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活化T细胞核因子与肿瘤生物学行为的研究进展
NFAT蛋白的相关信号传导通路对于细胞功能的调节起到十分重要的作用,如对细胞的增殖、分化、侵袭、转移、血管形成和肿瘤微环境的调节,同时,其在胚胎发育、器官发生、免疫反应及炎症反应中均扮演着重要角色.虽然NFAT家族已被证明在肿瘤的发生发展中有重要的调节功能,但由于其家族中不同亚型在不同细胞中起的作用不同,故进一步了解NFAT家族在肿瘤演变过程中的作用机制,将有利于确定靶向NFAT的肿瘤治疗新策略
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活化T细胞核因子在肺部疾病发生和发展中的作用
活化T细胞核因子(NFAT)是一类具有多向调节功能的转录因子,NFAT在活化T细胞中能与许多其它信号转导系统的转录因子在细胞核内相互作用,完成不同信号间整合,激活特定的基因表达.研究表明,NFAT在支气管哮喘、肺癌、急性肺损伤、肺动脉高压等多种肺部疾病中起重要作用,因此,阐明NFAT分子在肺部疾病发生、发展过程中的作用为疾病的治疗提供新思路和新策略.
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钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在致心肌肥大中的作用
心肌细胞内持续的Ca2+平台激活钙调神经磷酸酶(CaN),使活化T细胞核因子c(NF-ATc)去磷酸化并进入胞核.去磷酸化的NF-ATc再与锌指转录因子(GATA4)等相互作用,活化多种心肌肥厚的相关基因,导致心肌肥厚.免疫抑制剂环胞素A(CsA)、FK506等可抑制CaN活性,消除心肌肥厚而改善心衰.
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活化T细胞核因子参与皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡
目的:研究皮质酮诱导大鼠Leydig细胞凋亡过程中活化T细胞核因子的激活及其功能.方法:经免疫印迹和免疫组织化学技术检测活化T细胞核因子在大鼠Leydig细胞中的表达.通过观察环孢菌素A处理对皮质酮诱导Leydig细胞凋亡的影响评价活化T细胞核因子参与此凋亡的潜在可能性.以激光共聚焦技术监测皮质酮处理Leydig细胞后胞质内钙离子浓度的变化.皮质酮单独或与环孢菌素A共同处理Leydig细胞12小时后,经免疫印迹技术检测活化T细胞核因子在胞质及核内表达水平的变化.通过观察过表达活化T细胞核因子2和环孢菌素A抑制活化T细胞核因子活化对凋亡和FasL表达的影响,进一步评价活化T细胞核因子2在皮质酮诱导大鼠Leydig细胞凋亡中的作用.结果:发现Leydig细胞主要表达活化T细胞核因子2.环孢菌素A可阻断皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡.皮质酮处理使胞质内钙离子浓度显著升高.皮质酮处理使活化T细胞核因子2在胞质内的表达水平下降,在核内的表达量增加.环孢菌素A可阻止此核的转移过程.过表达的活化T细胞核因子2可促进皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡,上调FasL表达;相反,环孢菌素A可阻止皮质酮处理的大鼠Leydig细胞中的FasL表达上调,抑制细胞凋亡发生.结论:在皮质酮诱导大鼠Leydig细胞凋亡过程中,活化T细胞核因子2被激活,活化T细胞核因子2通过上调FasL表达促进细胞凋亡.
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NFAT蛋白各亚型在食管鳞癌组织中的表达与临床病理因素间的关系
背景与目的：研究发现，活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells，NFAT)与多种恶性肿瘤关系密切，食管鳞癌是我国常见的恶性肿瘤之一。本研究探讨食管鳞癌组织NFAT各亚型的表达及其与食管鳞癌各临床病理因素的关系。方法：采用免疫组化法检测104例食管鳞癌组织和癌旁食管黏膜组织中NFAT各亚型的表达情况。结果：NFAT1～4在食管鳞癌组织中阳性表达率分别为53.8%、10.6%、26.9%和45.2%，与在癌旁食管黏膜组织中的表达差异有统计学意义(P<0.001)。NFAT1的表达与饮酒史(62.3%vs 37.1%，P=0.01)、淋巴结转移(68.4%vs 5.5%，P=0.002)及较晚的分期(58.7%vs 36.2%，P=0.02)密切相关，多因素分析提示NFAT1过表达仅与淋巴结转移相关。淋巴结转移者的NFAT3表达率(39.4%)明显高于无淋巴结转移者(19.7%)。结论：NFAT蛋白在食管鳞癌组织中过表达，NFAT1与NFAT3的表达率与淋巴结转移密切相关，可能在肿瘤的发生、发展中起一定作用。
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活化T细胞核因子与肿瘤发生和发展的研究进展
活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)是一组在哺乳动物细胞内广泛表达的转录因子,主要参与精密调控机体生长发育相关的、复杂的细胞内相瓦作用.近年来,越来越多的研究数据显示NFAT与人类肿瘤的发生、发展密切相关在多种肿瘤细胞及肿瘤微环境的复杂间质成分中,NFAT异常活化,促进肿瘤形成和浸润转移.本文旨在阐述目前研究发现的NFKT在肿瘤生物学中发挥的重要作用,涉及肿瘤的形成、生长、存活、恶性转化、侵袭转移和血管生成等过程,以及NFAT在肿瘤发生、发展中的作用机制,预测这些研究结果对于开辟新的肿瘤治疗途径有着重要的意义.
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髓核细胞中活化T细胞核因子对ADAMTS-4启动子的调控作用
目的 观察活化T细胞核因子(NFAT)-1、4、5在髓核细胞中对聚蛋白聚糖酶ADAMTS-4启动子活性的影响,初步探讨椎间盘退变可能的分子机制.方法 将ADAMTS-4-pβ-gal-Basic质粒经限制性内切酶Xho Ⅰ及HindⅢ酶切后插入到PGL3-Basic质粒中,经筛选后获得纯化的PGL3-ADAMTS-4质粒.离体培养后,使用Lipofectamine 2000系统进行转染实验,将NFAT-1、NFAT-4、NFAT-5以及DN-TonEBP质粒和PGL3-ADAMTS-4质粒共转染大鼠髓核细胞.将正常髓核细胞和转染后的髓核细胞分别作为对照组和实验组.用双荧光素酶报告基因检测系统测髓核细胞中NFAT-1、NFAT-4、NFAT-5对ADAMTS-4基因启动子活性的影响.结果 构建了ADAMTS-4基因双荧光素酶报告质粒,发现2个NFAT结合元件.与对照组相比,转染NFAT-1的髓核细胞中ADAMTS-4启动活性被抑制(P＜0.05),而转染NFAT-4、NAFT-5以及DN-TonEBP的髓核中ADAMTS-4启动子活性改变无统计学意义(P＞0.05).结论 NFAT-1可调控ADAMTS-4的表达,可能在椎间盘生理以及退变过程中对蛋白聚糖的含量起重要调控作用,为椎间盘退变的生物学治疗提供了一个新的策略.
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环孢素A抑制大鼠腹主动脉球囊损伤后内膜增生
观察环孢素A防止血管内膜增生作用与单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平的关系.雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组(n=12)、手术组(n=12)、干预组(n=12).术后30 d取实验材料,血管组织作HE染色;荧光定量PCR技术检测损伤血管壁钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)、活化T细胞核因子3(Nuclear factor of activated T cell,NFATc3)、MCP-1在mRNA水平上的表达变化;ELISA法测定血浆MCP-1在蛋白水平上的表达变化.假手术组内膜无增生,手术组血管壁内膜明显增生,干预组内膜亦出现增生,但内膜增生、内膜/中膜厚度与手术组相比较明显减轻(P＜0.05).干预组与手术组相比较,血管壁组织CaN、NFATc3、MCP-1 mRNA表达明显减少(P＜0.05).血浆MCP-1水平干预组与手术组相比明显降低(P＜0.05).环孢素A通过抑制CaN-NFATc信号通路减轻受损血管壁以及血浆的炎症因子MCP-1水平,从而减轻球囊损伤术后动脉内膜增生.
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转录因子——新型抗肿瘤药物作用靶点
真核生物基因的调控机制是当前分子生物学较为活跃的研究领域之一,而转录水平的调控是基因发挥功能的一个复杂过程.转录因子因其存在的广泛性和调控靶基因的多样性,与肿瘤细胞的生长、增殖、凋亡、浸润转移及血管生成等各个环节密切相关.随着对转录因子及其作用机制的深入研究,针对转录因子活化与抑制从不同环节寻找药物用于靶向治疗和预防与转录因子调控相关的肿瘤疾病,已成为当今新的研究热点,有望成为研究新型抗肿瘤药物作用机制的有效途径.
关键词： 转录因子 抗肿瘤 核转录因子 信号转导和转录激活因子 活化T细胞核因子 -
瓣膜病患者钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子通路与心房纤颤的关系
目的 探讨瓣膜病患者钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子通路(CaN-NFAT通路)与心房纤颤的关系.方法 选择因瓣膜病接受换瓣手术治疗患者43例,根据心律状况分为慢性持续性房颤组(n=24)和窦性心律组(n=19),术前抽取外周静脉血,术中取右心耳心肌组织.在查体中心抽取20例健康查体者的静脉血标本为健康对照组.以β-actin为内参照,采用RT-PCR法分别检测房颤组和窦性心律组外周血淋巴细胞及心肌组织中的CaN催化亚基(CnA)的α(CnAα)、β(CnAβ)异构体、NFATc3、NFATc4的mRNA水平,健康对照组外周血淋巴细胞中的CnAd、CnAβ、NFATc3和NFATc4的mRNA水平.结果 与窦性心律组和健康对照组相比,房颤组外周血淋巴细胞中CnAα、CnAβ、NFATc3的mRNA水平升高(P＜0.05).与窦性心律组相比,房颤组心肌细胞中的CnAα、CnAβ、NFATc3和NFATc4的mRNA水平升高(P＜0.05).结论 钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子通路可能与瓣膜病患者心房纤颤有关.
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活化T细胞核因子与变态反应性疾病关系研究进展
活化T细胞核因子(nuclear factor of activatedT cell,NFAT)为细胞信号转导中的一类重要因子,早被认为是一种可结合和上调T细胞中白细胞介素(interleukin,IL)-2基因启动子的诱导性核因子.NFAT联合其他转录因子参与调节多个与变态反应性疾病相关的细胞因子如IL-4、IL-31、IL-17等的转录.本文就NFAT参与调节相关效应因子表达及其在变态反应性疾病发生、发展中的作用作一综述.
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高迁移率族蛋白B1与活化T细胞核因子2之间存在直接相互作用
目的:探讨高迁移率蛋白1(high mobility protein box 1,HMGB1)与活化T细胞核因子2(nuclear factor of activating T cells 2,NFAT2)之间的直接相互作用.方法:首先观察HMGB1与NFAT2在细胞外的相互作用,构建pET28a(+)-HMGB1、pGEX-KG-NFAT2质粒,应用网织红细胞系统进行体外翻译得到带有放射性硫同位素“S的His-HMGB1融合蛋白.应用蛋白纯化技术得到的GST-NFAT2融合蛋白,利用GST-pulldown实验检验二者在体外是否可直接结合;然后观察HMGB1与NFAT2在细胞内能否直接结合,构建HMGB1和NFAT2的真核表达质粒,共同转染人胚胎肾293T细胞系,刺激之后裂解细胞,应用相应的抗体进行免疫共沉淀检测,观察二者在细胞内直接结合的情况.结果:利用GST-pull down实验及免疫共沉淀实验证实,HMGB1 全长蛋白与NFAT2全长蛋白在细胞内、外有直接结合的条带,而对照组没有结合条带,说明HMGB1可与NFAT2特异性结合.结论:HMGB1与NFAT2之间存在直接相互作用.
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TAT介导的活化T细胞核因子衍生多肽对钙调神经磷酸酶的影响
目的:研究钙调神经磷酸酶(CaN)与活化T细胞核因子(NFAT)相互作用保守位点衍生的多肽和人免疫缺陷病毒(HIV) TAT的融合多肽对CaN-NFAT信号途径的影响.方法:根据CaN-NFAT的结合位点经计算机优化后得到PVIGIT,并和TAT融合成新的多肽PepNFAT-TAT,用异硫氰酸荧光素(FITC)荧光标记后加至携带CaN催化亚基cDNA的重组质粒pRED-CnA转染过的神经细胞LN-229中,再用离子霉素刺激,用激光共聚焦显微镜观察该融合多肽的细胞定位,并检测该多肽对CaN酶活性的影响,报告基因pNFAT-luc实验检测其对NTAF激活的影响,实时定量RT-PCR检测其对NFAT下游基因白细胞介素-4(IL-4)表达的影响.结果:该融合蛋白定位于细胞质中,报告基因实验显示该多肽能够抑制对NFAT的激活,抑制离子霉素诱导IL-4的表达.结论:融合多肽PepNFAT-TAT能抑制CaN-NFAT信号途径,但对CaN的酶活性没有影响,是潜在的免疫抑制剂.
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球囊扩张术后大鼠腹主动脉钙调神经磷酸酶、血浆MCP-1的变化
目的 探讨大鼠腹主动脉球囊扩张术后内膜增生、钙调神经磷酸酶( calcineurin,CaN)信号通路以及炎症水平的变化.方法 雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组24只和球囊组24只.球囊损伤术后30天取材,血管组织作HE染色,光学显微镜观察病理学改变,免疫组织化学检测钙调神经磷酸酶在血管壁中的表达；ELISA法测定血清单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平.结果 球囊损伤后血管壁出现新生内膜,形成的新生内膜厚度不均.球囊组与假手术组相比较内膜增生、内膜/中膜厚度明显增加(P＜0.05).免疫组织化学检测血管壁上钙调神经磷酸酶表达,球囊组与假手术组相比表达明显增加(P＜0.05).血浆炎症因子血清单核细胞趋化蛋白1水平球囊组与假手术组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 球囊扩张术导致大鼠腹主动脉内膜增生,同时伴随钙调神经磷酸酶蛋白表达明显增强以及血浆的炎症因子血清单核细胞趋化蛋白1水平升高,提示钙调神经磷酸酶信号通路和炎症因子血清单核细胞趋化蛋白1可能在球囊损伤后内膜增生过程中起重要作用.
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地塞米松对哮喘鼠活化T细胞核因子c1及气道炎症的影响
目的 观察地塞米松对哮喘小鼠活化T细胞核因子c1 (NFATc1)表达及气道炎症的影响.方法 建立哮喘小鼠模型并收集支气管肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中细胞因子白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)及γ干扰素(IFN-γ)水平,免疫组织化学法测定气道周围淋巴细胞中NFATc1蛋白的表达.结果 哮喘小鼠IL-4、IL-5水平及NFATc1蛋白表达较正常组升高,差异有统计学意义(P＜0.05);地塞米松干预组IL-4、IL-5水平及NFATc1蛋白表达较哮喘组降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 地塞米松可抑制NFATc1的表达,降低细胞因子IL-4、IL-5水平,减轻哮喘气道炎症.
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CaN-NFATc3途径在大鼠腹主动脉球囊扩张术后再狭窄中的作用
目的 研究钙调神经磷酸酶(CaN)及其下游活化T细胞核因子(NFATc3)在球囊扩张术后再狭窄中的作用,为防治血管再狭窄提供新的理论依据.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=12)、球囊组(n=12)、环孢菌素(CsA)组(n=12).球囊组大鼠用球囊扩张术损伤腹主动脉;CsA组大鼠从手术前3d至实验结束,每天灌喂CsA12.5 mg/(kg.d)-1.球囊损伤术后30 d取材,血管组织作苏木素—伊红(HE)染色、免疫组化检测CaN在血管壁中的水平,光学显微镜观察病理学改变;Real time PCR技术检测血管壁组织中CaN、NFATc3的mRNA表达;Elisa法测定血清MCP-1水平.结果 球囊损伤后血管壁出现新生内膜,且厚度不均;CsA组与球囊损伤组相比较内膜增生、内膜冲膜厚度明显减轻(P＜0.05).与假手术组相比,球囊损伤组血管壁组织CaN蛋白及mRNA表达均明显升高、NFATc3的mRNA表达显著增加,血浆炎症因子MCP-1水平也升高(P＜0.05).CsA组上述各项指标均显著低于球囊损伤组(P＜0.05).结论 CaN-NFATc3途径参与大鼠球囊损伤术后再狭窄的发生;CsA通过抑制该通路减轻再狭窄的形成.
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钙调神经磷酸酶信号通路及负调控信号糖原合成酶-3β对大鼠经皮血管成形术后再狭窄的作用
目的 研究钙调神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子(NFAT)信号通路及此通路抑制因子糖原合成酶-3β(GSK-3β)在大鼠腹主动脉球囊损伤后再狭窄中的作用,为防治血管再狭窄提供新的理论依据.方法 选取雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组(n=12)和球囊组(n=12).在球囊组,将球囊导管自左颈总动脉插至腹主动脉末端扩张回抽,造成损伤;假手术组仅行颈部正中切开.两组均在术后30 d取材,常规组织切片观察血管病理学改变,RT-PCR法检测血管组织中GSK-3β和白细胞介素-2(IL-2)的mRNA表达变化,Western blot法检测CaN、活化T细胞核因子1(NFATC1)、GSK-3β、磷酸化GSK-3β(P-GSK-3β)在血管壁中的蛋白表达水平.结果 球囊组损伤后血管壁内膜明显增殖,新生内膜厚度不均;球囊组较假手术组内膜/中膜厚度明显增加(P<0.01).球囊组IL-2 mRNA表达量比假手术组表达升高(P<0.01),球囊组GSK-3β mRNA表达量与假手术组差异无统计学意义(P>0.05).球囊组血管组织CaN和NFATC1、P-GSK-3β蛋白表达量均较假手术组明显升高(P<0.05).结论 球囊损伤后血管内膜增殖,伴随CaN-NFAT信号通路及其负调控信号GSK-3β途径的活化.
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吡格列酮对非肥胖糖尿病小鼠脾细胞分化的调节机制
目的 探讨过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)配体激动剂吡格列酮调节非肥胖糖尿病(NOD) 小鼠脾细胞分化的机制.方法 (1)取12周龄未发病NOD鼠脾细胞培养,分别为加培养液、吡格列酮、活化T细胞核因子(NFAT)激动剂豆蔻酰佛波脂乙酯(PMA)、NFAT抑制剂11R-VIVIT培养的对照组、吡格列酮组、PMA组和11R-VIVIT组.(2)ELASA法检测上清γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平及脾细胞核因子PPARγ、NFATc1活性水平.结果 (1) 在培养的脾细胞中,吡格列酮组和11-RVIVIT组与对照组比,PPARγ活性增加(0.08±0.01、0.06±0.02 vs 0.02±0.01,P=0.000 和P=0.001)、NFATc1活性下降(0.18±0.01、0.18±0.02 vs 0.23±0.03,P=0.029 和P=0.012).(2)培养的脾细胞上清液中,IFN-γ水平(pg/mL)在吡格列酮组和11R-VIVIT组比对照组降低(500.70±66.45、337.92±20.57 vs 692.20±44.98,P=0.006 和P=0.000),PMA组IL-4 水平(pg/mL)比对照组低(134.31±56.12 vs 214.63±49.16,P=0.006).(3)与对照组比,IL-4/IFN-γ值在吡格列酮组和11R-VIVIT组增高(0.49±0.08、0.66±0.09 vs 0.31±0.08,均P=0.000),在PMA组降低(0.19±0.10 vs 0.31±0.08,P=0.036).(4) PPARγ活性与NFATc1活性和IFN-γ水平呈负相关(r=-0.598、r=-0.610,P=0.005 和P=0.004),与IL-4/IFN-γ值呈正相关(r=0.588,P=0.006).结论 吡格列酮能活化NOD鼠脾细胞PPARγ,降低NFATc1活性、下调上清液IFN-γ,使Th细胞向Th1方向分化减少,上调IL-4/IFN-γ值,免疫平衡向Th2偏移.
关键词： 糖尿病 过氧化物酶体增殖活化受体γ 活化T细胞核因子 -
活化T细胞核因子在吡格列酮预防非肥胖糖尿病小鼠糖尿病中作用机制的探讨
目的：探讨吡格列酮预防非肥胖糖尿病（NOD）小鼠糖尿病的机制及活化 T 细胞核因子（NFAT ）的作用。方法（1）将4周龄NOD雌鼠随机分为吡格列酮组（摄食含0．02％吡格列酮的混合饲料）及对照组（普通营养饲料），各21只。观察30周龄的累积糖尿病发病率。（2）各组取12周龄未发病NOD鼠（n＝15）胰腺苏木素-伊红（HE）染色观察胰岛炎的严重程度；RT-PCR半定量检测脾脏白细胞介素4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）和核因子过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）mRNA表达水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清IL-4和IFN-γ水平及脾脏PPARγ、活化T细胞核因子c1（NFATc1）活性。结果（1）15周龄时，吡格列酮组及对照组发病率分别为4．76％和33．33％（ P＜0．05）；30周龄时，吡格列酮组及对照组发病率分别为57．14％和76．19％（ P＞0．05）。（2）12周龄时，吡格列酮组胰岛炎指数（1．79±0．75）低于对照组（2．38±0．66）。（3）吡格列酮组脾脏IFN-γmRNA相对光密度值（0．16±0．07）显著低于对照组（0．53±0．26）；而PPARγ mRNA表达水平（0．91）则高于对照组（0．25）。（4）12周龄NOD鼠吡格列酮组血清IFN-γ水平（561．05±78．61）pg/mL显著低于对照组（666．43±28．42）pg/mL。（5）12周龄吡格列酮组NOD鼠脾细胞PPARγ活性（0．05±0．01）高于对照组（0．02±0．01），NFATc1活性（0．23±0．04）低于对照组（0．33±0．04）。结论吡格列酮活化PPARγ，降低NFATc1活性，减少IFN-γmRNA ，血清IFN-γ下降，辅助性 T （Th）细胞向辅助性T细胞1型（Th1）方向分化减少，减轻NOD鼠胰岛炎，降低糖尿病的发生。
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活化T细胞核因子对组成性启动子SV40的调控作用
目的:利用双荧光素酶报告系统探讨活化T细胞核因子(NFAT)能否调控常见组成性启动子CMV,SV40和TK,为不同条件下选择合适双荧光报告系统内参提供依据.方法:用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ分别从质粒pCDNA3.1和pRL-TK中切下CMV和TK启动子,克隆至pGL3-basic载体中,构建成pCMV-Luc和pTK-Luc载体.将构建pCMV-Luc和pTK-Luc以及商品化的pGL3-control(SV40启动子驱动),分别与SV40 (pBIND)和TK(pRL-TK)两种启动子驱动的两种内参质粒共转染入HEK293细胞；观察过表达组成性活化NFAT后相对荧光素酶活性读数的改变.结果:成功构建了pCMV-Luc和pTK-Luc质粒,荧光素酶活性检测发现,常见组成性启动子SV40启动子对过表达组成性活化的NFAT存在一定的反应.结论:T细胞活化过程中重要的转录因子NFAT能够调控SV40启动子活性；表明常见组成性启动子SV40并非真正、绝对的组成性不变.因此,在荧光素酶报告系统内参选择时需要充分考虑该问题,本研究为合理选择内参质粒提供了一个可行策略.
