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CD146在肾脏疾病中的研究进展
CD146是近年来发现的一种具有跨膜结构的细胞黏附分子,属于免疫球蛋白超家族成员[1].CD146初是用一株特异性识别人黑色素瘤细胞的单克隆抗体从人黑色素瘤cDNA文库筛选克隆到的[2],后又通过对纯化的黑素瘤相关抗原A32和内皮相关抗原S-Endo-1进行氨基酸序列分析亦确定为同一分子.CD146作为钙离子非依赖性细胞黏附分子,它能促进肿瘤生长、血行转移,是肿瘤进展和转移的标志物[3~5].
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多肽内切酶鉴定牙龈卟啉单胞菌血凝素2结合位点
目的 利用多肽内切酶分析牙龈卟啉单胞菌凝血素2 (Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2,PgHA-2)与氯化血红素结合位点的氨基酸序列.方法 Endoproteinase Lys-C多肽内切酶水解获得与氯化血红素结合的功能性的多肽片段,质谱技术鉴定多肽片段的氨基酸序列.结果 质谱鉴定与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列为YAVNDGFPGDHYAVMISK.结论 进一步明确了HA-2与氯化血红素结合位点的氨基酸序列,为牙周病的预防和治疗方法的改进奠定基础.
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结核分枝杆菌抗原分析及免疫交叉反应研究
目的:筛选和鉴定结核分枝杆菌特异性和保护性抗原,研究结核杆菌的免疫反应特点,以探索结核病诊断和治疗的新途径.方法:采用超声破碎和滤膜抽滤的方法分别得到菌体蛋白和滤液蛋白,通过Western blot试验用结核杆菌的单克隆抗体及结核病人血清来检测蛋白样品,把发生阳性反应的蛋白在BECKMAN LF3200/多肽氨基酸序列测定仪上进行N末端序列分析,并用结核杆菌的单抗对自身抗原组蛋白进行了检测.结果:结核杆菌的31 kD和30 kD蛋白与结核杆菌的单抗及病人血清反应均呈阳性,但与正常小鼠血清和健康人血清反应呈阴性.31 kD和30 kD蛋白的N末端序列分别为:Ala Glu Val Asp Trp Leu Val Phe Ala Val 和 Phe Ser Arg Pro Gly Leu Pro Val Glu Tyr.结核分枝杆菌的单抗与自身抗原组蛋白能发生免疫交叉反应.结论:结核杆菌的31 kD和30 kD蛋白是免疫保护性抗原,对免疫交叉反应分子基础的进一步研究必将增加对结核免疫机理的了解.
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骨肉瘤相关新分子5D3Ag的研究
目的:自建的抗人骨肉瘤单克隆抗体mAb5D3经鉴定有很好的骨肉瘤细胞特异性,并且已利用单抗纯化出相应的骨肉瘤相关抗原5D3Ag纯品,研究目的是测定5D3Ag氨基酸序列,鉴定5D3Ag是否为一新发现的骨肉瘤相关抗原.方法:用SDS-PAGE法分析5D3Ag纯度和分子量,并做免疫印迹分析,用半干式转移法将5D3Ag转移到氨基酸测序膜上,测定其氨基酸序列,在蛋白质序列中比较分析,初步推断此抗原的性质及是否为新发现的骨肉瘤相关抗原.结果:5D3Ag经SDS-PAGE分析达到了电泳纯,分子量为43 kD;Western Blot分析显示5D3Ag可以与mAb5D3结合;5D3Ag N端10个氨基酸序列为:门冬酰胺、谷氨酰胺、甘氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺(NQGSHGSEAQ).结论:5D3Ag从其分子量来看与以往文献所报道的骨肉瘤相关抗原的分子量都不相同;氨基酸序列结果查询分析,与蛋白质库中已知的蛋白质同源性很低,由此推断5D3Ag可能是一种新的骨肉瘤相关抗原.
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牛牙骨质附着蛋白N末端氨基酸序列分析
目的:对牛牙骨质附着蛋白进行N末端氨基酸序列分析,为牙骨质附着蛋白的克隆表达提供一定的理论依据.方法:应用乙酸和盐酸胍提取法获取牛牙骨质附着蛋白,鉴定纯度后进行N末端氨基酸序列分析.结果:所获得的牛牙骨质附着蛋白纯度＞95%,N末端15个氨基酸残基为:Ile、Pro、Leu、Asp、Pro、Val、Ala、Gly、Cys、Lys、Glu、Pro、Ala、Ala、Asp.结论:测得的氨基酸序列具有特异性.
