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压力负荷下缬沙坦对钙调神经磷酸酶介导心肌肥大通路的影响
目的:探讨压力超负荷模型下血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂缬沙坦对钙调神经磷酸酶(CaN)介导心肌肥大通路的影响及AngⅡ的致心肌肥厚作用.方法:腹主动脉缩窄法建立大鼠压力超负荷模型,放射免疫法检测血浆、心肌AngⅡ浓度,Western Blot检测心肌CaN,活化T细胞核因子(NFAT3)蛋白表达,发色底物法检测CaN比活性,并测定左室重量指数.结果:缬沙坦组血浆AngⅡ浓度高于对照组(P<0.05),心肌AngⅡ浓度则相反(P<0.05),缬沙坦组CaN表达及活性低于对照组(P<0.01),NFAT3表达低于对照组(P<0.05),两组各项指标与假手术组相比均差异显著.结论:AngⅡ参与激活压力负荷下钙调神经磷酸酶通路,缬沙坦间接干预钙调神经磷酸酶介导通路并抑制心肌肥厚的形成.
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桂枝汤对脾虚大鼠NFAT mRNA,IL-4 mRNA,IFN-γ mRNA的干预作用
目的:采用RT-PCR方法来探讨桂枝汤对脾虚NFAT mRNA,IL-4 mRNA,IFN-γ mRNA的影响以及干预Th1/Th2细胞漂移的机制.方法:40只大鼠随机分为空白对照组(A组)、脾虚组(B组)、桂枝汤大剂量组(C组)和桂枝汤小剂量组(D组)等4组,每组10只;用规范的脾气虚证大鼠模型造模方法将B,C和D组大鼠造模,B,C和D组分别用蒸馏水、桂枝汤大剂量、桂枝汤小剂量灌胃,标本采集后用RT-PCR检测NFAT mRNA, IL-4 mRNA和IFN-γ mRNA表达水平.结果:脾虚组的NFAT mRNA,IL-4 mRNA表达上调;而IFN-γ mRNA表达下调,经桂枝汤大、小剂量组治疗后,NFAT mRNA,IL-4 mRNA表达下调,IFN-γ mRNA表达上调.结论:桂枝汤对Th1/Th2细胞漂移作用途径可能是通过下调NFAT mRNA的表达,恢复了IFN-γ mRNA正常转录水平,进而下调IL-4 mRNA的表达,使脾虚大鼠Th1/Th2细胞达到一种新的平衡.
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他克莫司通过活化T细胞核因子c1促进大鼠创伤性脑损伤后神经功能修复的作用
目的 探讨他克莫司通过调节活化T细胞核因子(NFAT)c1促进大鼠创伤性脑损伤(TBI)后神经功能修复的作用. 方法 选择90只SD大鼠,利用液压打击制作大鼠中度TBI模型.按随机数字表分为假手术组、TBI组和他克莫司治疗组.假手术组只接受开颅手术并连续7d腹腔注射等体积0.9％等渗盐水;TBI组连续7d腹腔注射等体积0.9％等渗盐水;他克莫司组连续7d腹腔注射等体积他克莫司(1 mg/kg).利用改良神经功能评分(mNSS)和水通道蛋白(AQP4) mRNA表达评价神经功能损伤程度.TBI后1,7,14 d采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和RT-PCR检测白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)蛋白和mRNA表达,RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测钙调神经磷酸酶(CaN)和NFATc1信号通路活化情况. 结果 mNSS结果显示,他克莫司治疗组在TBI后1,7,14 d得分显著低于TBI组(P＜0.05),但仍高于假手术组.RT-PCR结果显示,TBI后1d他克莫司治疗组AQP4 mRNA的表达水平显著降低,但仍高于假手术组.ELISA和RT-PCR结果显示,与TBI组比较,他克莫司治疗组在各时相点IL-2和IFN-γ的mRNA表达水平和蛋白含量均降低,尤以1d降低为显著(P＜0.05).RT-PCR和Westernblot结果显示,与TBI组比较,他克莫司治疗组TBI后CaN的mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05).免疫荧光检测结果显示,与假手术组比较,TBI后7d胞浆中NFATc1显著入核;与TBI组比较,他克莫司治疗组TBI胞浆中NFATc-1的蛋白入核受到抑制(P＜0.05). 结论他克莫司通过调节N FATc1来抑制炎症反应,减轻中度TBI后脑水肿程度,促进神经功能修复.
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高迁移率蛋白B1与活化T细胞核因子2协同促进白细胞介素-2报告基因转录表达
目的 探讨高迁移率蛋白B1(HMGB1)促进白细胞介素(IL)-2转录表达免疫效应的分子机制.方法 构建HMGB1和活化T细胞核因子2(NFAT2)的真核表达质粒,分别单独转染以及共同转染人胚胎肾细胞系293T、人子宫颈癌细胞系Hela,同时转染IL-2报告基因,检测IL-2报告基因的表达活性.观察当HMGB1与NFAT2质粒共同转染细胞时,是否能协同促进IL-2报告基因的活性.结果 在293T细胞中,HMGB1或NFAT2单独转染可提高活性倍数相加为6.8倍,而二者共转时报告基因活性与未刺激对照组相比提高了18.4倍.在Hela细胞中,二者单独转染可提高活性倍数相加为49.9倍,而二者共转时报告基因活性与未刺激对照组相比提高了117.7倍.结论 HMGB1可与NFAT2可协同促进IL-2报告基因转录表达.
