首页 > 文献资料
-
XPD基因多态性与DNA加合物及肿瘤易感性的研究进展
着色性干皮病互补基团D(XPD)蛋白在核苷酸切除修复和DNA转录过程中起重要作用.研究提示2个常见的XPD多态性(Asp312Asn和Lys751 Gln)与DNA损伤修复能力差异有关.而DNA修复能力增强对DNA加合物损伤的修复、铂类药物耐药起关键作用.目前XPD基团多态性与肿瘤的发病风险之间仍存在分歧,但基因-基因、基因-环境交互作用影响较为显著.
-
黄芪多糖可能通过调控细胞自噬提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的敏感性
该研究旨在探讨黄芪多糖可能通过调节细胞自噬提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的化疗敏感性,并探讨其作用的可能机制.该实验将HeLa细胞分为对照组、顺铂组、黄芪多糖组和黄芪多糖联合顺铂组,分别运用MTT法检测各实验组宫颈癌HeLa细胞增殖抑制情况;流式细胞术检测各实验组HeLa细胞的凋亡及周期情况;RT-PCR法检测自噬相关蛋白beclin1,LC3Ⅱ,p62的mRNA表达情况;Western blot法检测自噬相关蛋白beclin1,LC3Ⅱ,LC3Ⅰ,p62的表达水平.MTT结果显示,与对照组相比,各给药组均可明显抑制HeLa增殖(P<0.05),联合给药组的抑制作用更加显著(P<0.01).流式细胞术结果显示,与对照组相比,各给药组HeLa的凋亡率均明显增加(P<0.05),其中联合给药组的凋亡率显著增加(P<0.01);与对照组相比,各给药组HeLa细胞均发生了明显的周期阻滞,以G0/G1期的阻滞为明显,其中联合给药组G0/G1期的阻滞显著.RT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,beclin1、LC3Ⅱ基因及蛋白表达上调,p62基因及蛋白的表达下调,联合给药组的上述相应变化更加显著.通过以上实验结果的分析,推测黄芪多糖可能通过调节细胞自噬来增加宫颈癌HeLa细胞对顺铂的化疗敏感性,这一作用的可能机制是通过上调自噬相关蛋白beclin1,促进LC3Ⅰ转化为LC3Ⅱ,下调自噬标记蛋白p62,增强HeLa细胞自噬活性,从而增加HeLa细胞对顺铂化疗的敏感性.
-
自噬调控慢性粒细胞白血病干细胞功能的研究进展
白血病干细胞具有自我更新和多向分化的潜能,参与了慢性粒细胞白血病的病程发展,是导致患者耐药和复发的重要原因之一.自噬作为一种保守的溶酶体降解途径,参与细胞内降解和循环途径,在维持细胞内环境稳态和功能方面起着关键作用.研究表明,自噬参与了白血病干细胞的分化调控,与慢性粒细胞白血病的化疗敏感性密切相关.该文就自噬对慢性粒细胞白血病化疗敏感性和干细胞功能的调控进行了系统综述,为靶向自噬的抗白血病药物的开发奠定基础.
-
靶向抑制微小RNA-21提高白血病细胞对三氧化二砷的敏感性研究
目的 探讨以微小RNA-21(microRNA-21,miRNA-21)为靶标的反义核酸(AMO-miR-21)提高白血病K562细胞对三氧化二砷(As_2O_3)的敏感性及可能的作用机制.方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的反义核酸转染K562细胞.MTT法检测单独使用AMO-miR-21、As_2O_3以及两者联合使用对细胞增殖的抑制作用,并计算抑制率和IC_(50);PI单染检测细胞周期及凋亡;实时定量PCR检测miRNA-21表达水平的改变;免疫荧光法检测miRNA-21候选靶基因PDCD_4蛋白表达的改变.结果 AMO-miR-21与As_2O_3联合使用后,IC_(50)从2.10 μmol/L降低到1.23 μmol/L,敏感性提高到单用As_2O_3的1.78倍;AMO-miR-21联合As_2O_3组细胞凋亡明显增加(P<0.05);单独转染AMO-miR-21可显著抑制K562细胞中miRNA-21的表达水平(P<0.01),同时抑癌基因PDCD_4蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 AMO-miR-21与As_2O_3联合使用可提高K562细胞对As_2O_3的敏感性,为白血病的治疗提供了新的方法.AMO-miR-21通过靶向抑制miRNA-21,进而上调抑癌基因PDCD_4的表达而发挥抗肿瘤作用.
-
膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b的表达水平与其化疗敏感性的关系分析
目的 探讨膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b的表达水平与其化疗敏感性的关系分析.方法 回顾性分析2011年2月至2012年2月于本院确诊为膀胱尿路上皮癌患者65例,根据癌组织中miR-133b表达水平将其分为高表达组(n=25)和低表达组(n=40),采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(stem-loop real-time,RT-PCR)检测膀胱尿路上皮癌组织和癌旁正常组织中 mi R-133b的表达水平,随访5年,统计分析所有患者化疗效果、5年存活情况.结果 膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b的表达量(U6标准化后的) 低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);高表达组患者化疗有效率高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);所有患者随访0.5~5年,平均随访时间3.86年,终有45例存活5年以上,高表达组患者5年存活率(88.00%)高于低表达组(57.25%),差异有统计学意义(P<0.05);存活组患者膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b水平高于死亡组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 与癌旁正常组织比较,膀胱尿路上皮癌组织中miR-133b呈明显低表达,且与术后化疗敏感性、预后有密切关系,有可能作为预测化疗疗效和判断预后的指标之一.
-
M2型肿瘤相关巨噬细胞通过p53途径下调肝癌化疗敏感性的机制研究
目的 通过研究M2肿瘤相关巨噬细胞调控p53表达来下调肝癌化疗敏感性的机制,以此拓宽建立抗肿瘤耐药的措施.方法 构建小鼠肝癌模型及分离肝癌组织,研磨组织提取巨噬细胞,通过RT-PCR方法检测巨噬细胞表面CD206及CD163分子表达情况.培养人单核巨噬细胞(THP-1),PMA (100ng/mL)和IL-4 (100ng/mL)作用诱导分化成肿瘤相关巨噬细胞后,与肝癌细胞(HepG2、SMMC7721,Hep 3B)共培养,加入奥沙利铂(20μ g/mL)作用24小时,通过Western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase 3、抗凋亡蛋白Bcl-2及p53的表达,通过MTT方法检测化疗对肝癌细胞增殖情况.结果 成功构建了肝癌模型,分离出了肝癌组织巨噬细胞,RT-PCR检测CD206和CD163的表达显著升高;人单核细胞(THP-1)经加入PMA(100ng/mL)和IL-4 (100ng/mL)分化诱导48h后其细胞的表面CD206和CD163的表达明显高于THP1分化诱导的细胞表面表达量;肝癌细胞SMMC7721和HepG2与M2型肿瘤相关巨噬细胞共培养24h,经奥沙利铂作用后,肿瘤细胞Bcl-2表达明显升高,Caspase 3和p53的表达显著降低;肿瘤细胞的增殖抑制率明显降低,而Hep 3B细胞的凋亡则明显降低.结论 M2型肿瘤相关巨噬细胞调控肝癌细胞中p53的表达,进而抑制了肝癌化疗的敏感性.
关键词： M2型肿瘤相关巨噬细胞 肝癌 P53 化疗敏感性 -
HPV18 E6 siRNA对宫颈癌细胞增殖及化疗药物敏感性的影响
目的 探讨HPV18 E6 siRNA联合紫杉醇应用埘官颈癌细胞牛长的影响.方法 用RNAi抑制HeLa细胞中HPV18 E6蛋白的表达.Western blot榆测E6、P53和P21的蛋白表达量,MTT法检测细胞的增殖活性及细胞对紫杉醇的敏感性.结果 抑制HPV18 E6的表达后,P53和P21的表达量均显著升高,HeLa细胞的牛长受到抑制(P＜0.01).加入紫杉醇后,细胞增殖速度较对照组明显降低(P＜0.01).结论 HPV18 E6 siRNA可有效沉默HeLa细胞中E6基因的表达,抑制细胞增殖,并提高细胞埘化疗药物的敏感性.
关键词： 宫颈癌 HPV18.E6.siRNA 紫杉醇 细胞增殖活性 化疗敏感性 -
人乳腺癌细胞化疗敏感性与相关基因表达的关系
目的 探讨人乳腺癌细胞化疗敏感性与多药耐药相关基因和凋亡调控基因表达的关系.方法 MTT法检测5株人乳腺癌细胞株Bcap37、MCF-7、T47D、MDA-MB-231和MDA-MB-435对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、卡氮芥(BCNU)的敏感性.流式细胞术检测多药耐药基因P-糖蛋白(P-GP)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和凋亡调控基因FAS、BCL-2、P53和P16的表达.结果 不同人乳腺癌细胞株对同一药物敏感性差异较大.相关分析表明,细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达呈正相关(P＜0.01),对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关.结论 人乳腺癌细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达有关.
-
热休克及化疗刺激对人白血病细胞K562中HSP70 mRNA及MDR1 mRNA表达的影响
为了研究热休克、Adriamycin(ADM)化疗应激刺激下热休克蛋白70(HSP70)、多药耐药基因MDR1的表达情况,对K562细胞予以43℃高温热休克和(或)加以ADM化疗,然后采用免疫组织化学方法检测HSP70的表达,MTT法检测K562细胞的生长抑制率,RT-PCR检测HSP70 mRNA和MDR1 mRNA的表达,流式细胞术检测P-糖蛋白(P-gp)的表达.结果显示:①HSP70蛋白的合成在43℃热作用后恢复37℃孵育2小时达到高峰并聚集在胞核和核仁内,呈"核内迁移"现象;3小时后HSP70表达开始降低,5小时后HSP70的合成逐渐降低至正常,并恢复以胞浆表达为主.②K562细胞在43℃高温热休克刺激下HSP70 mRNA表达增加,随着37℃孵育时间的延长表达量有增多趋势并持续一段时间,MDR1 mRNA的表达与之相似,二者在37℃孵育2小时分别增加4倍和5.8倍.③ADM化疗刺激后细胞内P-gp表达增加;ADM化疗、43℃热休克刺激后再加ADM化疗,K562细胞中HSP70mRNA、MDR1 mRNA表达均上调,且43℃热休克刺激处理后再加入ADM作用二者的表达要高于单加ADM化疗组.结论:热休克和ADM化疗刺激的K562细胞中HSP70和MDR1表达增加,有利于维护肿瘤细胞的稳定性,HSP70可能与耐药有关.
-
蛋白激酶抑制剂Go6976增强慢性髓系白血病细胞对三氧化二砷化疗敏感性的研究
研究Go6976是否能去除As2O3引起的G2/M周期阻滞,增加慢性髓系白血病(CML)细胞株(K562细胞)对As2O3的敏感性.K562细胞经不同浓度的Go6976及和As2O3(5μmol/L)作用后,流式细胞术检测细胞周期,台盼蓝排斥试验检测细胞活力,四唑盐(MTT)比色试验分析细胞的生长增殖.结果表明,流式细胞术细胞周期检测发现K562细胞经As2O3作用24小时和48小时后,G2/M期细胞比例分别为(38.02±7.70)%和(32.58±7.43)%,未出现明显凋亡;50 nmol/L Go6976与As2O3联合作用后,G2/M期细胞分别减少至(23.24±2.93)%和(16.18±1.60)%,subG1期细胞分别增加至(11.82±2.31)%和(27.80±2.89)%;且其变化随Go6976浓度及作用时间而增加.同时台盼蓝排斥试验及MTT试验观察到Go6976与As2O3联合作用能明显降低细胞活力、抑制其生长,但Go6976本身无明显作用.结论:Go6976可能通过去除G2/M期阻滞,有效增强了K562细胞对As2O3化疗的敏感性.
关键词： Go6976 三氧化二砷 K562细胞 G2/M细胞周期阻滞 化疗敏感性 -
原发性t(10;11)易位白血病CALM和AF10融合转录检测及其体外化疗敏感性分析
为了研究CALM和AF10融合转录在原发性t(10;11)易位白血病形成和治疗中的作用,采用RT-PCR技术检测了5例原发性t(10;11)易位白血病患者CALM-AF10融合转录,体外MTT法检测了其白血病细胞体外化疗敏感性.结果表明:在5例原发性t(10;11)易位白血病患者中检测到5种分子量的AF10-CALM融合转录和4种分子量的CALM-AF10融合转录;MTT法显示5例原发性t(10;11)易位白血病患者的白血病细胞有2例对体外化疗敏感(60%),36例非t(10;11)易位白血病细胞有31例对体外化疗敏感(86%),统计分析有显著差异(P《0.01),与临床治疗结果一致.化疗药物处理72小时,t(10;11)白血病细胞的凋亡率为(16.37±2.56)%,而非t(10;11)白血病细胞的为(33.75±5.59)%,差异有显著性(P《0.01).结论:CALM-AF10是t(10;11)易位白血病的常见特点之一,可能与该白血病发生密切相关,且t(10;11)易位白血病患者预后较差.
关键词： t(10 11) 白血病 CALM-AF10融合转录 化疗敏感性 -
p53抗体与肺癌患者化疗敏感性及预后关系的研究
目的 通过对血清p53抗体与化疗敏感性及预后的关系的研究,探讨血清p53 抗体在肺癌中的临床意义.方法 对57例初步诊断为肺癌的患者应用ELISA 法检测血清p53 抗体滴度,经酶联免疫检测仪测吸光值E450,计算抗体指数,进行统计学分析.结果 57例中阳性25 例,阳性率为43.9 %.血清p53 抗体水平与肺癌的病理类型、分期、分化和淋巴结转移有关,与肺癌的预后有关.结论 p53 抗体的产生可能是肺癌发生的早期指征,化疗前测定血清p53抗体可以预测化疗疗效,可以预测肺癌的预后.
-
靶向沉默HuR基因增强人肝癌细胞Hep3B对多柔比星的化疗敏感性
目的：探讨沉默人抗原R（HuR）基因对人肝癌细胞Hep3B多柔比星化疗敏感性的影响及相关机制。方法脂质体包裹靶向HuR基因的短发夹RNA（shRNA）转染Hep3B细胞，real-time PCR和Western blot分别检测沉默HuR基因后HuR、MDR1 mRNA和蛋白的表达，MTT法检测沉默HuR基因后Hep3B细胞对多柔比星化疗的敏感性，流式细胞术（FCM）检测沉默HuR基因后对Hep3B细胞凋亡的影响。结果 HuR shRNA质粒转染Hep3B细胞能有效沉默HuR基因，mRNA和蛋白水平的抑制率分别为82%和75%。与未处理Hep3B细胞（Mock组）比较，沉默HuR基因的Hep3B细胞（siHuR组）对多柔比星的半数抑制浓度（IC50）显著降低[（86.36±6.54）μg/L vs.（318.56±9.89）μg/L， P＜0.05]，细胞凋亡率明显升高[（30.48±5.12）%vs.（8.86±1.35）%，P＜0.05]，MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达显著降低，比值分别为0.36±0.08和0.28±0.11，差异均有统计学意义（P＜0.05）。Mock组与转染对照shRNA质粒Hep3B（Control组）的各检测指标均无统计学差异（P＞0.05）。结论沉默HuR基因可能通过抑制耐药蛋白P-gp的表达增强其对多柔比星的化疗敏感性。
-
miR-320在结直肠癌中的表达及意义
目的:探讨miR-320与结直肠癌临床病理因素间的关系,寻找其下游调控蛋白,及对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响.方法:采用RT-PCR检测83例结直肠癌组织及癌旁组织中miR-320的表达,结合结直肠癌临床病理指标分析其相关性,用miR-320病毒转染HCT-116及ClonA1两株结直肠癌细胞系,Western blot检测其调控蛋白C-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达,采用四甲基偶氮唑蓝显色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测LV-miR-320细胞株与阴性对照组间对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)化疗的敏感性.结果:83例结直肠癌标本中miR-320的表达明显低于癌旁组织表达(P=0.012).miR-320表达与肿瘤分化程度相关,高分化组织中表达较中低分化组织高,与局部浸润深度及TNM分期相关(P=0.012,P=0.004),但不受患者性别、年龄、肿瘤的大小及位置的影响;获得LV-mi R-320稳定转染细胞株及阴性对照株(negative control,NC),Western blot结果显示LV-miR-320组JNK表达明显降低;LV-miR-320组HCT-116及ClonA1半数抑制浓度(IC50值)分别为11.34 μg/mL和12.56 μg/mL,NC组IC50值分别为24.73 μg/mL和25.34 μg/mL(P=0.023,P=0.018).结论:miR-320在结直肠癌组织中呈低表达,其在结直肠癌细胞中过表达后,可明显抑制JNK蛋白翻译,而显著增加细胞对5-Fu化疗的敏感性.提示miR-320在结直肠癌的发生发展及治疗中起重要作用.
关键词： miR-320 C-Jun氨基端激酶 结直肠癌 化疗敏感性 -
反义Survivin核酸诱导凋亡及逆转胃癌耐药机制的实验研究
目的:探讨反义Survivin核酸(anti-pcDNA3-svv)对胃癌细胞系SGC7901的凋亡诱导、对泰索帝的化疗增敏作用及对化疗耐药的逆转作用.方法:采用脂质体转染法转染胃癌细胞系SGC7901,并筛选阳性克隆,以Western blot检测Survivin蛋白的表达,RT-PCR检测MDR-1mRNA的表达,用透射电镜及TUNEL法观察并检测转染后SGC7901的凋亡变化,采用MTT法检测转染细胞对泰索帝的敏感性.结果:转染anti-pcDNA3-svv的SGC7901细胞系(SGC7901-SVVanti)其Survivin蛋白比未转染者明显降低,仅为其29.9%(P＜0.01);透射电镜下可见转染组细胞呈凋亡晚期变化,TUNEL显示转染组与未转染组AI分别为0.241和0.083(P＜0.01);转染组MDR-1mRNA较未转染组明显降低,转染组与未转染组MDR指数分别为:0.196±0.013和3.126±0.019(P＜0.01);转染组对泰索帝的IC50值为16.7±1.98μg/L,而未转染组为55.7±1.89μg/L,差异具有显著的统计学意义(P＜0.01).结论:反义SurVivin核酸可诱导SGC7901细胞凋亡,增强泰索帝化疗敏感性,逆转耐药.
-
细胞黏附对结肠癌细胞凋亡及化疗敏感性的影响
目的:研究结肠癌细胞株与基质黏附对肿瘤细胞凋亡及药物敏感性的影响.方法:应用MTT法研究细胞与基质成分纤维粘连蛋白(FN)结合对药物敏感性的影响;采用TUNEL法检测细胞凋亡,采用流式细胞术观察Bcl-2和Bax基因表达.结果:HT29细胞与FN结合后,其耐药性明显增加(抑制率为12.2%,对照组为53.0%,P＜0.01),用抗β-1整合素抗体阻断其与FN结合,其对药物的敏感性又恢复至对照水平(抑制率为50.6%,与对照组比P＜0.05);HT29细胞与FN结合后,Bcl-2基因蛋白表达上升(62.1%),Bax表达降低(12.86%),凋亡率(8.75±1.08%)显著降低,对照组为(19.46±1.08%);阻断其与FN结合,Bcl-2表达明显下降(22.68%),而Bax表达上升(73.8%),凋亡率也升至(18.9±1.4%)(与对照组比P＜0.05).结论:肿瘤细胞与基质成分结合可上调Bax和下调Bcl-2基因表达,增强肿瘤细胞的抗凋亡能力,从而增加肿瘤耐药性.
-
MicroRNAs在结直肠癌中的研究进展
结直肠癌在我国恶性肿瘤中的发病率较高,且其死亡率居高不下.目前,越来越多的学者十分关注微小RNAs(microRNAs,miRNAs)与结直肠癌的关系.miRNAs是普遍存在于生物体内的一类小分子非编码RNA,miRNAs的异常表达与结直肠癌的发生和进展密切相关.miRNAs可以通过转录后基因调控的方式,来影响肿瘤细胞的增殖、调亡以及对化疗的敏感性等.在这里,我们回顾了近年来关于miRNAs与结直肠癌的相关文献,了解miRNAs在结直肠癌中的表达、结直肠癌化疗耐药以及其与预后的关系,从而更好的了解结直肠癌进展的生物学过程,有助于结直肠癌的诊断与治疗,提高结直肠癌患者的预后.
-
p53与胰腺癌及其基因治疗的研究进展
p53基因是人类肿瘤细胞中突变频率高的基因.大量研究表明,p53功能失活的肿瘤细胞更具有侵袭性,并对放、化疗更不敏感.胰腺癌中普遍存在p53基因异常[1],p53对胰腺癌的发生、发展及其对放、化疗敏感性的作用引起消化界的广泛关注.近年来,恢复肿瘤细胞的野生型p53基因表达已成为一种有效的基因治疗途径.本文对p53基因与胰腺癌的关系以及胰腺癌p53基因治疗的研究近况综述如下.
-
长非编码RNA H19在结直肠癌化疗敏感性中的作用研究
目的 研究长非编码RNA H19在结直肠癌化疗药物敏感性中作用.方法 分别构建lncRNA H19稳定过表达及表达沉默的结肠癌细胞株,分别加入5-FU培养,RT-qPCR检测H19表达,MTT法检测各组细胞增殖率,通过划痕实验检测各组迁移能力;Western blot检测各组细胞凋亡蛋白、耐药蛋白MDR1、MRP1和BCRP表达.结果 与正常细胞比较,lncRNA H19在结直肠癌细胞中表达升高,lncRNA H19稳定过表达组细胞增殖率明显高于H19表达沉默组,lncRNA H19稳定过表达组细胞48h迁移距离明显大于H19表达沉默组,lncRNA H19稳定过表达组Bax蛋白表达下调,BCL-2、MDR1、MRP1和BCRP表达上调,H19表达沉默组Bax蛋白表达上调,BCL-2、MDR1、MRP1和BCRP表达下调.结论 lncRNA H19高表达的结直肠癌降低结直肠癌对化疗药物的敏感性,下调lncRNA H19表达可提高化疗药物的疗效.
-
硼替佐米联合其他药物治疗30例多发性骨髓瘤患者的临床观察
多发性骨髓瘤(MM)是一种常见的血液系统恶性肿瘤,近年来随着我国人口的老龄化,发病呈逐渐上升趋势.目前应用传统的治疗方法,MM仍然是一种不可治愈的疾病,患者的中位生存时间为3～4年[1],迫切需要新的治疗方法.靶向治疗的出现为MM患者带来了新的希望.硼替佐米是一种全新的靶向治疗药物,体外及体内试验均证实它有抗MM作用.2003年5月被美国FDA批准用于复发难治性MM的治疗,取得了满意的效果.而且,在体外实验中,硼替佐米可以增加化疗敏感性,并克服对地塞米松等药物的耐药[2].我科选择了30例患者,对硼替佐米在我国MM患者中的有效性和安全性做了初步探讨.
