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增强免疫组化检测方法的探讨
近,在宫颈癌病因多因素分析研究中,对1995~1999年收集的46例经病理学诊断的宫颈癌和38例慢性宫颈炎的活检标本,采用免疫组织化学方法做了PCNA、p53、C-erbB-2、RB、E6等指标的检测。在免疫组化技术的具体操作和运用中,如何增强其检测效果,减少非特异性染色,摸索出了一些经验,现介绍如下。1 材料与方法1.1 免疫生化试剂 SP试剂盒、DAB试剂盒、单克隆抗体购于北京中山生物技术有限公司(系美国ZYMED公司的产品)。1.2 标本 系病理科宫颈癌手术送检标本和部分活检标本。1.3 方法 经10%福尔马林固定,常规石蜡制片。切片厚度为5μm,采用SP法做多种抗体免疫组化染色,同时设阳性、阴性和空白对照。选取相应的阳性切片,分4组对影响免疫组化染色效果的部分因素作对比实验。①抗原修复的不同方法:酶消化、微波炉、压力煮沸;②一抗稀释度1∶30、1∶50、1∶100;③一抗孵育时间:4℃过夜、37℃1~2h;④二抗、三抗的孵育时间:37℃30min、37℃45min。基本步骤:切片常规脱蜡至水,H2O2处理10~15min,抗原修复,PBS冲洗5min×3次,加山羊血清10~15min,加一抗孵育。PBS洗,加二抗孵育,PBS洗,加三抗孵育,PBS冲洗,DAB显色,苏木素复染,脱水、透明、封固。
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结直肠癌中Ki67和OPN的表达及其临床意义
目的:研究结结直肠癌中Ki67和骨桥蛋白(OPN)的表达与临床病理学特征关系.方法:应用免疫组织化学方法检测结直肠癌组织以及癌旁组织中Ki67、OPN的表达.结果:Ki67、OPN表达在癌组织中均显著高于癌旁正常组织(P<0.05);结直肠癌组织Ki67、OPN表达与浸润深度、淋巴结转移、Dukes'分期呈正相关(P<0.05);Ki67与OPN表达呈正相关性(P<0.05).结论:Ki67、OPN在结直肠癌组织中高表达,在结直肠癌的生成和进展中起重要作用.
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母血、脐血及胎盘中内脂素水平与巨大儿的相关性
目的 探讨母血、脐血及胎盘中内脂素水平与巨大儿发生的关系. 方法 收集本院分娩的巨大儿(巨大儿组)产妇40例,及正常体重儿(对照组)40例.应用酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫组织化学方法测定母血、脐血及胎盘中内脂素水平,分析母血内脂素水平与脐血内脂素水平、出生体重、体重指数、胎盘重量的相关性.结果 巨大儿组母血中、脐血中内脂素水平分别为(42.66±5.29) g/L和(43.36±5.25) μg/L,明显高于对照组[(37.30 ±4.98) μg/L和(39.86 ±4.27)μg/L],差异均有统计学意义.巨大儿组胎盘中内脂素阳性率(70.0%)明显高于对照组(42.5%),差异有统计学意义.脐血内脂素水平与新生儿出生体重、新生儿BMI、胎盘重量均正相关(r =0.552、0.493、0.501),与母血内脂素水平无关(r=0.330).母血内脂素水平与新生儿体重及新生儿BMI正相关(r=0.536、0.588). 结论 胎盘中内脂素水平的升高可能与巨大儿的发生有关,母血中内脂素水平的变化有可能作为监测指标应用于临床.
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非小细胞肺癌中CCR5的表达及临床意义
目的:检测CCR5在非小细胞肺癌(NscLc)中的表达情况,探讨其临床意义.方法:采用免疫组织化学方法联合检测100例NSCLC和16例癌旁组织中CCR5的表达.结果:CCR5在NSCLX中的表达阳性率显著高于癌旁组织(71%vs 25%,p<0.05).在有淋巴结转移的肺癌组织的表达高于无淋巴结转移的肺癌组织的表达(89.3%、vs 47.7%,p<0.05),且与NscLc的TNM分期相关(P<0.05).结论:CCR5在NSCLC中有过表达现象,过表达CCR5可作为反映NSCLC细胞转移能力和临床分期的参考指标之一.
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健脾化瘀中药对大鼠胃溃疡愈合质量的影响
目的观察健脾化瘀中药对大鼠消化性溃疡愈合质量的影响,进而阐明其抗胃溃疡的可能机制.方法采用乙酸注射至大鼠胃浆膜下形成胃溃疡模型,随机分为4组,即空白组(灌服生理盐水)、模型组(灌服生理盐水)、雷尼替丁组(灌服雷尼替丁)、中药组(灌服健脾化瘀中药).用HE染色法对大鼠愈合性胃溃疡再生黏膜进行定量观察,用放射免疫的方法检测血清及胃黏膜的表皮生长因子(EGF)的含量;用免疫组织化学法检测胃黏膜表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达.结果中药组再生黏膜厚度高于模型组及雷尼替丁组(P<0.05或P<0.01),中药组及雷尼替丁组胃黏膜组织的EGF的含量显著高于模型组(P<0.01),中药组胃黏膜EGFR蛋白表达较模型组增加(P<0.05).结论健脾化瘀中药可能是通过EGFR介导来促进胃黏膜上皮细胞增生,抑制胃酸,改善胃黏膜微循环,从而提高胃溃疡愈合质量,发挥抗溃疡作用.
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红丝线草对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达的影响
目的 探讨红丝线草对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达的影响.方法 用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,不同浓度红丝线草干预后,取肝脏常规制片并HE染色,免疫组织化学方法检测各组大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达的情况.结果 红丝线草高、中剂量组大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达较模型组明显降低(P<0.05).结论 红丝线草的抗肝纤维化作用,可能与降低TGF-β1及VEGF蛋白的表达而影响细胞外基质的代谢有关.
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人鼻息肉组织中MMP-9及TIMP-1表达的变化
鼻息肉临床常见,发病率高.它的发生是一个涉及多因素、多步骤的过程.本研究应用免疫组织化学方法对38例鼻息肉及10例正常鼻黏膜组织中MMP-9及TIMP-1的表达进行检测,探讨它们与鼻息肉的临床分期分型、患者的年龄及性别的相互关系,从而为鼻息肉的临床诊断及治疗提供帮助.
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肠神经系统脑肠肽神经元的免疫组化研究
近年来,应用免疫组织化学方法发现胃肠壁内的肠神经系统(enteric nervous system, ENS)可以合成和释放许多种脑肠肽,但是与控制胃肠运动有关的脑肠肽是否存在于ENS尚不清楚.我们已报道在灌流大鼠离体胃给以兴奋性脑肠肽胃动素和胃泌素可增强其收缩,而用抑制性脑肠肽血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptides, VIP)则引起其舒张[1].
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病理诊断中几种新抗体的应用体会
对外科病理学来说,利用免疫组织化学方法鉴别各种细胞和组织已成为病理诊断的常规技术,这一方法的应用使肿瘤的诊断及分类更加准确.由于能够得到针对许多细胞标记物的高度特异的单克隆抗体,以及因技术上的进步简化了其在甲醛固定常规处理的组织标本中的应用步骤,免疫组化在病理诊断中的应用不断深入.但随之而来的是新抗体日益增多,使人应接不暇.如何准确分析这些新抗体免疫组化阳性及阴性结果的意义,使之真正发挥诊断价值是病理医生学习的新内容.现将我们工作中的几点体会归纳如下.
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前列腺素合成酶-2在膀胱癌中的表达
前列腺素合成酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)作为前列腺素合成过程中的一个限速酶,与许多肿瘤的形成和发展有关.特别是在结、直肠癌中,已经证明有COX-2的高表达,且应用其抑制剂可以减少结、直肠癌的发生,但其在膀胱癌中的表达情况目前尚不清楚.本文应用免疫组织化学方法,对膀胱肿瘤中COX-2的表达进行了检测,证实其与肿瘤的恶性程度具有相关性.
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nm23 、p53 、PCNA的表达与鼻咽癌转移预后关系的研究
应用免疫组织化学方法,研究鼻咽癌组织中nm23、p53、PCNA的表达,探讨其表达结果与鼻咽癌淋巴结转移及预后的关系.
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NET-1蛋白表达与肝癌临床病理因素相关性探讨
NET-1属于四次跨膜蛋白(TM4S)家族成员[1-3] ,具有显著上调癌形成的作用.我们在研究人体组织中NET-1表达[4] 及分析肝与肝癌组织中NET-1表达差异[5]的基础上,通过基因生物工程的方法制备NET-1多克隆抗体,用免疫组织化学方法检测肝癌中NET-1蛋白表达,探讨其与临床病理因素的关系.
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软组织平滑肌肉瘤中细胞周期蛋白D1基因扩增分析及蛋白表达检测
我们采用差异聚合酶链反应(differential PCR,DPCR)检测软组织平滑肌肉瘤(LMS)中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)基因CCND1的扩增情况,并应用免疫组织化学方法检测cyclin D1表达,以期了解二者的关系.
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食管鳞状细胞癌p53基因突变与p53蛋白过度表达的关系
p53基因是各种人类肿瘤包括食管癌中常见有突变的基因之一.我们应用激光显微切割,聚合酶链反应(PCR)-杂合性缺失(LOH),PCR-单链构象多态性分析(SSCP),p53测序及免疫组织化学方法,检测了食管癌高发区中国山西省的56例患者食管鳞状细胞癌 (ESCC) 中p53基因缺失、突变及p53蛋白表达情况,旨在更好理解p53基因突变等变化在食管癌发生发展过程中的作用.
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先天性巨结肠神经胶质衍化亲神经营养因子的免疫组织化学观察
先天性巨结肠是儿科较常见的疾病,新生儿发病率为1/20 000~1/30 000.其病理表现主要为结肠远端神经节细胞的完全缺乏.现已证实,原癌基因RET是引起先天性巨结肠的主要基因,神经胶质细胞衍化亲神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)是RET基因的配基之一[1].研究结果表明GDNF是有力的神经元的营养因子,可能与神经节细胞移行、分化过程有关.我们采用免疫组织化学方法,观察GDNF在先天性巨结肠各肠段的表达情况,探讨GDNF与先天性巨结肠发生的关系.
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p63蛋白在涎腺组织和肿瘤中的表达
关于p63基因的研究刚刚开始,目前认为p63基因是乳腺正常和肿瘤组织中肌上皮细胞的特异性标记物,也被认为可能是干细胞的标记物[1].因此我们通过免疫组织化学方法检测了p63蛋白产物在涎腺正常组织和涎腺肿瘤中的表达情况,以探讨p63基因表达与涎腺肌上皮细胞和干细胞的关系.
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结直肠癌中β-连环蛋白的表达及意义
近年来的研究表明上皮性肿瘤的侵袭和转移与E-钙黏附蛋白(E-cadherin,E-cad)的功能障碍有关.β-连环蛋白(β-catenin,β-cat)是直接与E-cad连接的连环蛋白,并与α-cat、γ-cat共同组成E-cad/cats复合体,介导同型上皮细胞间的黏附[1].我们应用免疫组织化学方法检测46例结直肠癌组织中β-cat的表达,探讨其与结直肠癌的分化、侵袭和转移的关系.
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B细胞特异性激活蛋白/CD30双标记在经典型Hodgkin淋巴瘤中的表达及意义
关于经典型Hodgkin淋巴瘤(CHL)的细胞属性,目前普遍的观点支持起源于B细胞.在实际工作中我们常规诊断的主要依据之一还是免疫组织化学方法,但由于CHL的特殊的形态学表现(反应性细胞较多,背景杂乱)常常影响对免疫分型的判断.我们探讨免疫组织化学双标记法就是为了寻求一种在实际工作中简单实用,而又能把肿瘤性H/RS细胞显示出来,对其细胞属性进行准确判断的研究方法.
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前列腺癌的神经内分泌分化
一、良性前列腺中的神经内分泌细胞正常前列腺主要由分泌细胞和基底细胞组成,可在HE染色下由普通显微镜分辨.另外还有散在微量的神经内分泌细胞(neuroendocrine cell,NE细胞),该细胞仅能由电镜分辨,或者通过免疫组织化学方法用特异性标记物如嗜铬粒素A(CgA)、突触素(Syn)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)等识别.前列腺的NE细胞具有上皮性、神经性和内分泌性特征,散在分布于前列腺,但在移行区和外周区比在中心区更多见[1].NE细胞的这种分布,可能与前列腺增生和前列腺癌有关.
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Ki-67检测结果与乳腺癌临床病理指标的相关性分析
Ki-67已成为预测乳腺癌患者治疗反应以及预后的重要生物学标志物[1],其检测一般采用免疫组织化学方法,但是目前尚无统一的操作指南对乳腺癌Ki-67免疫组织化学检测进行规范[2]。我们采用组织芯片和计算机图像分析技术分析、评价各因素对Ki-67染色结果的影响,建立了乳腺癌Ki-67标准化免疫组织化学检测流程,并通过与乳腺癌分子分型等临床病理参数的相关性分析进一步验证其临床应用的有效性,为乳腺癌Ki-67规范化检测提供依据。