含量低,术后6 h点相对较高.KCIGFBP-1s mRNA未见表达.肝细胞PCNA mRNA的表达在术后6 h其含量达到低点,明显受抑制.结论:HGF和TGF-αmRNA表达与肝硬变大鼠的肝细胞再生密切相关,而TGF-α是肝细胞再生中重要的物质.IGFBP-1s mRNA表达降低反应了肝硬变大鼠术后肝细胞代谢明显受损,而PCNA mRNA表达可提示肝细胞增生能力.
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丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白5反式调节基因的筛选
目的:应用基因表达谱芯片技术研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白5的反式调节基因.方法:以分子生物学技术构建NS5ATP5的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP5,以表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ATP5转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA.应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染NS5ATP5后,有17条基因表达增强,12条基因表达降低.结论:成功筛选了NS5ATP5的反式调节基因,为进一步阐明NS5ATP5的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.
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细胞黏附对结肠癌细胞凋亡及化疗敏感性的影响
目的:研究结肠癌细胞株与基质黏附对肿瘤细胞凋亡及药物敏感性的影响.方法:应用MTT法研究细胞与基质成分纤维粘连蛋白(FN)结合对药物敏感性的影响;采用TUNEL法检测细胞凋亡,采用流式细胞术观察Bcl-2和Bax基因表达.结果:HT29细胞与FN结合后,其耐药性明显增加(抑制率为12.2%,对照组为53.0%,P<0.01),用抗β-1整合素抗体阻断其与FN结合,其对药物的敏感性又恢复至对照水平(抑制率为50.6%,与对照组比P<0.05);HT29细胞与FN结合后,Bcl-2基因蛋白表达上升(62.1%),Bax表达降低(12.86%),凋亡率(8.75±1.08%)显著降低,对照组为(19.46±1.08%);阻断其与FN结合,Bcl-2表达明显下降(22.68%),而Bax表达上升(73.8%),凋亡率也升至(18.9±1.4%)(与对照组比P<0.05).结论:肿瘤细胞与基质成分结合可上调Bax和下调Bcl-2基因表达,增强肿瘤细胞的抗凋亡能力,从而增加肿瘤耐药性.
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应用基因表达谱芯片技术筛选NS4ATP2蛋白反式调节基因
目的:对丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCV NS4A)反式激活新基因NS4ATP2转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能.方法:应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-NS4ATP2和pcDNA3.1(-)空载体分别转染的HepG2细胞的mRNA的差异性表达进行检测.结果:基因表达谱芯片所检测的1152条目的基因均为GenBank中登录的基因,NS4ATP2表达质粒转染的细胞有29条差异表达基因,其中12条基因表达增强,17条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、肿瘤的发生密切相关.结论:基因表达谱芯片技术对于初步探索新基因的功能提供重要的资料.本实验结果为进一步阐明NS4ATP2生物学功能及HCV-NS4A的致病机制提供了理论依据.
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应用表达谱芯片技术研究NS5ATP13的反式调节基因
目的:应用基因表达谱芯片研究HCV非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP13的反式调节基因.方法:构建NS5ATP13基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP13,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-NS5ATP13转染的人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染NS5ATP13后,有86条差异基因表达,其中46条基因表达增强,40条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化及细胞的信号转导、代谢、凋亡密切相关.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了NS5ATP13的反式调节基因,为进一步阐明NS5ATP13的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.
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肠癌细胞BAI1基因表达的检测及其抗肿瘤作用
目的:探讨大肠癌细胞和组织中BAI1基因的表达情况及BAI1对血管和肿瘤生长的抑制作用.方法:提取大肠癌细胞总RNA,按RT-PCR试剂盒的步骤反转录成cDNA,PCR产物行20 g/L脂糖凝胶电泳分析.BAI1对血管和肿瘤生长的抑制作用应用微血管数量(MWQ)和肿瘤移植实验的方法进行.结果:大肠癌细胞、癌组织中大多数BAI1不表达或表达下降,在全部转移的淋巴结中不表达,在小鼠CC95大肠癌细胞移植肿瘤内注射Ad-hBAI1表达载体可以有效的影响肿瘤的血管生成(P<0.05),并抑制肿瘤的生长(P<0.01).结论:BAI1在肠癌细胞、组织及转移的淋巴结中表达降低,该Ad-hBAI1表达载体可抑制肿瘤新生血管的形成并抑制肿瘤的生长.
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基因表达谱芯片技术筛选HCTP4反式调节基因
目的:应用基因表达谱芯片研究丙型肝炎病毒核心(HCVcore)蛋白的反式调节基因HCTP4作用的靶基因.方法:构建HCTP4基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HCTP4,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-HCTP4转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体的相同细胞差异表达的mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染HCTP4后,有104条差异基因表达,其中54条基因表达增强,50条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化及细胞的信号转导密切相关.结论:HCTP4是一种病毒反式激活蛋白,对于肝细胞基因表达谱有显著影响,与细胞的增生、分化及细胞的信号转导密切相关,在HCV的致病过程中有重要作用.
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应用基因表达谱芯片技术克隆甘草甜素诱导Jurkat细胞后的差异表达基因
目的:应用基因芯片技术,阐明甘草甜素作用于T淋巴细胞之后,甘草甜素对于T淋巴细胞基因表达谱的影响.方法:应用基因表达谱芯片技术,对甘草甜素诱导的Jurkat细胞和以生理盐水处理的相同细胞的mRNA进行差异显示分析,研究甘草甜素诱导人T淋巴细胞系Jurkat细胞后的差异表达基因.结果:Jurkat细胞经甘草甜素诱导后,所检测的1152条目的基因中有30条产生差异表达,其中12条基因表达增强,18条基因表达降低.表达增强的基因主要有:胸腺素及促胸腺生成素蛋白编码基因;白介素-18(IL-18);细胞代谢相关酶类.表达降低的基因主要有:细胞信号转导相关基因(如血清/糖皮质激素调节激酶、丝裂素活化的蛋白激酶激酶激酶2、磷脂酶2调节亚基β、鸟嘌呤核苷结合蛋白、神经营养的酪氨酸激酶3型受体等);La自身抗原.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了甘草甜素诱导T淋巴细胞后差异表达基因,为进一步阐明甘草甜素的免疫调节机制及深入了解甘草甜素用于防治病毒性肝炎的药理作用机制提供依据.
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应用表达谱芯片技术筛选NS5ATP9反式调节基因的研究
目的:应用基因表达谱芯片技术研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9(NS5ATP9)的反式调节基因.方法:构建NS5ATP9基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP9,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-NS5ATP9转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体pcDNA3.1(-)的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染NS5ATP9后,有16条差异基因表达水平发生显著改变,其中3条基因表达增强,13条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化、凋亡及细胞的信号转导密切相关.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了丙型肝炎病毒NS5ATP9作用HepG2细胞后差异表达基因,为阐明NS5ATP9的作用提供了新的依据.
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应用表达谱芯片技术对截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白反式调节基因的研究
目的:应用基因表达谱芯片研究乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原截短型中蛋白(MHBst)的反式调节基因.方法:构建MHBst基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-MHBst,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-MHBst转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染MHBst后,有37条差异基因表达,其中14条基因表达增强,23条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化及细胞的信号转导密切相关.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了乙型肝炎病毒表面抗原截短型中蛋白的反式调节基因,为进一步阐明乙型肝炎病毒表面抗原截短型中蛋白的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.
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应用表达谱芯片技术对NS5ATP7反式调节基因的研究
目的:应用基因表达谱芯片研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白7(human gene 7 transactivated bynonstructural protein 5A of hepadtis C virus,HCV NS5ATP7)的反式调节基因.方法:构建NS5ATP7基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP7,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-NS5ATP7转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体pcDNA3.1(-)的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染NS5ATP7后,有12条差异基因表达,其中4条基因表达增强,8条基因表达降低.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了NS5ATP7的反式调节基因,为进一步阐明NS5ATP7的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.
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应用表达谱芯片技术对丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式调节基因的研究
目的:应用基因表达谱芯片研究丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)的反式调节基因.方法:构建NS5A基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5A,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-NS5A转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染NS5A后,有54条差异基因表达,其中28条基因表达增强,26条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化及细胞的信号转导密切相关.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了丙型肝炎病毒非结构蛋白5A的反式调节基因,为进一步阐明丙型肝炎病毒非结构蛋白5A的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.
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TNF-α影响肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白的表达
目的:探讨肿瘤坏死因子(TNF-o)对肠黏膜上皮细胞间紧密连接的影响.方法:应用免疫荧光方法检测在肿瘤坏死因子(TNF-α)0,50,100和200 μg/L作用下,与结肠癌上皮细胞株(CaCo2细胞株)共同培养24 h,以及用TNF-α100μg/L与CaCo2细胞共同培养0,4,8和24 h,观察TNF-α对紧密连接蛋白(zonula occluden 1,ZO-1)表达的影响.并应用半定量RT-PCR方法检测TNF-α用上述相应的时间和浓度作用后对肠黏膜上皮细胞ZO-1 mRNA表达的影响.结果:用TNF-α100和200μg/L作用24h后ZO-1的免疫荧光明显减少,并呈剂量依赖性;用TNF-α 100 μg/L作用24 h时ZO-1免疫荧光明显减少,并呈时间依赖性.应用半定量RT-PCR的方法检测结果:TNF-α作用24 h时,ZO-1 mRNA从TNF-α 0 μg/L的1.1926降至100 μg/L的0.7834和200 μg/L的0.7081;TNF-α100 μg/L作用4 h,ZO-1mRNA为(95.5±5.5%);8 h为(82.0±5.4%);24 h降至低为(67.7±5.7%),与对照组相比P<0.01.结论:TNF-α是通过抑制肠上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1表达引起肠黏膜上皮细胞间紧密连接破坏.并且是通过抑制ZO-1 mRNA引起肠上皮细胞ZO-1蛋白表达降低.
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胃癌组织中生长抑素及其受体的表达及与Ki67的相关性
目的:探讨生长抑素(SS)及其受体(SSTR-1,SSTR-2)和Ki67在胃癌发生、发展中的作用及其相关性.方法:对病理确诊的100例胃组织标本,其中胃良性组织(NG,28例)、重度不典型增生(GSAH,12例)及胃癌(GC,60例),采用免疫组化二步法进行SS、SSTR-1、SSTR-2和Ki67染色.染色后按着色细胞百分数进行评分判定.用Kruskal Wallis检验、秩和检验及等级相关分析进行统讲学处理.结果:SSTR-1,SSTR-2和Ki67在三种组织中的表达存在显著性差异(SSTR-1: X2=9.11,P=0.011,SSTR-2:X2=9.99,P=0.007,Ki67:X2=35.76,P=0.000);SS在胃癌组织中的表达较其余两组有降低趋势;SSTR-1在胃重度不典型增生组织中的表达与其余两组间存在显著性差异(GSAHvsGC,平均秩=25.37,P<0.05,GASHvs NG,平均秩=23.47,P<0.05);SSTR-2在胃癌组织与胃良性组织中存在显著性差异(平均秩=11.96,P<0.05);Ki67在胃良性组织中的表达与胃癌组织和胃重度不典型增生组织比较均存在显著性差异(GC vs NG,平均秩=37.65,P<0.01,GASH vs NG,平均秩=23.68,P<0.05).胃癌SS,SSTR-1,SSTR-2和Ki67的表达与胃癌分化类型、胃癌分期、是否伴有浆膜浸润及淋巴结转移不同组间均无显著性差异;但SS胃癌分化差者,SS表达降低.除在胃重度不典型增生组织中Ki67与SS无相关外,Ki67与各指标间在各种组织中的表达均存在显著正相关(P<0.01).结论:SS,SSTR-1,SSTR-2和Ki67在胃癌的发生、发展中相互作用,可作为胃癌的生物学行为指标.
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幽门螺杆菌相关性胃疾病胃蛋白酶原C的表达研究
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)相关性胃疾病胃蛋白酶原C的表达及其意义.方法:采用免疫组织化学染色法检测318例胃黏膜标本中胃蛋白酶原C的表达情况;采用HE染色、ELISA及PCR方法检测Hpylori感染情况.结果:Hpylori阳性组浅表性生胃炎胃蛋白酶原C抗原的过表达率高于Hpylori阴性组(P<0.05,X2=0.032,28/33vs15/25),Hpylori阳性组萎缩性胃炎胃蛋白酶原C的表达率低于Hpylori阴性组(P<0.01,X2=0.003 4/61 vs9/30),Hpylori阳性组的异型增生和胃癌胃蛋白酶原C的表达率与Hpylori阴性组相比有下降趋势(P>0.05).结论:Hpylori感染与胃蛋白酶原C的表达密切相关,在胃黏膜炎症中胃蛋白酶原C的表达增加;在萎缩性胃炎、异型增生和胃癌中胃蛋白酶原C的表达降低.