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过氧化物酶体增殖物激活受体α基因在全氟辛酸致大鼠肝BRL-3A细胞氧化损伤中的作用
目的 通过抑制和激活基因表达的方式,研究过氧化物酶体增殖物激活受体α基因(PPARα)在全氟辛酸(PFOA)致大鼠肝BRL-3A细胞氧化损伤中的作用.方法 体外培养大鼠肝BRL-3A细胞,分为空白对照组(NC)、PFOA实验对照组、PPARα抑制剂组(GW6471)、PPARα激动剂组(WY14643)、PPARα抑制剂预处理PFOA组(GW6471+PFOA)、PPARα激动剂预处理PFOA组(WY14643+PFOA).荧光免疫细胞化学检测法检测基因抑制和激动表达情况;自由基指示剂H2DCFDA检测活性氧(ROS)含量;qPCR检测PPARα及其下游基因Cyp4a1的表达;Western blot检测PPARα蛋白表达水平.结果 通过抑制剂和激动剂成功抑制和激动了PPARα在大鼠肝BRL-3A细胞中的表达.GW6471+PFOA组与空白对照组、PFOA实验对照组比较,细胞内ROS含量显著升高(P＜0.05);WY14643+PFOA组与空白对照组、PFOA实验对照组相比,ROS含量明显下降(P＜0.05).PPARα及其下游基因Cyp4a1在GW6471+PFOA组中的表达比PPARα抑制剂组高,但相较PFOA实验对照组明显降低(P＜0.05).WY14643+PFOA组相关基因的表达虽然低于PPARα激动剂组,但显著高于PFOA实验对照组(P＜0.05).GW6471+PFOA组中PPARα蛋白的表达水平较抑制剂组有所上调,但与空白对照组相比差异无统计学意义.WY14643+PFOA组中PPARα蛋白的表达水平与激动剂组比差异无统计学意义,但却显著高于PFOA实验对照组(P＜0.05).结论 PFOA的暴露可以激活PPARα的表达,减轻细胞内ROS的累积,PPARα在PFOA导致的大鼠肝脏细胞氧化损伤中起到了一定的保护作用.
关键词： 全氟辛酸 氧化损伤 过氧化物酶体增殖物激活受体α 肝脏细胞 -
电针联合饮食调控对非酒精性脂肪性肝病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α和肝型脂肪酸结合蛋白的影响
目的:观察电针联合饮食调控对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)和肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)的影响,探讨电针对NAFLD的治疗机制.方法:雄性SD大鼠随机分为普食组(n=15)和高脂饮食造模组(n=45),造模组饲以高脂饲料建立NAFLD动物模型,造模成功后从普食组中随机抽取10只作为正常组,从高脂造模组中随机抽取持续高脂饮食组、电针+持续高脂饮食组、转低脂饮食组以及电针+转低脂饮食组,每组各10只.电针+持续高脂饮食组和电针+转低脂饮食组以毫针刺激"足三里""三阴交""太冲"穴,每日1次,每次20 min,连续4周.HE染色观察肝组织病理改变,酶法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量,比色法检测血清游离脂肪酸(FFA)含量,Western blot法检测肝脏PPAR-α、L-FABP的蛋白表达,RT-PCR法检测PPAR-α、L-FABP的基因表达.结果:持续高脂饮食组出现中度至重度大泡型脂肪变性,肝细胞索排列紊乱;电针+持续高脂饮食组和转低脂饮食组以小泡型脂肪变性为主;电针+转低脂饮食组肝细胞索排列有序,肝细胞形态趋于正常,脂肪变性明显减轻.持续高脂饮食组血清TC、TG、FFA的含量明显高于正常组(P＜0.05),转低脂饮食组和电针+持续高脂饮食组与持续高脂饮食组相比较明显降低(P＜0.05),电针+转低脂饮食组较电针+持续高脂饮食组和转低脂饮食组显著降低(P＜0.05).持续高脂饮食组大鼠肝脏PPAR-α蛋白及基因表达较正常组显著降低,而L-FABP蛋白及基因明显升高(P＜0.05);电针+持续高脂饮食组和转低脂饮食组与持续高脂饮食组比较,PPAR-α蛋白及基因表达升高,L-FABP蛋白及基因表达降低(P＜0.05);电针+转低脂饮食组与电针+持续高脂饮食组和转低脂饮食组比较,PPAR-α蛋白及基因表达进一步升高,L-FABP蛋白及基因表达明显降低(P＜0.05).结论:电针及低脂饮食均可以调节NAFLD大鼠脂质及肝组织PPAR-α、L-FABP,且联合作用效果优于单一治疗手段.
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疏肝健脾方药对NAFLD大鼠肝组织PPARαmRNA和TNF-α蛋白表达的影响
目的:观察疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病( non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor alpha,PPARα)mRNA和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)蛋白表达的影响及作用机制.方法:高脂饲料喂养大鼠12周建立NAFLD模型后,造模组大鼠随机分为模型组、疏肝组、健脾组、综合组、三七脂肝丸组和自然恢复组.除模型组继续高脂饮食外,其余各组均以基础饲料喂养,治疗组分别给予相应药物ig,其他各组给予相应蒸馏水ig.治疗8周后,腹主动脉采血,全自动生化仪检测血脂、肝功能及肝脂；常规HE染色观察肝组织病理变化；RT-PCR法检测肝组织PPARα mRNA表达；免疫组化法检测肝组织TNF-α蛋白表达.结果:与模型组比较,药物治疗各组及自然恢复组肝脏脂变程度明显减轻；血脂、肝脂、肝功能指数明显降低(P＜0.01)；肝组织PPARα mRNA表达均有不同程度的上调(P＜0.05),以疏肝组、健脾组、综合组上调尤为明显(P ＜0.01)；TNF-α阳性细胞表达明显减少(P＜0.01),而以疏肝组、健脾组趋势为显著.结论:疏肝健脾方药对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠有较好的治疗作用,其机制可能与其上调PPARαmRNA和下调TNF-α蛋白表达水平有关.
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富硒灵芝多糖调节SCD1,PPARα改善非酒精性脂肪肝病大鼠症状
目的:探讨富硒灵芝多糖对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠血脂、炎性因子、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的影响.方法:120只SD大鼠随机分为正常组,高脂饮食组(模型组),多烯磷脂酰胆碱(50 mg·kg-1)组和富硒灵芝多糖低、中、高剂量(0.3,0.6,1.2g·kg-1,ig)组,高脂高糖饮食12周复制NAFLD模型,相应治疗4和8周后处死大鼠各半,测定血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),白细胞介素-1α(IL-1α),白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),肝脏匀浆中SCDI和PPARα含量.结果:处理4周后,与正常组相比,模型组肝脏有明显脂肪空泡,且伴有炎症反应;与模型组相比,富硒灵芝3个治疗组脂肪颗粒明显减少.处理8周后,与正常组相比,模型组HDL-C,LDL-C,IL-1α,IL-1β和TNF-α明显升高,与模型组相比,富硒灵芝多糖3个组的HDL-C,LDL-C,IL-1α,IL-1β和TNF-α明显降低(P＜0.05),治疗8周后进一步降低,与多烯磷脂酰胆碱组无显著差异.处理4周后,与正常组相比,模型组肝脏SCD1和PPARα mRNA和蛋白表达降低,与模型组相比,富硒灵芝多糖3个组肝脏SCD1和PPARα mRNA和蛋白表达明显升高,多烯磷脂酰胆碱处理对肝脏SCD1和PPARα mRNA和蛋白表达改善优于富硒灵芝多糖治疗组.结论:富硒灵芝多糖可改善NAFLD大鼠肝脏SCD1和PPARα表达,效果虽弱于多烯磷脂酰胆碱,但也可较好的调节血脂和炎症.
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葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型PPAR-α及PGC-1表达的影响
目的:观察葱白提取物对脂肪变性肝细胞模型中PPAR-α及PGC-1表达的影响,探讨其防治脂肪肝的作用机制.方法:建立游离脂肪酸诱导的细胞脂肪变性模型.用不同浓度葱白提取物进行干预24h后,MTT检测的细胞活性；油红O染色观察细胞内的脂滴；生化细胞内TG、ALT、AST含量；RT-PCR和Western Blotling分别检测细胞内PPAR-α、PGC-1基因的mRNA和蛋白表达.结果:游离脂肪酸诱导24h后,油红O染色显示脂肪变性；模型组TG含量较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)；各组转氨酶没有明显变化；同时胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达降低.而葱白提取物各剂量组胞内的TG较模型组显著降低,差异有统计学意(P<0.05,P<0.01),并且胞内PPAR-α、PGC-1的mRNA、蛋白表达显著升高,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论:葱白提取物对脂肪变性肝细胞有明显的保护作用,其机制町能与PPAR-α、PGC-1基因表达上调有关.
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复方贞术调脂方对非酒精性脂肪肝的肝PPARα及其下游基因的影响
目的 观察复方贞术调脂方(FTZ)对高脂饮食致非酒精性脂肪肝的预防作用,并探讨其相关机制.方法 20只雄性C57BL/6j小鼠按随机数表法分为模型组及FTZ组,每组10只.两组均予高脂饮食喂养,同时模型组予5％阿拉伯树胶水溶液灌胃,FTZ组予FTZ浸膏粉溶液灌胃(每日1.17 g/kg,以5％阿拉伯树胶水溶液为溶剂,10 mL/kg灌胃给药),两组每日1次给药,共给药5个月.监测小鼠进食量及体重情况,检测治疗前后小鼠血糖、血脂水平,治疗后进行口服糖耐量实验(OGTT),并计算曲线下面积(AUC).观察肝脏病理情况,测定肝脏脂质含量,Real-time PCR法检测肝内过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉碱脂酰转移酶1 (CPT1) mRNA表达.结果 两组小鼠进食量相近,差异无统计学意义(P＞0.05),但是高脂喂养3个月后FTZ组小鼠体重明显低于模型组(P＜0.05).治疗前,两组TG、TC及空腹血糖比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后,与模型组比较,FTZ组小鼠TC、TG、空腹血糖、肝脏TC、TG水平降低(P＜0.05),OGTT实验AUC明显减少(P＜0.05),肝脏中PPARα及CPT1 mRNA表达升高(P＜ 0.05,P＜0.01).两组小鼠肝脏重量、内脏脂肪及腹股沟脂肪称重结果比较,差异无统计学意义(P＞0.05).模型组小鼠可观察到肝脏明显脂质沉积,汇管区周围、中央静脉周围可见大量肝细胞空泡变性及水样变性,淋巴细胞浸润,少量肝细胞点状坏死.而FTZ组肝脏空泡变性及水样变性程度明显轻于模型组.结论 FTZ可延缓高脂饮食所致的非酒精性脂肪肝的发生,其机制与上调肝PPARα及其下游基因CPT1,促进脂肪酸氧化,改善胰岛素敏感性有关.
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消脂护肝胶囊对非酒精性脂肪性肝病大鼠病理及PPARα基因的影响
目的 研究消脂护肝胶囊对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因表达的影响. 方法 将32只SD大鼠随机分为4组,每组各8只,空白组予普通饲料,模型组、观察组、对照组以高脂饲料联合四环素腹腔注射建立NAFLD模型,并于造模1周后观察组给予消脂护肝胶囊,对照组予东宝肝泰片治疗,第7周处死大鼠,观察肝组织PPARα mRNA表达情况以及肝脏病理;丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平,肝匀浆游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的变化. 结果 观察组PPARα mRNA表达增加,血清ALT、AST、TC、TG水平及肝匀浆FFA、MDA含量降低,SOD增加,肝脂肪变性程度减轻,效果优于对照组. 结论 消脂护肝胶囊能够激活PPARα mRNA表达,同时可阻止脂质过氧化反应,从而发挥防治NAFLD的作用.
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过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）对脂多糖刺激巨噬细胞引发炎症反应的影响
目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α（ PPARα）对脂多糖刺激巨噬细胞引发炎症反应的影响及其调节机制。方法通过小鼠的股骨分离骨髓干细胞，经过分化培养获得骨髓来源的巨噬细胞，再通过脂多糖刺激巨噬细胞诱导细胞炎症因子表达的细胞模型。利用PPARα选择性激动剂Wy14643干预炎症细胞模型，3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）和Atg7小干扰RNA（Atg7 siRNA）分别作为自噬抑制剂干预自噬。通过实时定量PCR方法检测炎症细胞因子肿瘤坏死因子α（ tumor necrosis factorα，TNF-α）、白细胞介素-1β（ interleukin-1β，IL-1β）、IL-6和自噬相关基因Atg5、Atg7、Beclin-1的mRNA表达水平；通过免疫印迹技术检测自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Beclin-1和LC3的表达；质粒GFP-LC3转染并观察自噬点的形成。结果研究表明，不同浓度的PPARα选择性激动剂Wy14643（10μmol／L、25μmol／L和50μmol／L）预处理LPS刺激的巨噬细胞，与单独LPS刺激巨噬细胞相比，细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达下降，并具有剂量依赖性。此外，不同浓度Wy14643作用于巨噬细胞，也同时促进自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Beclin-1的mRNA水平表达升高；Western blot结果显示自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Beclin-1和LC3表达增加；荧光显微镜观察显示巨噬细胞中自噬点的形成增加。在Wy14643预处理的基础上，3-MA和Atg7 siRNA分别抑制细胞自噬，结果显示炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平发生了逆转，重新表达升高。结论 PPARα激活可抑制LPS刺激巨噬细胞诱导的促炎细胞因子的表达，并且PPARα通过促进细胞自噬而发挥抗炎作用。因此，PPARα-自噬分子途径是调控LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的信号通路之一。
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体α 细胞自噬 炎症反应 巨噬细胞 脂多糖 -
有氧运动和膳食干预改善代谢综合征大鼠脂质代谢的效果及过氧化物酶体增殖物激活受体α介导的机制
目的 通过对代谢综合征大鼠施加运动和膳食干预,观察有氧运动对代谢综合征脂代谢紊乱的调节作用,并探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)介导的可能机制.方法 Sprague-Dawley大鼠喂养1周后随机分为空白对照组(CC组)和造模组,后者高脂高盐饲料喂养18周.造模成功后,将成模大鼠随机分为模型对照组(MC组,n=9)、模型高脂运动组(MHE组,n=11)和模型普食运动组(ME组,n=11).ME组和MHE组跑台训练12周后测定体质量、肾周脂质量、血游离脂肪酸(FFA)、血脂,用荧光定量RT-PCR和Western blotting法测定心肌组织中的PPARαmRNA和蛋白表达水平.结果 与CC组相比,MC组体质量、肾周脂质量、FFA、血脂升高(P<0.05),PPARαmRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与MC组比较,MHE组和ME组体质量、肾周脂质量、血三酰甘油(TG)较均降低(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)、PPARαmRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);与MHE组比较,ME组低密度脂蛋白(LDL)水平降低(P<0.05),PPARαmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01).结论 有氧训练能激活PPARα的表达,加强脂肪酸的利用,从而降低代谢综合征大鼠体质量和内脏脂肪质量,调节机体脂代谢.
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长期有氧运动对代谢综合征大鼠炎症及心肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响
目的:研究有氧运动对代谢综合征(MS)大鼠炎症反应的影响以及心肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARa)的表达,探讨运动对MS心血管炎症反应调节的可能机制.方法:4周龄SD雄性大鼠随机分为基础对照组(C)和高脂高盐饲料喂养组.18周后将MS大鼠随机分为模型对照组(MC)、模型运动组(ME).运动组大鼠行60min/d、27m/min、5％坡度跑台训练12周.ELISA法测定血清IL-6、TNF-α、MCP-1含量;荧光定量R-PCR测定心肌组织PPARαmRNA表达、Western Blot测定心肌PPARα蛋白含量.结果:①与C组相比,MC组血清IL-6、TNF-α、MCP-1含量显著升高(P＜ 0.05、P＜0.01、P＜0.01)、MC组心肌PPARa mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05);②与MC组相比,ME组大鼠血清IL-6、TNF-α、MCP-1含量显著降低(P＜ 0.05、P＜0.01、P＜ 0.01)、ME组心肌PPARα mRNA和蛋白表达显著升高(P＜ 0.05、P＜0.01).结论:MS大鼠炎症反应明显,长期有氧运动干预能有效降低其炎症反应,PPARα可能介导了机体的炎症反应.
关键词： 运动 代谢综合征 过氧化物酶体增殖物激活受体α 炎症 -
过氧化物酶体增殖物激活受体α对急性肝衰竭小鼠内质网应激的影响
目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)通过调控内质网应激(ERS)在小鼠急性肝衰竭(ALF)肝损伤病理机制中的作用.方法 腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)和脂多糖(LPS)诱导小鼠ALF模型.将小鼠分为对照组(仅给予相应量的磷酸盐缓冲液,10只)、模型组(16只)和Wy-14643干预组(造模前2 h以6 mg/kg通过尾静脉注射,16只).同时,将模型组进一步分为给药后1、3、6h 3个亚组,比较各亚组与对照组间内质网应激特异性凋亡蛋白CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和PPARα表达情况.建模6 h后,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)评价肝脏功能.采用免疫印迹技术比较对照组、模型组及Wy-14643干预组间caspase-3、cleaved caspase-3、CHOP表达情况.另取13只小鼠为4-丁酸苯酯(4-PBA)干预组(建模前6 h腹腔注射给予100 mg/kg的4-PBA),比较对照组、模型组及4-PBA干预组间PPARα 蛋白及mRNA表达情况.结果 与对照组相比,随着ALF的逐渐进展,模型组给药后3、6 h CHOP表达显著升高(F=6.341,P=0.025),PPARα表达显著降低(F=7.115,P=0.022).三组小鼠间血清ALT、AST、caspase-3、cleaved caspase-3和CHOP表达水平比较,差异均有统计学意义(F=8.454,P=0.027;F=10.252,P=0.016;F=6.231,P=0.042;F=30.072,P<0.001;F=8.596,P=0.014).Wy-14643干预组血清ALT[(524±330)U/L vs.(1465±485)U/L]、AST[(1227±314)U/L vs.(4038±1537)U/L]水平均显著低于模型组(P均<0.05),且与模型组相比,对照组与Wy-14643干预组小鼠caspase-3显著升高,cleaved caspase-3和CHOP表达显著降低(P均<0.05).与此同时,4-PBA干预组PPARα的mRNA和蛋白表达均显著高于模型组(F=6.665,P=0.017;F=5.441,P=0.043).结论 PPARα可能通过抑制严重内质网应激而保护小鼠急性肝衰竭后肝损伤.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体α 肝功能衰竭 急性 内质网 小鼠 -
过氧化物酶体增殖物激活受体α的激活可以减轻高糖高脂诱导的心肌细胞凋亡
目的 探讨激活过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)对高糖高脂诱导的心肌细胞凋亡的影响.方法 将培养的心肌细胞分为:1)正常组(N组);2)高糖高脂组(H组);3)高糖高脂+PPARα特异性激动剂匹尼尼酸(Wy14643)组(S组).TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测各组细胞PPARα蛋白的表达.结果 H组凋亡细胞较N组增多[(71.34±0.01)% vs (2.50±0.01)%,P＜0.01];H组PPARα蛋白表达下降(0.08±0.02),与N组(0.12±0.02)比较,P＜0.01;PPARα激活剂匹尼尼酸可抑制高糖高脂引起的心肌细胞凋亡,同时伴有培养液中 PPARα蛋白的表达增高(0.16±0.0119 vs 0.08±0.02,P＜0.01).结论 胞核PPARα的表达增高可抑制高糖高脂培养的心肌细胞凋亡,有可能参与机体对高糖高脂血症的自我保护过程.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体α 心肌细胞 凋亡 -
非诺贝特抑制心肌细胞肥大的信号转导途径
目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)对内皮素1诱导的心肌肥大的作用及其对蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β-活化T细胞核因子(Akt/GSK3β-NFATc4)信号通路的影响.方法 培养新生SD大鼠的心肌细胞,构建PPAR-α-EGFPN3质粒并转染心肌细胞,采用[~3H]亮氨酸掺入法、蛋白免疫印迹(Western blot)技术、免疫荧光技术等方法,观察PPAR-α过表达对内皮素1诱导的心肌细胞蛋白质合成的作用以及PPAR-α过表达对内皮素1诱导的Akt/GSK3β磷酸化和NFATc4核移位的影响.结果 PPAR-α过表达和PPAR-α激动剂非诺贝特显著抑制了内皮素1诱导的心肌肥大;PPAR-α过表达及PPAR-α过表达联用非诺贝特可以显著抑制内皮素1诱导的Akt/GSK3β磷酸化;PPAR-α过表达防止了内皮素1诱导的NFATc4由胞浆到胞核的移位.结论 PPAR-α可能通过影响Akt/GSK3β-NFATc4信号通路来抑制内皮素1诱导的心肌肥大反应.
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瘦素对脂变人肝细胞TG的含量及PPARα、CPT-I表达的影响
目的:探讨瘦素对肝细胞脂质变性的作用及其机制.方法:以离体人肝L-02细胞株制备肝细胞脂肪变性模型.实验分为正常肝细胞组、人肝L-02细胞脂肪变性模型组、瘦素不同浓度处理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(浓度分别为10-8、10-7、10-6mol/L)和阳性对照组.孵育24 h后,油红O染色观察细胞形态和细胞内脂滴的形成,高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内甘油三酯(TG)的含量.RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)及其目标基因肉碱转移酶-I(CPT-D) mRNA水平的表达.结果:模型组和瘦素I组细胞质中有较多的脂滴形成,而瘦素Ⅱ、Ⅲ组、正常组、阳性对照组胞质中脂滴较少.瘦素浓度为10-8、10-7、10-6mol/L时,肝细胞中TG的含量为1.063±0.146、0.648±0.023、0.553±0.045 mmoL/g蛋白,呈细胞依赖性减少.瘦素Ⅱ、Ⅲ组与阳性对照组比较.PPARα仅的mRNA表达上升更为明显,差别有统计学意义(p<0.01);但瘦素I组与阳性对照组之间无显著性差异.模型组与正常组比较,CPT-I mRNA表达无明显改变,经瘦素处理后,较模型组相比,CPT-I mRNA表达明显上升(p<0.01).结论:瘦素能降低人肝L-02脂变细胞内TG的含量,呈剂量依赖关系,其降低细胞内TG作用可能与PPARα及其目标基因表达上调有关.
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缺氧对过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响
目的研究不同程度缺氧条件下,肺癌A549细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达状况,及反义封闭HIF-1α后,对PPARα表达的影响,以了解PPARα和HIF-1α的相关性.方法首先将A549细胞分为4组:正常对照组(A组)、缺氧24小时组(B组)、缺氧48小时组(C组)、缺氧72小时组(D组).观察不同缺氧时间对PPARα及HIF-1α蛋白和mRNA表达水平的影响.为观察HIF-1α对PPARα表达状况的影响,再设计4组:对照组2(E组),HIF-1α反义寡核苷酸组(F组),HIF-1α正义寡核苷酸组(G组),HIF-1α错义寡核苷酸组(H组).结果正常对照组,PPARα和HIF-1α蛋白及mRNA均有少量表达;随着缺氧时间的延长,两者的表达水平逐渐升高.在缺氧24小时,两者mRNA和蛋白开始增高,48小时明显增高,至72小时达到高峰.反义封闭HIF-1α后, PPARα蛋白及mRNA的表达水平明显下降.结论 PPARα及HIF-1α的表达水平随肿瘤细胞缺氧信号的加强而增加,且PPARα受HIF-1α的调控.
关键词： 肺肿瘤 细胞低氧 缺氧诱导因子1α 过氧化物酶体增殖物激活受体α -
姜黄素诱导急性高脂血症大鼠肝脏肉毒碱棕榈酰基转移酶1A及过氧化物酶体增殖物激活受体α表达
目的 观察姜黄素对过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)/肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT-1A)通路的影响,探讨其对急性高脂血症大鼠肝脏脂代谢的作用及可能机制.方法 选取5~6周龄雄性SD大鼠随机分为6组:对照组(NC组)、高脂模型组(Model组)、姜黄素低剂量组(LC组,125 mg·kg-1·d-1),姜黄素中剂量组(MC组,250 mg·kg-1·d-1)、姜黄素高剂量组(HC组,500 mg·kg-1·d-1)剂量组和非诺贝特组(FF组,30 mg·kg-1·d-1),每组8只.NC、Model组给予玉米油(5 ml·kg-1·d-1)灌胃,姜黄素组和FF组分别给予相应药物灌胃(药物用等量玉米油溶解),每日1次.干预10 d后除NC组外一次性腹腔注射75%新鲜蛋黄乳液(25 ml/kg)制备急性高脂血症大鼠模型(NC组腹腔注射的等量生理盐水).24 h后检测各组大鼠血清血脂谱及肝脏游离脂肪酸(FFA)和甘油三酯(TG)含量,苏木素伊红(HE)及油红O染色观察肝组织形态及脂肪沉积,实时定量聚合酶链反应、Western blotting法测定PPAR-α、CPT-1A mRNA及蛋白含量.组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用小显著差异法(LSD)检验.结果 低、中、高剂量姜黄素组血清TG、FFA水平及肝组织TG、FFA含量较Model组降低(t=2.196~27.350,均P<0.05),肝细胞肿胀及空泡变程度减轻,脂滴含量减少.Model组PPAR-α、CPT-1A mRNA(0.009±0.003、0.048±0.012)表达较NC组(0.022±0.003、0.086±0.003)降低(t=-2.862、-30.262,均P<0.05),姜黄素组较Model组升高(t=-22.870~-5.509,均P<0.01);Model组PPAR-α、CPT-1A蛋白(0.64±0.05、0.128±0.012)表达较NC组(0.98±0.09、0.186±0.018)降低(t=-2.905、-4.145,均P<0.05),LC、MC和HC组均较Model组升高且呈剂量依赖性(t=-31.065~-6.571,均P<0.01).结论 姜黄素可能通过上调PPAR-α/CPT-1A通路而降低血脂,改善肝脏脂代谢,起到保护肝脏的作用.
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衰竭心肌能量代谢重构及β3肾上腺素能受体、过氧化物酶体增殖物激活受体α表达变化的研究
目的 通过检测衰竭与健康心肌组织代谢底物含量、相关酶活性及β3肾上腺素能受体、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因和蛋白表达的变化,探讨衰竭心肌代谢重构的表现及可能机制.方法 选取6例意外伤亡健康者心肌组织和20例心外科瓣膜置换术的心力衰竭患者,检测心肌游离脂肪酸(FFA)、乳酸(LD)含量和ATP酶活力.应用逆转录聚合酶链反应、Western blot和免疫组化法分别检测心肌组织β3受体和PPARα mRNA表达以及蛋白和定位.结果 衰竭心肌FFA和LD含量明显增加(P＜0.01和P＜0.05).Na+K+-ATP酶和Ca2+Mg2+-ATP酶活性则显著降低(P＜0.05和P＜0.01).衰竭心肌β3肾上腺素能受体mRNA和蛋白表达明显高于正常心肌,而PPARα表达则显著低于正常心肌,但并未发生定位变化.结论 心力衰竭时存在代谢重构,表现为心肌代谢底物发生转变,代谢相关酶活性下降等,β3肾上腺素能受体和PPARα在衰竭心肌分别上调和下调,可能参与心肌组织代谢重构.
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PPARα与2型糖尿病性骨质疏松的相关性研究进展
糖尿病(diabetes mellitus,DM)在我国的发病率呈逐年递增趋势,并趋于发病人群年轻化,特别是与代谢障碍和肥胖相关的2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM).糖尿病性骨质疏松(diabetic osteoporosis,DOP)的发病机制仍不清楚,治疗上也主要是对症的抗骨质疏松,无法进行早监测、早发现及早干预.研究发现过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisomeproliferators-activated receptors,PPARs)在糖尿病大鼠骨髓中有着差异表达,PPARα的表达程度与DOP有着密不可分的联系,其机制可能与氧化应激、胰岛素抵抗(IR)或者PI3K/Akt及NF-kB等信号通路的相关.本文拟就PPARα对T2DM患者骨代谢的研究进展进行综述.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体α 2型糖尿病 骨代谢 -
有氧运动抑制心力衰竭大鼠心脏脂质沉积:AMPK-PPARα信号通路的作用
目的:观察8周有氧运动对心力衰竭大鼠心脏脂质沉积和心功能的影响,探讨AMP激活的蛋白激酶(AMPK)—过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)信号通路在其中的作用机制.方法:结扎大鼠冠状动脉建立心梗后心衰模型,术后4周随机分为假手术安静组(Sham组)、心梗安静组(MI-Sed组)和心梗运动组(MI-Ex组).MI-Ex组进行为期8周的跑台运动,Sham组和MI-Sed组保持安静状态.实验结束后,左心室导管法测定血流动力学参数包括左心室收缩期压力(LVSP)、左心室舒张末期压力(LVEDP)、左心室压力大上升速率(+dp/dtmax)和左室压力大下降速率(-dp/dtmax)；比色法测定心肌和血浆游离脂肪酸(FFA)水平；氧化酶法测定心肌甘油三酯含量；实时荧光定量PCR检测心肌PPARα和肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)mRNA水平；Western blot法检测心肌总AMPKα、磷酸化的AMPKα (p-AMPKα)、PPARα和CPT-1蛋白表达水平.结果:与Sham组比较,MI-Sed组LVSP、±dp/dtmax显著性下降(均为P＜0.01),LVEDP则显著性升高(P＜0.01)；血浆FFA、心肌FFA和甘油三酯水平升高(均为P＜ 0.01)；心肌PPARα和CPT-1 mRNA及蛋白显著降低(均为P＜0.01),p-AMPKα蛋白显著升高(P＜0.05).与MI-Sed组比较,MI-Ex组LVSP、±dp/dtmax显著性升高(均为P＜0.01),LVEDP则显著性下降(P＜0.01)；血浆FFA、心肌FFA和甘油三酯水平显著降低(均为P＜0.01)；心肌PPARα和CPT-1 mRNA和蛋白以及p-AMPKα蛋白水平均显著性升高(均为P＜0.01).结论:长期有氧运动活化AMPK-PPARα信号通路,上调CPT-1表达,促进心肌对FFA的氧化利用,从而减轻HF后心脏脂质过度沉积、改善脂毒性心脏异常并提高心功能.
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多不饱和脂肪酸与肝脏脂质代谢的调控
多不饱和脂肪酸(PUFA)通过调控转录因子的活性及含量调节多种基因的转录.PUFA能够激活过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARa),上调参与肝脏脂肪酸氧化的基因转录,抑制固醇调节元件结合蛋白-1C(SREBP-1C),下调参与肝脏脂肪合成的基因表达.PPARct与SREBP-1C在非酒精性脂肪肝(NAFLD)的发病过程中发挥重要作用.本文就PUFA对PPARα、SREBP-1c及其他参与脂质代谢的核转录因子如肝脏x受体、肝脏核因子-4等的调控加以综述,为NAFLD的治疗提供新思路.
