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FAK突变体的亚细胞定位及生物学特性
目的:探讨外显子33缺失型黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)突变体(FAK-Del33)的亚细胞定位及生物学特性。方法采用基础实验研究设计。将野生型FAK以及突变型FAK-Del33分别构建到pEGFP表达载体,并转染乳腺癌细胞株,以研究分析其细胞表达和定位情况。另构建过表达FAK或FAK-Del33的MDA-MB-468乳腺癌稳转细胞株,研究评价其细胞表达和体外克隆形成能力。结果构建FAK-GFP融合蛋白表达载体转染MDA-MB-468后的细胞定位显示,野生型FAK在胞浆中弥散分布,而FA K突变体蛋白在胞浆中呈点状不均匀分布,并聚集成簇。经限制性内切酶酶切分析与测序分析,成功构建出过表达FAK的慢病毒载体,以293T细胞包装的重组慢病毒能够高效感染乳腺癌细胞;经抗生素puromycin筛选和荧光定量PCR鉴定,成功筛选到稳定表达FAK的细胞株。在软琼脂克隆形成实验中,FAK野生型的克隆形成数为(335±48)/1000个,FAK突变体为(735±91)/1000个,后者对MDA-MB-468乳腺癌稳转细胞株的增殖能力高于前者(t=9.437, P<0.01)。结论初步研究表明外显子33缺失可改变FAK的亚细胞定位;并能增强肿瘤细胞株的体外克隆形成能力,这种FAK突变体可能参与肿瘤的发生发展。
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酸枣仁汤对抑郁症模型大鼠海马和皮层脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶B基因表达的影响
目的:探讨酸枣仁汤对慢性应激抑郁模型大鼠海马和皮层脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶B(TrKB)基因表达的影响。方法通过孤养与慢性刺激相结合制备抑郁症模型大鼠,灌胃给予酸枣仁汤进行干预,采用RT-PCR法检测大海鼠马、皮层中BDNF和TrKB的mRNA表达。结果酸枣仁汤高、中剂量组,氯丙咪嗪组皮层部位BDNF、TrKB mRNA表达量(分别为0.160±0.028、0.200±0.024、0.560±0.032、0.399±0.041、0.124±0.016、1.224±0.015)均高于模型组(分别为0.032±0.008、0.001±0.000),差异有统计学意义(P<0.01)。酸枣仁汤高、中剂量组、氯丙咪嗪组海马部位BDNF、TrKB mRNA表达量(分别为0.213±0.094、0.639±0.023、1.032±0.015、1.089±0.014、1.580±0.012、1.860±0.019)均高于模型组(分别为0.021±0.015、0.125±0.013),差异有统计学意义(P<0.01)。酸枣仁汤低剂量组皮层和海马部位BDNF、TrKB mRNA表达与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论酸枣仁汤可上调BDNF和TrKB基因表达,具有抗抑郁作用。
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酪氨酸激酶抑制剂研究进展
随着生命科学研究的飞速进展,恶性肿瘤细胞内的信号转导、细胞周期的调、细胞凋亡的诱导、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正在被逐步阐明.以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶作为药物筛选靶点,发现选择性作用于特定靶点的高效、低毒、特异性强的新型抗癌药物-酪氨酸激酶抑制剂已成为当今抗 肿瘤药物研究开发的重要方向.
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聪圣胶囊对去皮层血管大鼠前脑脑源性神经营养因子及酪氨酸激酶mRNA作用的实验研究
目的:研究聪圣胶囊对去皮层血管模型大鼠前脑脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA、酪氨酸激酶(trkB)mRNA作用及机理.方法:建立去大鼠脑皮层血管模型,用原位杂交方法测定聪圣胶囊对其模型大鼠BDNF mRNA、trkB mRNA表达.结果:发现去皮层血管后,聪圣胶囊对大鼠大脑皮质、海马中BDNF mRNA、trkB mRNA表达明显降低,海马CA1区下降明显,大细胞基底核未见有BDNF mRNA的表达,而存在trkB mRNA的表达.结论:聪圣胶囊通过增强BDNF mRNA、trkB mRNA的表达,促进BDNF及trkB蛋白的合成,挽救将要变性的神经元,维持它们的存活.
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无雄激素条件下表皮生长因子诱导前列腺癌细胞系增殖及雄激素受体磷酸化
目的 探讨在无雄激素的条件下,表皮生长因子对前列腺癌细胞增殖及雄激素受体磷酸化的影响.方法 以LNCaP及LAPC4 AR为研究对象,在无雄激素的条件下,EGF处理后,Western blot方法测定LNCaP及LAPC4 AR磷酸化状态;siRNA转染方法敲除Src基因或Ack1基因,观察对AR磷酸化的影响;CCK-8检测细胞增殖;定时定量RT-PCR检测前列腺特异抗原及人体激肽释放酶2 mRNA表达.结果 EGF通过Src激酶和另一未知激酶导致ARTyr-534及AR Tyr-267特异位点磷酸化;相比未用 EGF对照组,EGF能够促进前列腺癌细胞增殖(P<0.05),增加前列腺特异抗原(P<0.05)及人体激肽释放酶2 mRNA表达(P<0.05).结论 EGF通过细胞内非受体酪氨酸激酶使AR特异位点磷酸化,诱导前列腺癌细胞增殖.
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慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马神经细胞增殖和突触后酪氨酸激酶表达的变化
目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马结构各亚区神经细胞数量变化,以及突触后致密物酪氨酸激酶(Fyn)在海马内表达的变化及其意义.方法39只大鼠随机分为复合应激组、单一应激对照组和正常对照组.复合应激组动物进行6周的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6 h/d)和夜间光照等慢性复合性应激实验;单一应激对照组进行6周的单一捆绑对照,6 h/d.实验结束后,所有动物分别进行3 d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩:并运用尼氏染色方法观察海马各区神经细胞数量的变化;同时采用免疫组织化学、RT-PCR方法检测Fyn在海马CA3区的表达变化以及海马Fyn mRNA水平的变化.结果单一应激对照组动物学习记忆成绩受损(P<0.05);复合应激组的学习与记忆成绩优于对照组(P<0.05);与对照组相比,复合应激组和单一应激组动物海马各区神经细胞数量明显增多(P<0.05);Fyn在复合应激组海马CA3区辐射层阳性表达比对照组明显增强(P<0.05),但单一应激对照组的则减弱(P<0.05);同时复合应激组动物的Fyn mRNA水平明显上调(P<0.05),而单一应激对照组的则明显下调(P<0.05).大鼠的学习记忆成绩与Fyn的表达呈正相关.结论6周慢性复合性应激使大鼠的学习与记忆能力加强;海马各区神经元数量增多;Fyn在海马中的表达和Fyn mRNA转录水平均增加.提示Fyn参与了慢性复合性应激增强大鼠学习记忆能力的过程.
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间变性淋巴瘤激酶与肿瘤靶向治疗
间变性淋巴瘤激酶(ALK)因发现于间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)中而得名,是一种受体酪氨酸激酶,属于胰岛素受体超家族,特异性表达于成人大脑组织中.研究发现,ALK除了可表达于ALCL,还可表达于弥漫性大B细胞性淋巴瘤、非小细胞肺癌、神经母细胞瘤、炎性肌纤维母细胞瘤等多种肿瘤中,在这些肿瘤中发生基因重排、点突变及扩增,因此ALK基因已成为抗肿瘤治疗的新靶点.ALK基因的靶向治疗药物克唑替尼在多种肿瘤的治疗中取得了很好的疗效,但耐药性的问题使其在肿瘤中的应用受到了限制.耐药的原因包括原发性耐药和继发性耐药两种,人们为了解决耐药性的问题,研制出了几种替代药物,包括ALK二代抑制剂、Hsp90抑制剂以及RNA干扰,为耐药患者的肿瘤治疗带来了希望.
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酪氨酸激酶异常活化在恶性血液病发病中的作用
蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)在调节细胞生长、活化和分化的信号转导中起着重要的作用.基因突变(多半由染色体移位)或者激酶的过度表达可使PTK活力异常增高,并介导异常的信号转导途径,在多种恶性血液病的发生发展中起着主要的作用.在慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)、急性髓性白血病(AML)和间变性大细胞淋巴瘤的发病中,均存在着PTK的异常活化.进一步研究PTK相关的恶性血液病的发病机理,可以加快特异性的分子靶向治疗的研究进展.
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靶向酪氨酸激酶的治疗在骨髓增殖性肿瘤中的应用研究进展
酪氨酸激酶在细胞增殖、分化及生存和凋亡等重要生命活动中起着关键作用,它们的异常与肿瘤的发生密切相关.随着酪氨酸激酶及其信号通路中的组成元件的异常在血液系统恶性疾病中不断被发现,对于酪氨酸激酶抑制剂在血液系统恶性疾病治疗中的应用越来越受关注.慢性髓系白血病治疗因BCR/ABL酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼的出现而有了革命性的进展,但因耐药、耐受性及其他伴有酪氨酸激酶异常的血液系统恶性疾病的需要,它不断研发出许多新型的酪氨酸激酶抑制剂.应用甲磺酸伊马替尼的适应症现在也逐渐被扩大,包括伴有PDGFRA,PDGFRB或FGFR1嗜酸性细胞相关的髓系钟瘤,伴有c-Kit突变的胃间质瘤等.近来,JAK2激酶抑制剂也逐渐进入临床试验用于伴有JAK2 V617F突变的真性红细胞增多症、原发性骨髓纤维化、原发性血小板增多症.本文将时于酪氨酸激酶异常在骨髓增殖性肿瘤的特点,以及靶向酪氨酸激酶治疗的应用做一综述.
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EGFR抑制剂细胞磷酸化筛选模型的建立与应用
表皮生长因子受体(EGFR)是一种具有酪氨酸激酶(PTK)活性的跨膜糖蛋白受体,由 N 端胞外区、跨膜区、胞内区 3 部分组成,胞内区共 542 个氨基酸残基,由近膜区、酪氨酸激酶区、C 末端等 3 个亚区构成,近膜区的前13 个氨基酸(645 ~ 657)介导胞内二聚化[1].自身磷酸化位点位于 C 末端,其中 Tyr1068 为主要的 3 个磷酸化位点(Tyr1068、Tyr1148 和 Tyr1173)之一,与细胞信号传递密切相关[2].表皮生长因子(EGF)与 EGFR 胞外区 N 端结合,受体之间二聚化形成同源或异源二聚体,二聚体促使EGFR 胞内区氨基酸残基自磷酸化,进而启动胞内信号通路,调控癌细胞的增殖、存活及凋亡[3].
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胃肠道间质瘤的分子分型与靶向治疗
胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)是胃肠道常见的间叶源性肿瘤,通常c-kit(CD117)免疫表型阳性,对传统的化学治疗和放射治疗不敏感.该类肿瘤一般具有c-kit基因(75%~85%)或PDGFRA基因(5%~10%)的突变[1-2].这两个基因编码两个功能相似的酪氨酸激酶蛋白受体,其突变造成配体非依赖性的c-kit或PDGFRA受体二聚化,导致信号通路不需诱导持续激活,在GIST发病过程中发挥关键作用[3-4].c-kit或PDGFRA基因在GIST中的突变有一定的热点区域和规律,并且与GIST的临床病理学特征及预后存在非随机的联系.
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国际肺癌研究协会/美国胸科学会/欧洲呼吸学会国际多学科肺腺癌分类(2011年版)解读
世界上发病率及病死率高的恶性肿瘤是肺癌,腺癌是其中常见的组织学类型,约占肺癌的半数.近年来,由于临床和基础研究的进展,特别是确定了肺腺癌中存在表皮生长因子受体(EGFR)突变及对EGFR酪氨酸激酶抑制性药物有着治疗反应,目前医药界投入了大量的人力和物力,从事临床治疗和分子生物学研究.而组织学分类、诊断术语及诊断标准的统一,是观察疗效和比较各试验是否有效的重要基础,因此迫切需要修订世界卫生组织( WHO)2004年版分类.
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乳腺癌HER2检测指南
一、前言研究表明,一种受体型的酪氨酸激酶-人类表皮生长因子受体2(HER2)在20%~30%的原发性乳腺浸润性导管癌中有基因的扩增和蛋白的过度表达.HER2阳性的乳腺癌浸润性强,无病生存期短,预后差.
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香烟烟雾提取物对人外周血单个核细胞IL-8 mRNA表达的影响
目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)对人外周血单个核细胞(PBMC) IL-8 mRNA表达的影响及其细胞内信号途径. 方法体外应用CSE与健康者PBMC共同培养,用RT-PCR检测IL-8 mRNA的表达,用免疫细胞化学染色法检测核因子κB(NF-κB)的表达;并观察NF-κB抑制剂和酪氨酸蛋白激酶抑制剂对CSE诱导的PBMC IL-8基因表达的影响. 结果加入CSE培养的人PBMC,IL-8 mRNA的表达增加,作用24h高,NF-κB活化细胞百分比增加;NF-κB抑制剂和酪氨酸激酶抑制剂均使CSE诱导的IL-8 mRNA表达水平下降. 结论吸烟使人PBMC的IL-8 mRNA表达水平显著增加,与NF-κB和酪氨酸激酶有关.
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甲苯磺酸索拉非尼治疗终末期肝癌的观察与护理
甲苯磺酸索拉非尼(soralfenib)是首个口服RAF激酶和酪氨酸激酶受体抑制剂,2004年应用十临床,具有同时抑制肿瘤胞增殖和血管生成的作用,但临床多见不良反应.该药物通过利用肿瘤组织或肿瘤细胞的特异性结构或功能性分子作为靶点,与相应的配体或抗体特异性结合,直接阻断肿瘤的发生、发展达到治疗日的.我科于2007年12月-2008年2月使用该药物治疗终末期肝癌3例,现将病情观察与护理体会总结如下.
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骨癌疼痛的原因、后果及治疗时机
常见癌症,如乳腺癌、肺癌和前列腺癌常向骨骼转移,引起剧痛.骨癌疼痛的原因会随病情的进展而发展变化.转移到骨中的癌细胞及其基质细胞会释放与疼痛有关的物质,包括H+、缓激肽、内皮素、前列腺素、蛋白酶及酪氨酸激酶激活剂等.这些物质可以使骨骼处的神经纤维敏感化并产生痛觉;造成破骨细胞增生肥大,活性增强,终导致骨折.
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以Angiopoietin-1,2为靶点靶向治疗口腔鳞癌的研究进展
针对肿瘤新生血管的靶向治疗已成为恶性肿瘤新的治疗策略.但目前尚缺乏有效针对口腔鳞癌抗血管生成治疗的靶向因子.Angiopoietin(Ang)是近年来发现的一族可特异性作用于血管酪氨酸激酶受体系统(receptor tyrosine kinase,RTK)的分泌性蛋白分子,在生理和病理血管新生中起重要作用.研究表明Ang 家族中Ang-1,2 和血管新生关系为密切,二者的表达调控及活性调节研究已成为目前阐明肿瘤性血管生成、发育机制并进行肿瘤抗血管生成治疗的研究热点.本文就Ang-1,2 在实体瘤及其在口腔鳞癌中的研究进展进行综述.
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表皮生长因子受体单克隆抗体疗效预测因素的研究进展
近年来随着对肿瘤细胞信号转导研究的不断深入,针对细胞受体、信号转导、细胞周期和血管生成的分子靶向治疗,已成为肿瘤内科治疗的新亮点。以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)为靶点的单克隆抗体治疗即为其中之一。EGFR单克隆抗体是针对于胞外域EFGR的靶向性抗体,其与内源性配体竞争结合EGFR,通过抑制酪氨酸激酶的激活、促进EGFR内化等一系列作用产生抗肿瘤效应,与化疗联合应用可明显提高疗效、延长患者的生存期。因此研究可能的疗效预测因素,以便确定哪类患者能从EGFR单克隆抗体治疗中获益十分重要。本文就EGFR单克隆抗体疗效预测因素的研究进展作一综述。
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急性髓系白血病中异柠檬酸脱氢酶基因突变的研究进展
急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一组异质性疾病.长期以来,细胞遗传学异常被认为是影响AML发生发展及预后的独立因素,研究发现40% ~ 50%的AML患者为正常核型[1].近年来研究表明,基因突变在正常核型AML患者预后判断方面具有重要意义,WHO已将核磷蛋白(NPMl)基因突变、FLT样酪氨酸激酶3基因串联重复突变(FLT3-ITD)等作为AML预后的重要标志[2].
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信号传导及转录活化因子STAT与消化系统疾病的关系
信号传导及转录活化因子(signaltransducers and activatorsoftranscription,STAT)家族包括7个成员,他不仅参与正常的生理过程,而且还存在于肿瘤组织中.信号通常产生于细胞膜表面的受体,酪氨酸激酶被组成性激活后再激活STAT分子并使之磷酸化,然后进入细胞核内,STAT在核内与特异性的DNA启动子结合,调节相关基因的表达.正常生理条件下各种STAT蛋白的活化过程是短暂的,通常持续数分钟至几小时.大多数人类肿瘤中都有STAT的组成性激活,尤其是Stat1、Stat3和Stat5.Stat1的功能主要与生长抑制有关,而Stat3和Stat5可通过抑制凋亡或诱导细胞增生作用参与肿瘤的发生和发展.通过小分子抑制剂阻断酪氨酸激酶的信号传导,可抑制不同肿瘤细胞株中Stat3或Stat5的组成性激活.相对而言,缺乏STAT活性作用的正常细胞或肿瘤细胞对药物的耐受能力更强,如使用非显性STAT或反义寡核苷酸,直接干预STAT信号时可获得相似的效应.有关STAT信号途径的研究为人类肿瘤的干预治疗提供了新的分子标靶.目前国内外关于STAT在消化系统疾病中的研究才刚刚起步,发展前景广阔,本文就其研究进展作一综述.