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米非司酮对早孕蜕膜组织中IV型胶原及纤维粘连蛋白的影响
目的：探讨米非司酮(Ru 486)对早孕蜕膜组织中IV型胶原、纤维粘连蛋白(FN)的影响，进一步认识米非司酮的抗早孕机理。方法：孕<60 d妇女，随机分为对照组和药物组。药物组口服米非司酮总量为150 mg。采用免疫组织化学(ABC)法测定早孕蜕膜组织IV型胶原(对照组15例，药物组20例)和纤维粘连蛋白(对照组25例，药物组30例)的分布状况。结果：与对照组相比，药物组早孕蜕膜组织中IV型胶原、FN均明显减少(P<0.01,P<0.05)。尤其是 IV型胶原在腺体基膜，FN在蜕膜细胞间质中降低为明显(P<0.01)，上皮基膜、血管周围IV型胶原含量也明显降低(P<0.05)。结论：米非司酮明显影响早孕蜕膜组织中这两种细胞外基质(ECM)的含量及分布，可使IV型胶原、FN的含量减少，而起到抗早孕作用。早孕蜕膜组织中这两种ECM成分可能受孕激素及糖皮质激素的调控。
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米非司酮对早孕蜕膜组织中IV型胶原及纤维粘连蛋白的影响
目的：探讨米非司酮(Ru 486)对早孕蜕膜组织中IV型胶原、纤维粘连蛋白(FN)的影响，进一步认识米非司酮的抗早孕机理。方法：孕<60 d妇女，随机分为对照组和药物组。药物组口服米非司酮总量为150 mg。采用免疫组织化学(ABC)法测定早孕蜕膜组织IV型胶原(对照组15例，药物组20例)和纤维粘连蛋白(对照组25例，药物组30例)的分布状况。结果：与对照组相比，药物组早孕蜕膜组织中IV型胶原、FN均明显减少(P<0.01,P<0.05)。尤其是 IV型胶原在腺体基膜，FN在蜕膜细胞间质中降低为明显(P<0.01)，上皮基膜、血管周围IV型胶原含量也明显降低(P<0.05)。结论：米非司酮明显影响早孕蜕膜组织中这两种细胞外基质(ECM)的含量及分布，可使IV型胶原、FN的含量减少，而起到抗早孕作用。早孕蜕膜组织中这两种ECM成分可能受孕激素及糖皮质激素的调控。
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胚泡表面LeY寡糖对小鼠胚泡纤维粘连蛋白、层粘连蛋白表达及分泌的影响
目的体外观察LeY寡糖对着床前小鼠胚泡细胞外基质(ECM)主要成分纤维粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的表达和分泌的影响. 方法采用特异性单克隆抗体AH6阻断胚泡表面LeY寡糖,运用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法检测LeY寡糖对着床前小鼠胚泡FN及LN的表达和分泌的影响. 结果在体外培养中,经AH6封闭胚泡表面LeY寡糖抗原后仅1.5 h,胚泡FN及LN的分泌有明显升高(P<0.01),并且持续6 h以上,而胚泡FN及LN的基因转录表达变化不明显(P>0.05). 结论胚泡表面的LeY寡糖抗原对着床前胚泡的FN及LN的分泌具有促进作用.
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纤维粘连蛋白在胚胎着床中的作用
近年来,由于发现细胞外基质(ECM)成分与细胞的生长和分化等生命活动密切相关,使ECM成为细胞生物学和发育生物学研究的热点.纤维粘连蛋白(FN)作为ECM的重要组成成分,也受到发育生物学界的重视.本文主要从FN的分子结构、受体以及与生殖相关的生物学功能作一综述,着重论述FN及其它ECM成分与着床相关因子之间的影响.
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芪蓟肾康方对AngII所致大鼠肾小球系膜细胞增殖变化中JNK-AP1影响
目的：探讨芪蓟肾康方通过JNK信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞，用血管紧张素Ⅱ刺激系膜细胞增生，给予芪蓟肾康方黄酮干预，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肾小球系膜细胞上清液 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、活化蛋白1（AP-1）、纤维粘连蛋白（FN）蛋白表达；实时定量 PCR 法检测 JNK、AP-1 mRNA 的表达。结果：与正常组比较，模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显升高（P约0.05或 P约0.01）；与模型组比较，治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显降低（P约0.05或 P约0.01）。与正常组比较，模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA 表达明显升高（P约0.05或 P约0.01）；与模型组比较，治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA明显降低（P约0.05）。结论：芪蓟肾康方可以通过下调肾小球系膜细胞JNK、AP-1 mRNA及蛋白的表达水平，抑制 JNK 信号转导，降低 AP-1的活性，减少 FN 的增殖，从而减轻 GMC 增生，延缓肾小球的损伤，防止肾小球的硬化。
关键词： c-Jun氨基末端激酶 活化蛋白1 纤维粘连蛋白 血管紧张素Ⅱ -
芪蓟多糖通过抑制 NF -κB 信号通路影响大鼠肾小球系膜细胞增殖变化
目的：探讨芪蓟多糖通过 NF -κB 信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞，用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激系膜细胞增生，分别给予氯沙坦和芪蓟多糖，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肾小球系膜细胞上清液转化生长因子β活化激酶1（TAK1）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）、核因子（NF -κB）和纤维粘连蛋白（FN）表达；实时定量 PCR 法检测 TAK1、NF -κB 的表达。结果 ELISA 法对 OD 值的测定，与正常组比较，模型组、芪蓟肾康方多糖高剂量组和低剂量组、氯沙坦组大鼠肾小球系膜细胞中 TAK1、TRAF6、NF -κB 和 FN 表达均升高且有明显差异（P ﹤0.05，P ﹤0.01）；与模型组比较，芪蓟肾康方多糖高剂量组和低剂量组、氯沙坦组可降低 NF -κB 信号转导中各靶点 TAK1、TRAF6、NF -κB 及 FN 的表达，且有明显差异（P ﹤0.01）。实时定量 PCR 法检测，与正常组比较，模型组及芪蓟肾康方多糖高剂量组和低剂量组大鼠肾小球系膜细胞中 TAK1、NF -κB 表达升高，且有明显差异（P ﹤0.05）；与模型组比较，芪蓟肾康方多糖高剂量组和低剂量组大鼠肾小球系膜细胞中 TAK1、NF -κB 明显降低（P ﹤0.05）。在 NF -κB 表达中，芪蓟肾康方多糖高剂量组和低剂量组组间比较无明显差异（P ﹥0.05）。结论芪蓟多糖可能通过下调肾小球系膜细胞 NF -κB mRNA 及 TAK1、TRAF6、NF -κB 和 FN 蛋白表达的水平，抑制核因子信号转导通路的兴奋性，缓解 NF -κB 的释放，减少 FN 的过度表达，从而减轻细胞外基质（ECM）的分泌，降低肾小球的损伤，减缓肾小球的硬化。
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健脾化湿解毒方治疗尿酸刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖、纤维化的研究
目的：研究健脾化湿解毒方含药血清对尿酸刺激下大鼠肾小球系膜细胞的增殖、纤维化相关因子表达的影响。方法：①将肾小球系膜细胞株（GMC）加入含有UA300μmol/L的培养液中；②分别加入含有别嘌醇（西药对照组）及健脾化湿解毒方的含药血清（中药治疗组）于细胞中；③用Cell Counting Kit观察各组别细胞的活性；用Western Blot检测细胞蛋白中磷酸化细胞外蛋白调节激酶（p-ERK）的含量；用共聚焦及Real-Time PCR检测细胞中纤维粘连蛋白（FN）的表达及分布情况，观察健脾化湿解毒方对于尿酸刺激下肾小球系膜细胞的增殖、纤维化是否具有保护作用。结果：尿酸300μmol/L刺激GMC后，细胞活性（CCK8）明显下降，p-ERK通路表达明显升高，细胞中FN的表达升高；在加入含别嘌醇及健脾化湿解毒方的含药血清后，细胞活性（CCK8）被进一步遏制；p-ERK通路与空白对照组相比并无明显差异。结论：健脾化湿解毒方的含药血清能降低经尿酸刺激后FN的分泌。
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生物材料及细胞外基质与骨形成研究进展
骨修复一直是骨科界的难题之一,许多学者进行了相关研究.近二十多年来,随着生物化学和分子生物学研究的发展,发现细胞的附着与细胞表面的受体及细胞外基质表面的特定位点有关,成骨细胞成骨活性与细胞外基质(extracellar matrix,ECM)有着密切的相关性,ECM的成分包括有机和无机成分两类,对骨形成起着主要作用的有骨形态蛋白(bone morphgenetic proteins,BMP),纤维粘连蛋白(fibronectin,FN),层粘蛋白(laminin,LN),波基结合素(vitronectin,VN)等.在骨形成的各个时期均有生长因子参与调节,如胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ,β-转化生长因子,酸、硷成纤维细胞生长因子,血小板衍生生长因子等多种骨原性生长因子.其中β-转化生长因子(transforming growth fator β,TGF-β)尤其引人注目[1].另外,硷性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP),骨钙素(osteonectin,OC)及Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ)也来源于骨组织细胞的代谢物质,贮存于骨基质中.生物活性材料作为细胞外基质载体也是目前研究的热点,本文就部分生物材料及细胞外基质与骨形成的研究作一综述性报道.
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缺氧大鼠肺内动脉壁FN及LN的改变
目的 利用大鼠常压缺氧模型，采用形态计量学方法，系统观察缺氧大鼠肺动脉壁FN及LN的改变，进一步探讨缺氧性肺血管组织重建的机制。 方法 利用常压缺氧舱建立大鼠缺氧模型，取肺分别进行免疫组织化学染色和电镜观察。 结果 缺氧后肺动脉壁上FN及LN均增加，这一变化在缺氧7d时明显，且FN增加的程度及含量远远高于LN。电镜观察显示，肺动脉中膜平滑肌细胞有由收缩表型转化为合成表型的倾向。 结论 肺动脉壁上FN及LN增加，不仅可以增加血管紧张性及血管壁厚度，同时也为诱导中膜平滑肌细胞表型转换及增生提供了条件。
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牙髓牙本质复合体纤维粘连蛋白的免疫组织化学研究与定量分析
目的研究纤维粘连蛋白在牙髓牙本质复合体内的表达,探讨其分布与功能间的关系. 方法免疫组织化学染色与图像定量分析.结果纤维粘连蛋白免疫反应(-IR)普遍存在于牙髓、前期牙本质和成熟牙本质的牙本质小管与成牙本质细胞突起,以成牙本质细胞层,牙髓血管与神经周围为丰富.冠髓和冠部牙本质纤维粘连蛋白的积分光密度分别为:0.49±0.33,0.50±0.29;线密度分别为:38.44±20.7,19.34±18.72;体密度分别为:24.56±10.8,44.52±28.5. 结论纤维粘连蛋白-IR不仅见于牙髓与前期牙本质,而且也见于成熟牙本质的牙本质小管与成牙质细胞突起,它对维持牙髓牙本质复合体各结构的正常位置,形态和防止炎症扩散可能发挥了重要作用.
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含RGD三肽的骨基质非胶原蛋白在骨质疏松症中的研究进展
骨基质非胶原蛋白是对于骨的生长、再生、发育等有重要作用的蛋白质,其中包含一类在结构上都含有RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)三肽的蛋白.近来研究表明,RGD蛋白在骨基质的形成、矿化,以及介导细胞.细胞、细胞-基质的相互作用中发挥关键作用.本文对骨基质中主要的RGD蛋白的骨生物活性,以及与骨质疏松症关系方面的新研究进展作一简述.
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AngⅡ、TGF-β1和FN对自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞合成胶原的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子β1（TGF-β1）、洛沙坦（Losartan）、纤维粘连蛋白（FN）对培养的SHR和WKY大鼠心肌成纤维细胞（CFb）合成胶原的影响。方法 采用组织块贴壁法培养CFb，分别测定AngⅡ、TGF-β1、Losartan、FN干预下CFb的 3H-脯氨酸（ 3H-Proline）掺入量。结果 AngⅡ、TGF-β1、FN促进CFb的 3H-Proline掺入量，Losartan抑制10-7M AngⅡ诱导的CFb的 3H-Proline掺入。结论 AngⅡ、TGF-β1、FN对CFb的胶原合成有促进作用，Losartan可拮抗AngⅡ的作用。
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JNK信号通路在大肠癌侵袭和转移中的作用及机制
目的:观察c-Jun氨基末端激酶(c-jun-N-terminal kinase,JNK)信号通路的活化对大肠癌细胞运动、侵袭的影响,并探讨大肠癌转移可能的分子机制.方法:LoVo细胞无血清饥饿24 h同步化后,对照组无纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)干预,FN组给予FN 10,20,40 mg/L,24 h干预.JNK抑制剂组给予FN 40 mg/L+SP600125(20,40μmol/L)干预24 h.用Boyden小室法检测其体外运动和侵袭能力.Western blot法检测JNK磷酸化和MMP-9蛋白质表达.结果:FN可剂量性增加LoVo细胞运动和侵袭细胞数,SP600125能明显减少FN诱导的细胞运动和侵袭力.与对照组相比,FN 40 mg/L干预时P-JNK和MMP-9明显增高(38.39%±5.97% vs 28.61%±4.19%;58.25%±6.53% vs 33.43%±2.05%,均P<0.01).与FN 40 mg/L组相比,SP600125 40 μmol/L能明显抑制p-JNK和MMP-9蛋白的表达(29.59%±2.17% vs 38.39%±5.97%,36.69%±4.20% vs 58.25%±6.53%,均P<0.01).结论:大肠癌细胞JNK磷酸化可激活其下游成员使大肠癌基质金属蛋白酶的分泌增加,导致大肠癌细胞的运动和侵袭力增加,终促进癌细胞的转移.
关键词： 大肠癌 侵袭 转移 c-Jun氨基末端激酶 纤维粘连蛋白 -
细胞黏附对结肠癌细胞凋亡及化疗敏感性的影响
目的:研究结肠癌细胞株与基质黏附对肿瘤细胞凋亡及药物敏感性的影响.方法:应用MTT法研究细胞与基质成分纤维粘连蛋白(FN)结合对药物敏感性的影响;采用TUNEL法检测细胞凋亡,采用流式细胞术观察Bcl-2和Bax基因表达.结果:HT29细胞与FN结合后,其耐药性明显增加(抑制率为12.2%,对照组为53.0%,P＜0.01),用抗β-1整合素抗体阻断其与FN结合,其对药物的敏感性又恢复至对照水平(抑制率为50.6%,与对照组比P＜0.05);HT29细胞与FN结合后,Bcl-2基因蛋白表达上升(62.1%),Bax表达降低(12.86%),凋亡率(8.75±1.08%)显著降低,对照组为(19.46±1.08%);阻断其与FN结合,Bcl-2表达明显下降(22.68%),而Bax表达上升(73.8%),凋亡率也升至(18.9±1.4%)(与对照组比P＜0.05).结论:肿瘤细胞与基质成分结合可上调Bax和下调Bcl-2基因表达,增强肿瘤细胞的抗凋亡能力,从而增加肿瘤耐药性.
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食管鳞癌组织Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白表达的临床意义
目的:食管癌的发生、发展和预后虽与多种因素有关,但未定论.癌间质是影响癌临床行为的重要因素,Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白(FN)是肿瘤基质的主要成分.我们研究了Ⅲ型胶原和FN在食管癌组织的表达及其临床意义.方法:食管鳞癌手术切除存档蜡块标本102例,用免疫组化方法观察FN和Ⅲ型胶原在食管鳞癌组织中的分布特征,并和食管鳞癌临床特征诸如淋巴结转移、肿瘤浸润深度、癌分化程度、临床TNM分期作对比分析.结果:食管鳞癌组织中Ⅲ型胶原主要分布于癌细胞质,阳性率71.6%,其次分布于间质,呈纤维状.FN分布于癌间质呈纤维状包绕癌巢,阳性率73%;淋巴结转移组FN阳性率63%,而无淋巴结转移组阳性率83%(P＜0.05),表明FN阳性的食管鳞癌不易发生淋巴结转移.结论:食管鳞癌细胞具有产生Ⅲ型胶原的能力.FN对癌的扩散可能有限制作用.
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调脂治疗对OLETF大鼠肾脏的保护作用
目的观察不同病程脂毒性肾损害作用及调脂治疗对OLETF大鼠肾脏保护作用.方法8周OLETF大鼠20只,随机分为非诺贝特治疗组和未治组,LETO大鼠10只为正常对照组.每日分别以20 mg/k的非诺贝特及等量的蒸馏水灌胃,8、16、24周行OGTT,测定血糖、血脂及24 h尿白蛋白(24 h UAlb).16、24周分批处死动物,肾脏标本行PAS染色,免疫组化法检测TGF-β1、VEGF、纤维黏连蛋白(FN)表达.电镜观察GBM厚度及系膜区变化.结果(1)16、24周未治组和治疗组FBG及2 hBG差异无统计学意义;(2)随周龄增加未治组TG、LDL-C升高,HDL-C降低,治疗组TG明显下降,HDL-C升高,LDL-C无明显变化;未治组24 h UAlb显著增加,24周未治组显著高于治疗组;(3)光镜显示24周未治组TGF-β1、VEGF和FN表达均强于治疗组;(4)电镜示24周未治组GBM明显变厚,系膜区增宽,治疗组上述病变显著改善.结论(1) OLETF大鼠脂代谢紊乱发生在糖代谢紊乱之前;(2)随周龄增加,OLETF大鼠脂代谢紊乱加重,伴24 h UAlb增加,肾小球肥大,GBM增厚,ECM增生等肾损害表现;(3)在糖代谢紊乱未能改善的情况下,纠正脂代谢紊乱显示明显的肾脏保护作用;(4)调脂治疗保护肾脏的机制与减少TGF-β1和VEGF表达有关.
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硫化氢对糖尿病大鼠肾脏病变的减缓作用
目的 内源性硫化氢(H_2S)干预对糖尿病肾病大鼠肾小球病变的影响. 方法 把SD大鼠随机分成4组.建立糖尿病大鼠模型后,其中2组分别给以硫氢化钠和DL-propargylglycine治疗8周.免疫组化法检测肾组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及纤维粘连蛋白(FN)分布及含量的变化. 结果 与H_2S组相比,糖尿病大鼠肾脏中α-SMA和FN的分布范围广泛,含量明显增加(P<0.01). 结论 外源性H_2S干预能够减缓糖尿病大鼠肾小球病变的进展.
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纤维粘连蛋白使骨肉瘤细胞逃避Anoikis凋亡
骨肉瘤发生转移的一个重要原因是肿瘤细胞可以脱离细胞外基质(extracellular matrix, ECM)存活并移动,而正常细胞在脱离与 ECM 的接触后会发生Anoikis凋亡[1,2].我们对纤维粘连蛋白(fibronectin,FN) 在人骨肉瘤细胞逃避Anoikis 凋亡过程中的作用机制进行了研究.
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重组人血管内皮抑素对人结肠癌淋巴管内皮细胞成管抑制作用机制的探讨
目的:研究重组人血管内皮抑素(商名品:恩度)是否可通过抑制结肠癌细胞EDA表达从而影响结肠癌淋巴管生成.方法:分别用单纯培养和经重组人血管内皮抑素处理的SW480细胞培养上清液处理人淋巴管内皮细胞(hLECs),三维培养观察hLECs体外成管能力的差异,蛋白质印迹法检测hLECs中integrin a9的表达差异.结果:SW480细胞高表达EDA蛋白片断,重组人血管内皮抑素呈浓度依赖性地抑制EDA片断在SW480中的表达.单纯培养的SW480培养上清液(条件培养基I)可促进hLECs体外成管,SW480经重组人血管内皮抑素处理后其培养上清液(条件培养基Ⅱ)促hLECs体外成管的效应被削弱,hLECs小管形成数量明显减少,各实验组小管形成数量差异有统计学意义,P＜0.01.与之对应地,条件培养基Ⅱ处理组中hLECs EDA受体integrin a9的表达水平较条件培养基I中hLECs下降(P＜0.05).结论:EDA在肿瘤淋巴管生成中具有重要作用,重组人血管内皮抑素可通过EDA-integrin a9途径有效抑制hLECs体外成管能力.
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纤维粘连蛋白片段真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDA的构建
目的 构建纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)基因的EDA外显子的真核表达载体,以研究EDA对涎腺腺样囊性癌(slivary adenoid cystic carcinoma,SACC)生物学行为的影响.方法 以RT-PCR技术从口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma)细胞株KB中扩增出外显子EDA,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体,用PCR和限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDA.结果 PCR、酶切、DNA测序鉴定证明成功构建了pcDNA3.1(+)-EDA真核表达载体,DNA测序显示重组质粒含有与EDA片段基因序列完全相等的基因.结论 成功构建了纤维粘连蛋白(fibronectin,Fn)基因的EDA外显子的真核表达载体pcDNA3.1(+)-EDA.
