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芪蓟肾康方对AngII所致大鼠肾小球系膜细胞增殖变化中JNK-AP1影响
目的：探讨芪蓟肾康方通过JNK信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞，用血管紧张素Ⅱ刺激系膜细胞增生，给予芪蓟肾康方黄酮干预，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肾小球系膜细胞上清液 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、活化蛋白1（AP-1）、纤维粘连蛋白（FN）蛋白表达；实时定量 PCR 法检测 JNK、AP-1 mRNA 的表达。结果：与正常组比较，模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显升高（P约0.05或 P约0.01）；与模型组比较，治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显降低（P约0.05或 P约0.01）。与正常组比较，模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA 表达明显升高（P约0.05或 P约0.01）；与模型组比较，治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA明显降低（P约0.05）。结论：芪蓟肾康方可以通过下调肾小球系膜细胞JNK、AP-1 mRNA及蛋白的表达水平，抑制 JNK 信号转导，降低 AP-1的活性，减少 FN 的增殖，从而减轻 GMC 增生，延缓肾小球的损伤，防止肾小球的硬化。
关键词： c-Jun氨基末端激酶 活化蛋白1 纤维粘连蛋白 血管紧张素Ⅱ -
阿托伐他汀对肾性高血压大鼠心肌肥厚及活性氧信号通路的影响
目的 观察阿托伐他汀对肾性高血压大鼠心肌活性氧生成、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(磷酸)氧化酶[NAD(P)H氧化酶]及活化蛋白1(AP-1)表达的影响,探讨阿托伐他汀抑制心肌肥厚的作用机制.方法 用两肾两夹法建立高血压模型,共50只分5组,每组10只:假手术对照组(A组)；模型组(两肾两夹组,B组)；两肾两夹+阿托伐他汀高剂量组(C组);两肾两夹+阿托伐他汀低剂量组(D组)；两肾两夹+坎地沙坦组(E组).术后4周进行药物处理,给药4周后颈动脉插管至左心室测定主动脉压及左心室内压,并观察左心室质量指数(LVMI)、形态学变化、心室肌超氧阴离子(O2-·)的生成,Western blot检测左心室NAD(P)H氧化酶亚基p47phox、NOX4及AP-1的表达情况.结果 与A组比较,B组大鼠左心室收缩末压[(171.0±11.9)比(104.0±4.5)mm Hg]、LVMI[(2.1±0.2)比(1.1±0.1) mg/g]、心室肌中O2-·的生成[(805.0±62.0)比(233.0±29.0)]明显升高(均P＜0.01)；与B组比较,C、D组大鼠LVMI[(1.3±0.1)、(1.6±0.4)比(2.1±0.2)mg/g,P＜0.05]、心室肌中O2-·的生成[(385.0±37.0)、(495.0±44.0)比(805.0±62.0),P＜0.01]明显减弱,E组大鼠左心室收缩末压[(107.0±4.8)比(171.0±11.9)mm Hg,P＜0.01]、LVMI[(1.4±0.1)比(2.1±0.2)mg/g,P＜0.05]、心室肌中O2-·的生成[(415.0±42.0)比(805.0±62.0),P＜0.01]明显降低.与A组比较,B组大鼠p47phox、NOX4及AP-1的蛋白表达明显增加(P＜0.01)；与B组比较,C、D、E组左心室p47phox、NOX4及AP-1蛋白表达均明显降低(P＜0.01).结论 阿托伐他汀能明显抑制两肾两夹肾性高血压大鼠左心室p47phox和NOX4的表达,减少O2-·的生成,同时可下调转录因子AP-1的表达,该作用可能与其抑制心肌肥厚的作用有关.
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活化蛋白1在高糖诱导MC3 T3-E1成骨细胞凋亡中的作用
目的：观察活化蛋白1（AP-1）在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的 MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组，实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组（高糖组）、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、 P38MAPK 信号转导阻断剂组、无关 shRNA 转染组、 AP-1抑制剂SP600125组。采用TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡，用EMSA检测MC3T3-E1细胞AP-1的活性。结果与正常对照组相比，高糖组 MC3T3-E1成骨细胞 P38MAPK 表达、 AP-1活性、细胞凋亡显著增加。P38MAPK-shRNA慢病毒转染组和P38MAPK信号转导阻断剂组MC3T3-E1细胞AP-1活性较高糖组分别下降57.9％（P＜0.01）和45.6％（P ＜0.05）。 AP-1抑制剂组 MC3T3-E1细胞凋亡率较高糖组下降39.7％（ P＜0.01）。结论高糖通过激活P38MAPK增加AP-1活性，诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡，抑制AP-1活性后高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡显著下降。
关键词： 活化蛋白1 MC3T3-E1成骨细胞 RNA干扰 细胞凋亡 -
刚地弓形虫棒状体蛋白17激活活化蛋白1信号抑制小鼠巨噬细胞凋亡
目的 检测刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白17 (rhoptry protein 17,ROP17)对γ干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)凋亡的调控作用. 方法 将重组质粒p3 ×Flag-CMV-14/TgROP17和p3×Flag-CMV-14空质粒(对照组)转染J774A.1细胞后,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,通过流式细胞术和蛋白质印迹(Western blotting)检测ROP17对细胞凋亡的调控作用,检测c-Jun磷酸化水平及活化形式的半胱天冬酶3 (Caspase 3)、Bcl-2、Bcl-xL和Bcl-3等凋亡相关蛋白的表达情况.J774A.1细胞共转染p3×Flag-CMV-14/TgROP17和c-Jun shRNA,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,Western blotting检测ROP17对凋亡的调控作用及凋亡相关蛋白Bcl-3的表达. 结果 流式细胞术显示,过表达ROP17组细胞凋亡率为(3.73±0.51)％,明显低于对照组的(7.78±1.10)％(P＜0.05).Western blotting结果显示,过表达ROP17组磷酸化c-Jun蛋白相对表达量为0.196±0.028,对照组为0.075±0.010 (P＜0.05);Bcl-3相对表达量为0.461±0.063,对照组为0.108±0.013(P＜0.05).活化形式的Caspase 3相对表达量为0.015±0.004,对照组为0.174±0.026 (P＜0.05).Bcl-2在过表达ROP17组和对照组中的相对表达量分别为0.119±0.013和0.117±0.018,Bcl-xL则分别为0.124±0.015和0.121±0.023,差异均无统计学意义(P＞0.05).在c-Jun shRNA有效抑制c-Jun及其磷酸化表达的条件下,活化形式的Caspase 3在RNA干扰组和对照组的相对表达量分别为0.147±0.024和0.087±0.010 (P＜0.05),Bcl-3则分别为0.085±0.010和0.162±0.011 (P＜0.05). 结论 ROP17抑制IFN-γ诱导的J774A.1细胞凋亡依赖于c-Jun的磷酸化及Bcl-3的表达.
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羟乙基淀粉对内毒素血症大鼠肝炎性反应的影响及其机制
目的:研究羟乙基淀粉(HES)对内毒素血症大鼠肝炎性反应的影响及其机制.方法:成年雄性Wistar大鼠48只,随机分为4组:HES治疗组[脂多糖(LPS)5 mg/kg腹腔注射(ip);HES 15mg/kg静脉注射(iv)];等渗盐水(NS)治疗组(LPS 5 mg/kg,ip;NS 60 ml/kg,iv);HES对照组(NS 3 ml/kg,ip;HES 15 ml/kg,iv);NS对照组(NS 3ml/kg,ip;NS 60 ml/kg,iv).LPS腹腔注射2h后检测肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、活化蛋白1(AP-1)、核因子-κB(NF-κB)水平;3 h后检测肝组织白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、IL-10水平.结果:HES治疗组或NS治疗组肝NF-κB、AP-1的活性和TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的表达,均明显高于HES对照组或NS对照组(P＜0.05).其中,HES治疗组明显低于NS治疗组(P＜0.05);HES对照组与NS对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:HES能下调炎性介质的表达,可能的机制是抑制NF-κB和AP-1的活性.
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重组人生长激素对THP1单核细胞中活化蛋白1转录因子的影响
目的 研究重组人生长激素(rhCH)对THPI单核细胞中活化蛋白1(AP-1)转录因子的影响.方法 应用荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移率实验检测AP-1在rhGH诱导的单核细胞中的活化程度,用蛋白免疫印迹实验检测细胞外信号调控激酶(ERK)和磷酸化的ERK(p-ERK)的表达.结果 与空白对照组比较,LPS组和rhGH组AP-1的转录活性升高(P＜0.01)；rhGH+脂多糖(LPS)组AP-1的转录活性较LPS组有明显下降(P＜0.01).同时,rhGH和LPS的预处理对ERK无显著影响,但均能促进p-ERK蛋白的表达,rhGH的预处理则能减弱LPS刺激p-ERK蛋白表达.结论 rhGH可通过双向调节ERK的磷酸化而影响THP-1单核细胞中AP-1的转录活性.
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CD137-CD137L信号通过TRAF6/JNK/AP-1通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达
目的 探讨CD137-CD137L信号是否通过肿瘤坏死因子受体相关因子6/c-Jun氨基末端激酶/活化蛋白1(TRAF6/JNK/AP-1)途径调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(NFATc1)的表达.方法 采用组织块原代培养小鼠VSMC,第3～5代细胞用于实验.VSMC分为6组:对照组、CD137刺激组、CD137抑制组、siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组.Western blot检测各组TRAF6、磷酸化JNK (p-JNK)、磷酸化AP-1(p-AP-1)、NFATc1蛋白表达水平.免疫荧光法检测各组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达.结果 (1)与对照组相比,CD137刺激组(CD137-CD137L信号激活)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);与CD137刺激组相比,CD137抑制组(CD137-CD137L信号抑制)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).(2)采用siRNA技术分别沉默TRAF6、JNK、AP-1后,与CD137刺激组相比,siTRAF6干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、N FATc1表达明显减少(P＜0.05);siJNK干预组TRAF6表达无改变,而p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P＜0.05);siAP-1干预组TRAF6、p-JNK表达无明显改变,而p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P＜0.05).(3)免疫荧光检测显示:CD137刺激组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量升高(P＜0.05);CD137抑制组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量明显降低(P＜0.05);siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量与上述蛋白表达结果一致.结论 CD137-CD137L信号可通过TRAF6/JNK/AP-1通路影响NFATc1的表达.
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PCA 通过NF-κB和AP-1信号通路影响HUVECs表达TF
目的:探讨核因子κB(NF-κB)和活化蛋白1(AP-1)信号通路在尖吻蝮蛇毒蛋白C 激活剂(PCA)抑制脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)表达中的作用.方法:MTT 法检测HUVECs活力,免疫组化法检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白在细胞中的分布,Western blot 法检测细胞内NF-κB p65、TF、c-Fos和c-Jun蛋白的表达,qPCR法测定TF mRNA在HUVECs的表达,ELISA法检测细胞培养上清中TF的含量.结果:与对照组比较,LPS组的细胞活力明显下降(P<0.01),胞质内出现明显的黄染颗粒,胞质染色加深,TRAF6平均吸光度值升高(P<0.01),NF-κB p65、c-Jun和c-Fos的蛋白表达均明显增加(P<0.01),TF mRNA和蛋白表达亦明显增加(P<0.01);PCA+LPS组的细胞活力较LPS组升高(P<0.05),细胞形态正常,胞质黄染颗粒不明显,TRAF6平均吸光度明显小于LPS组(P<0.01),NF-κB p65、c-Fos和c-Jun 3种蛋白表达则明显降低(P<0.01),TF mRNA及蛋白亦表达减少(P<0.01).结论:PCA可明显减轻LPS引起的HUVECs损伤,其机制可能是通过降低TRAF6、NF-κB及AP-1核因子的活化进而减少组织因子的释放来实现的.
关键词： 尖吻腹蛇毒蛋白C激活剂 人脐静脉血管内皮细胞 组织因子 核因子κB 活化蛋白1 -
吡格列酮对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞合成细胞外基质的作用及机制
目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ配体吡格列酮对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)合成细胞外基质的作用以及调节机制.方法 胰蛋白酶消化法分离培养RPMC.随机分为正常对照组、高糖组(2.5%葡萄糖)、吡格列酮干预组(10 μmol/L、20μmol/L+2.5%葡萄糖)、二硫氨基甲酸吡咯烷干预组(PDTC,NF-KB抑制剂,25 μmol/L、50μmol/L+2.5%葡萄糖)、姜黄素干预组[活化蛋白1(AP-1)抑制剂,15 μmol/L、30 μmol/L+2.5%葡萄糖].RT-PCR方法检测纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)、纤溶酶原激活抑制因子1(PAI-1)、c-fos、c-jun mRNA表达.ELISA方法检测细胞上清液中FN、COL Ⅰ和PAI-1蛋白水平.Western印迹方法检测IKBα、磷酸化IKBα(p-IKBα)、NF-KBp65、磷酸化NF-KBp65(p-p65)蛋白表达.结果 常规培养的腹膜间皮细胞表达基础量的FN、COL Ⅰ和PAI-1,高糖显著上调其蛋白及mRNA表达(P＜0.01).吡格列酮预处理后,高糖诱导的FN、COL Ⅰ和PAI-1蛋白及mRNA表达显著低于高糖组(P＜0.01).高糖作用后,磷酸化IKBαNF-kBp65水平显著增高,c-fos、c-jun mRNA表达增加,与对照组差异有统计学意义(P＜0.01).PDTC预处理后,高糖诱导RPMC的FN和PAI-1蛋白水平降低(P＜0.01),COL Ⅰ蛋白表达无明显变化.AP-1抑制剂姜黄素预处理后,高糖诱导的RPMC FN、COL Ⅰ和PAI-1蛋白水平均显著降低,与对照组差异有统计学意义(P＜0.01).吡格列酮抑制高糖条件下磷酸化IKBα和NF-KB p65水平,抑制c-fos、c-jun mRNA表达(P＜0.05或P＜0.01).结论 NF-KB和AP-1信号通路参与高糖条件下RPMC的FN、COL Ⅰ和PAI-1表达的调节.吡格列酮通过NF-KB和AP-1途径下调高糖诱导的RPMC的FN、COL Ⅰ和PAI-1的表达,从而发挥抗纤维化作用.
关键词： 腹膜 细胞外基质 NF-kB 活化蛋白1 过氧化物酶体增殖物激活受体γ
