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孕哺期铅暴露对仔鼠海马组织中Aβ40表达的影响
目的 探讨母体铅染毒对子一代海马组织中β淀粉样蛋白40(Aβ40)表达的影响.方法 雌性小鼠自妊娠第1天开始经饮水染铅(0.3、1.0及3.0g/L,对照组饮蒸馏水)至仔鼠出生后21d断乳为止.随机抽取各组仔鼠,在出生后第7、14、21天分别测其血液和海马组织中铅的含量;在出生后第21天时,采用免疫组化方法测定各组海马组织中Aβ40的表达.结果 孕哺期不同剂量铅暴露后,7、14和21天的仔鼠血铅、海马铅水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化染色结果显示,Aβ40免疫组化阳性反应主要定位于胞浆和胞膜;各个铅暴露组仔鼠海马的CAl区域Aβ4o免疫组化阳性反应物的面密度显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,各个铅暴露组仔鼠海马的CA1区域Aβ40免疫组化阳性反应物的平均灰度值明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 母体铅暴露使铅在仔鼠体内蓄积,增强了仔鼠海马组织中Aβ40的聚集,干扰了正常的海马神经元的功能,进而可能影响其学习记忆功能.
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HER2银染色原位杂交结果与前处理条件的相关性
HER2基因扩增和／或HER2蛋白过表达是判断乳腺癌患者预后的重要风险评估因子，同时也是判断曲妥珠单抗靶向治疗是否适用的重要依据。评价HER2状态的方法有免疫组织化学染色法（ IHC）、荧光原位杂交（ FISH）、显色原位杂交（CISH）及银染原位杂交（SISH）。 SISH法在亮视野下观察切片，切片可长期保存，观察结果与FISH结果的符合率高达90％～99％［1-5］。2013年美国临床肿瘤学会／美国病理医师学院（ASCO／CAP）乳腺癌HER2检测指南及中国乳腺癌HER2检测指南（2014版）相应增加了亮视野原位杂交的检测及判读指南等内容［6-7］，使得HER2 SISH检测技术逐步走向规范化、标准化。为了更顺利的开展HER2 SISH的检测，提高检测的成功率，我们分析不同前处理条件对HER2 SISH染色结果的影响。
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银杏叶提取物抗大鼠肝纤维化的作用
目的:探讨银杏叶提取物对实验性大鼠肝纤维化的预防及治疗作用机制.方法:采用四氯化碳腹腔注射诱导的大鼠肝纤维化模型,60只Wistar大鼠分为5组:模型组、银杏叶干预组、银杏叶治疗组、银杏叶组,另设正常对照组,应用HE染色观察大鼠肝组织的改变及Von-Gieson胶原纤维特殊染色观察肝纤维化程度,并采用免疫组织化学染色法及RT-PCR法检测肝组织Ⅰ型胶原、TGF-β1蛋白和mRNA的表达.结果:银杏叶干预及治疗组与模型组相比肝组织结构明显改善、纤维化增生程度减轻;肝组织内Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量(Ⅰ型胶原:0.2 563±0.0 009 vs 0.2 885±0.0 025,0.2 541±0.0 076 vs 0.2 885±0.0 025,P＜0.01;TGF-β1:0.2 785±0.0 012 vs 0.3 015±0.0 012,0.2 791±0.0016 vs 0.3 015±0.0 012,P＜0.01)以及mRNA的表达均明显低于模型组(Ⅰ型胶原:0.0 778±0.054 vs 0.2 361±0.113,0.1 075±0.007 vs 0.2 361±0.113,P＜0.01;0.523±0.015 vs 0.956±0.049,0.524±0.009 vs0.956±0.049,P＜0.01);银杏叶组与正常对照组之间无差异.结论:银杏叶提取物可抑制肝星状细胞激活和转化,下调Ⅰ型胶原、TGF-β1蛋白质及其mRNA的表达,从而抑制或逆转纤维化形成.
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地龙2号对大鼠肝纤维化TGF-β1,MMP-13及TIMP-1 mRNA和蛋白表达的影响
目的:研究蚯蚓提取物地龙2号对实验性肝纤维化大鼠转化生长因子-βl(TGF-β1),基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-l)mRNA和蛋白表达的影响.方法:采用四氯化碳皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型.♂Wistar大鼠52只随机分成6组:正常组、阴性对照组、模型组、阳性对照组、地龙2号大剂量组和小剂量组;8 wk末,用免疫组织化学染色法及RT-PCR检测肝组织中TGF-βl,MMP-13,TIMP-l mRNA和蛋白的表达.结果:地龙2号大、小剂量组肝组织内TGF-β1及TIMPlmRNA(TGF-βl:0.68±0.16 ys 0.90±0.29,0.66±0.14vs 0.90±0.29,后者P＜0.05;TIMP-l:1.0l±0.22 vs2.48±1.18,1.2l±0.38vs2.48±1.18,P＜0.01)及蛋白表达均显著低于模型组(TGF-βl:3.14±2.67vs8.22±2.99,3.00±1.90 vs 8.22±2.99,P＜0.0l;TIMP-1:3.57±2.23 vs 7.56±3.40,3.30±2.67 vs 7.56±3.40,P＜0.01),而MMP-13 mRNA(1.69±0.75 vs 0.62±0.21,1.82±0.71 vs 0.62±0.2l,P＜0.01)及蛋白表达则明显高于模型组(7.7l±1.25vs4.67±2.45,P＜0.01,8.50±2.88vs4.67±2.45,P＜0.01).结论:地龙2号可下调TGF-βl,TIMP-lmRNA及蛋白的表达,并上调MMP-13mRNA及蛋白的表达,从而抑制或减轻肝纤维化的形成.
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原位种植肝癌新生血管的检测及血管内皮细胞生长因子mRMA的表达
目的:观察大鼠原位种植肝癌模型中的新生血管的生长情况,研究肿瘤血管生长因子基因的表达和肝癌新生血管之间的关系.方法:采用Walker256癌肉瘤接种40只Wistar大鼠制作原位种植肝癌模型,用微血管计数以及免疫组织化学染色法检测平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达来标志肿瘤新生血管.血管内皮细胞生长因子基因的检测采用原位杂交法进行.结果:Walker256癌肉瘤接种后1、2、3 wk肿瘤微血管密度分别为(15±4.3)/Hp、(17±3.6)/HP、(45±7.8)/HP.大血管及正常微血管(毛细血管除外)周围α-SMA呈强阳性染色.在肝癌组织中可见到一些形态不规则的微血管呈弱阳性或阴性染色是肿瘤诱导的新生血管,肝癌组织有大量新生血管形成,新生血管的数量与微血管密度呈正相关,Walkef256癌肉瘤接种后3 wk较前2wk有显著性增加.正常肝脏组织仅有少量VEGF mRNA表达,肝癌组织接种后1wk即有多种细胞表达VEGF.新生血管较密集的肿瘤组织VEGF的表达较多.VEGF的表达与微血管密度和肿瘤组织中新生血管的数量呈正相关.结论:原位接种肝癌中有大量新生血管形成,平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达可以用来标记肿瘤新生血管.肝癌组织中血管内皮细胞生长因子的表达增加可能和肿瘤新生血管的形成有一定的关系.
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幽门螺杆菌相关性胃疾病胃蛋白酶原C的表达研究
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)相关性胃疾病胃蛋白酶原C的表达及其意义.方法:采用免疫组织化学染色法检测318例胃黏膜标本中胃蛋白酶原C的表达情况;采用HE染色、ELISA及PCR方法检测Hpylori感染情况.结果:Hpylori阳性组浅表性生胃炎胃蛋白酶原C抗原的过表达率高于Hpylori阴性组(P＜0.05,X2=0.032,28/33vs15/25),Hpylori阳性组萎缩性胃炎胃蛋白酶原C的表达率低于Hpylori阴性组(P＜0.01,X2=0.003 4/61 vs9/30),Hpylori阳性组的异型增生和胃癌胃蛋白酶原C的表达率与Hpylori阴性组相比有下降趋势(P＞0.05).结论:Hpylori感染与胃蛋白酶原C的表达密切相关,在胃黏膜炎症中胃蛋白酶原C的表达增加;在萎缩性胃炎、异型增生和胃癌中胃蛋白酶原C的表达降低.
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PNO贲门癌淋巴结微转移的检测及其临床意义
近年来贲门癌的发病率显著上升,而远端胃腺癌发病率则稳步下降,说明贲门癌有别于远端胃癌.而近年来淋巴结微转移在胃癌中的研究报道较多,在贲门癌中未见报道.本文采用免疫组织化学染色法,检测常规病理学检查淋巴结转移阴性的贲门癌患者的淋巴结微转移情况,并探讨其相关因素及临床意义.
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Ⅰ期非小细胞肺癌预后与低氧状态和树突细胞浸润的关系
本研究通过免疫组织化学染色法检测肿瘤标本中低氧标记物CA-9、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的水平,以及标本中与抗肿瘤免疫功能有关的树突细胞(dendritic cell,DC)、T淋巴细胞的浸润,探讨它们在早期非小细胞肺癌患者临床和预后中的意义.
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肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征
Alport综合征(Alport syndrome,As)的诊断问题日益受到关注.采用抗不同α(Ⅳ)的单克隆抗体,对肾及皮肤活检组织进行冰冻切片免疫荧光染色对Alport综合征的诊断具有重要价值[1],但冰冻切片难以长期保存,异地标本难以运送,相对于此石蜡切片有其优势.
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p75神经营养素受体在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞侵袭的影响
目的 探讨p75神经营养素受体(NTR)在胃癌组织中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭的影响.方法收集80例经手术切除的胃癌患者的胃癌组织标本及相应的癌旁正常组织标本.体外分离并培养胃癌细胞株,并将其分为p75NTR转染组和阴性对照(NC)组.采用免疫组织化学染色法检测p75NTR在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,分析p75NTR的阳性表达情况与胃癌患者临床特征的关系.分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测胃癌细胞中p75NTR mRNA和p75NTR蛋白的表达水平,采用Transwell小室检测胃癌细胞的侵袭能力,采用细胞黏附实验检测胃癌细胞的黏附能力.结果p75NTR在胃癌组织中的阳性表达率为26.25％(21/80),明显低于癌旁正常组织的73.75％(59/80),差异有统计学意义(P﹤0.01).肿瘤直径﹤5 cm、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移胃癌患者胃癌组织中的p75NTR阳性表达率均高于肿瘤直径≥5 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的胃癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05).不同年龄、性别、分化程度胃癌患者胃癌组织中的p75NTR阳性表达情况比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).转染p75NTR后,NC组胃癌细胞中p75NTR mRNA和蛋白的相对表达量均低于p75NTR转染组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).p75NTR转染组胃癌细胞的黏附率、侵袭率均低于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论p75NTR在胃癌组织中呈低表达,且与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移有关;上调p75NTR表达能够抑制胃癌细胞的侵袭能力和黏附能力,对于胃癌靶向治疗的研究具有一定的参考价值.
关键词： p75神经营养素受体 胃癌 免疫组织化学染色法 侵袭 黏附 -
胃癌组织HER-2基因的检测用于靶向治疗
目的 荧光原位杂交(FISH)法与免疫组织化学(IHC)染色法检测胃癌组织HER-2基因状态,用于靶向治疗.方法 应用FISH法检测77例IHC染色法CerbB-2蛋白表达为(2+)及(3+)的胃腺癌标本中HER-2基因扩增情况.结果 FISH结果,22例HER(3+)标本中,17例存在HER-2基因扩增,符合率77.3％:5例阴性病例中2例为多倍体,占40％.55例HER-2(2+)的病例中,9例(16.3％)存在HER-2基因扩增,46例阴性病例中19例为多倍体,占41.3％.结论 对于IHC筛查HER-2(3+)及HER-2(2+)拟行靶向治疗的病例明确HER2基因状态,需进一步行FISH检测,同时要考虑17号染色体多体的影响.
关键词： 胃腺癌 人类表皮生长因子受体2 免疫组织化学染色法 荧光原位杂交法 -
子宫内膜癌组织中内皮抑素VEGF 微血管密度的表达
目的研究内皮抑素、血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)在子宫内膜癌中的表达及临床应用价值.方法采用免疫组织化学SP法检测46例子宫内膜癌、34例子宫内膜增殖症和12例正常子宫内膜组织中内皮抑素、VEGF、及MVD的表达情况.结果①内皮抑素在子宫内膜癌组织中的阳性率为80.4%,与在子宫内膜增殖症(29.4%)和正常子宫内膜组织(16.7%)中的阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.001);②VEGF在子宫内膜癌组织中阳性率为89.1%,与在子宫内膜增殖症(26.5%)与正常子宫内膜(8.3%)中阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.001);③子宫内膜癌与子宫内膜增殖症、正常子宫内膜之间MVD差异有统计学意义(P＜0.001);④内皮抑素和VEGF在子宫内膜癌组织中的表达与临床手术分期相关(P＜0.05),MVD与临床手术分期、组织学分级、淋巴结转移和肌层浸润均有关(P＜0.001);⑤内皮抑素与VEGF、MVD的表达均有相关性(rs=0.708,P＜0.001;rs=0.335,P＜0.007),且VEGF与MVD的表达也具有相关性(rs=0.323,P＜0.01).结论内皮抑素、VEGF与子宫内膜癌的发生、发展有关.
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BRCA1和TopBP1表达与非小细胞肺癌含铂方案疗效的相关性研究
目的 探讨DNA损伤修复蛋白乳腺癌易感基因-1(BRCA1)和拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(TopBP1)表达与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)含铂方案疗效的相关性.方法 回顾性收集2008年1月～2012年12月我院诊断为非小细胞肺癌、采用含铂方案治疗的患者资料及病理组织标本,以免疫组织化学染色法检测BRCA1和TopBP1表达,评价BRCA1和TopBP1表达与NSCLC临床特征的相关性,并以Kaplan-Meier生存曲线和Cox比例风险回归模型评价BRCA1和TopBP1表达与非小细胞肺癌含铂方案治疗效果的相关性.结果 共101例非小细胞肺癌患者纳入研究,肿瘤组织中BRCA1和TopBP1表达存在显著相关(P ＜0.001,r =0.326);BRCA1和TopBP1与年龄、性别、吸烟状况、病理类型、临床分期均无明显相关性(P＞0.05);BRCA1表达阴性患者生存期显著高于阳性患者(中位生存期34 vs.21 months,HR 1.913,95％CI:1.161 ～3.150,P=0.011).TopBP1表达阴性患者生存期显著高于阳性患者(中位生存期36 vs.23 months,HR 1.931,95％CI:1.157 ～3.224,P=0.012).BRCA1和TopBP1表达与疾病进展时间无显著相关性(P＞0.05).结论 BRCA1和TopBP1表达阴性的NSCLC患者含铂方案疗效较好,是潜在的疗效预测生物标志物.
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子宫内膜样腺癌组织中沉默信息调节因子3的表达及临床意义
目的 探究沉默信息调节因子3(SIRT3)在子宫内膜样腺癌组织中的表达及临床意义.方法 2016年12月至2017年12月该院诊治的子宫内膜样腺癌患者69例,选取同期20例正常内膜组织者、20例子宫内膜增生症者的组织标本,均行免疫组织化学染色法检测,观察不同子宫内膜组织中SIRT3表达及子宫内膜样腺癌临床病理参数与SIRT3的关系.结果 69例子宫内膜样腺癌患者组织中SIRT3阳性率68.1％,高于正常子宫内膜者、子宫内膜增生症患者组织的20.0％、30.0％,差异有统计学意义(P<0.05).病理分期Ⅲ～Ⅳ期的SIRT3阳性率86.4％高于Ⅰ～Ⅱ期的59.6％,浸润程度≥1/2的SIRT3阳性率83.9％高于<1/2的55.3％,差异均有统计学意义(P<0.05);病理分级、雌激素受体是否表达、有无淋巴结转移SIRT3阳性率接近,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 子宫内膜样腺癌组织中的SIRT3表达度高,且表达与病理分期、浸润程度有关.
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子宫内膜癌和子宫平滑肌瘤内皮抑素及CD34内皮祖细胞的表达及其意义
目的 研究子宫内膜癌和子宫平滑肌瘤组织内皮抑素、内皮祖细胞(EPCs)的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化方法检测24例正常子宫内膜、68例子宫肌瘤和92例子宫内膜癌组织中内皮抑素及EPCs的表达,评价其与子宫内膜癌临床病理分期及病情发展的相关性.结果 ①内皮抑素蛋白的表达在正常子宫内膜与子宫平滑肌瘤之间无显著性差异,子宫内膜癌组织中内皮抑素表达明显高于正常子宫内膜组和子宫平滑肌瘤组.②子宫内膜癌CD34 EPCs表达与正常子宫内膜及子宫平滑肌瘤比较均有显著性差异.③临床期别越高,内皮抑素的表达越高,内皮抑素表达与临床手术分期相关(P＜0.05).④临床期别越高,组织分化越差,EPCs表达越高.临床手术分期、组织学分级、淋巴结转移和肌层浸润均与CD34 EPCs表达有关.⑤内皮抑素与EPCs的表达有显著相关性(r=0.708,P＜0.01),内皮抑素水平越高,EPCs表达越多.结论 子宫内膜癌组织内皮抑素和CD34 EPCs表达水平与子宫内膜癌的发生发展及患者预后有关.
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Slit2在肺腺癌中的表达及临床意义
目的 探讨肺腺癌组织和癌旁肺组织中的Slit2的表达及其临床病理意义,进一步探讨Slit2与肺腺癌发生、发展的关系,为肺腺癌的发生和防治机制提供进一步的临床依据.方法 收集2011年1月至2012年1月行肺腺癌手术的标本,共收集肺腺癌组织54例,癌旁正常组织20例,采用免疫组化方法检测Slit2在肺腺癌组织和癌旁肺组织中的表达水平,分析Slit2的表达差异及与临床病理特征的关系及其内在关联.结果 Slit2在癌旁肺组织中的表达高于肺腺癌组织中的表达(P＜0.05),Slit2与肺腺癌的分化程度、淋巴结转移和临床分期相关(P＜0.05).结论 Slit2在肺腺癌中低表达,提示Slit2可能在肿瘤的发生发展过程中起到抑制肿瘤发展的作用;肺腺癌中Slit2的表达与肺腺癌组织的分化程度、有无淋巴结转移和临床分期相关,说明Slit2与肺腺癌的恶性生物学行为密切相关,检测Slit2在肿瘤组织中的表达可为肿瘤患者的预后和监测肿瘤的生物学行为提供依据.
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肾上腺髓质素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织的保护作用
目的 探讨肾上腺髓质素在脑缺血再灌注大鼠脑内的表达情况及其对再灌注损伤的保护作用.方法 采用拴线法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,阻断血流2 h后进行再灌注.应用免疫组织化学染色法检测不同时间点大鼠局灶性脑缺血再灌注后肾上腺髓质素的表达情况,并进行动态观察.结果 正常对照组大鼠脑内即有肾上腺髓质素表达,假手术组术后肾上腺髓质素表达略有增加,但与正常对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05);大鼠脑缺血再灌注后肾上腺髓质素免疫阳性细胞增多,与正常对照组及假手术组相比差异均有显著性意义(P＜0.05);大鼠脑缺血再灌注后缺血侧和缺血对侧肾上腺髓质素免疫阳性细胞均增多,但以缺血侧区域增多为明显.动态观察发现,脑缺血再灌注2 h后,肾上腺髓质素免疫阳性细胞即增多,缺血再灌注6 h达高峰,至1周仍明显增多.结论 脑缺血再灌注后肾上腺髓质素表达增强,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用.
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34βe12和P63在涎腺黏液表皮样癌中的表达研究
涎腺黏液表皮样癌（mucoepidermoid carcinoma，MEC）是口腔颌面部常见的恶性肿瘤，约占涎腺上皮性恶性肿瘤的30％，其中低分化的MEC浸润能力强、恶性程度高，容易发生转移和复发，对患者的生命健康及生活质量存在着严重的影响［1］。在我国MEC多发生于30~50岁的成人，有报告女性略高于男性，好发部位为腮腺和腭部。本研究采用免疫组织化学染色法，分别检测34βe12和P63在MEC中的表达和分布情况，探讨二者在MEC发生发展中的作用及临床意义。
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CD105和CD44v6在胃癌中的表达及意义
CD105是一种主要表达于新生血管内皮细胞上的一种糖蛋白,是一种新型的血管内皮标记物.CD44v6是含V6变异体的CD44拼接变异体,它通过与透明质酸(HA)结合,影响肿瘤细胞之间以及肿瘤细胞与基质的结合能力,增强肿瘤细胞的运动能力,促进肿瘤细胞的浸润和转移.我们应用抗CD105单克隆抗体对胃癌新生血管的微血管密度(MVD)进行定量检测,采用免疫组织化学染色法检测胃癌组织中CD44v6的水平,探讨其在胃癌生长、转移和判断预后中的临床价值.
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肌酸激酶与P53双重免疫组织化学染色法在食管癌中的应用
双重免疫组织化学染色法是在一张切片上显示2种不同抗原成分的免疫组织化学方法[1].这种方法可以了解不同细胞、组织之间的相互关系,甚至可以了解同一种细胞内抗原之间的相互关系[2].本实验运用双重免疫组织化学染色法,在一张切片上完成了食管癌肌酸激酶(CK)与P53两种抗原的表达,用以观察CK阳性的癌细胞是否同时表达P53,现报告如下.
