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细胞因子诱导的杀伤细胞治疗对恶性肿瘤患者免疫功能的影响
近年来恶性肿瘤的发病率越来越高,严重影响到患者的生活质量,特别是其病程凶猛,很多失去了手术机会.目前细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是继手术化疗放射之后第4种抗肿瘤及细胞免疫治疗的有效方法[1].我们选择2011年7月至2012年3月恶性肿瘤患者进行CIK细胞治疗共31例,采用流式细胞仪检测患者经CIK治疗前后,淋巴细胞亚群的百分含量,为临床治疗提供依据,现将结果报告如下.
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DC-CIK细胞免疫治疗晚期肿瘤的护理
目的:探讨DC-CIK细胞免疫治疗晚期肿瘤的护理方法.方法 D通过对52例晚期肿瘤患者行DC-CIK细胞免疫治疗不同时期进行分析,采取相应护理措施,注重护理观察,在回输治疗操作过程中认真执行每一步,确保治疗过程顺利进行.结果:52例患者全部顺利完成治疗.结论:在DC-CIK细胞免疫治疗晚期肿瘤患者时,给予全方位的整体护理,可以减轻患者忧虑,增进治疗效果,从而提高患者的生活质量.
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T细胞、NKT和NK细胞在结核病诊断中的意义探讨
目的 探讨CD3+T细胞、CD3+CD16+CD56+N KT 细胞及CD3-CDl6+CD56+N K 细胞在肺结核患者外周血的表达状态及其临床意义.方法采用流式细胞仪分析123例肺结核患者(73例初治肺结核和50例复治肺结核)及83例健康者(43例结核菌素皮试阳性和40例结核菌素皮试阴性)外周血中T细胞、NKT和NK细胞的表达率.结果 初、复治肺结核患者的NKT细胞表达率明显高于健康者(P＜0.01),但初治肺结核患者的NK细胞、T细胞的表达率与健康者相比差异无统计学意义(P＞0.05).T 细胞表达率在不同程度的初治肺结核患者中差异有统计学意义(P＜0.01),疾病越重,表达越高.NKT、NK细胞差异无统计学意义(P＞0.05).复治肺结核患者的T细胞表达率显著高于初治肺结核患者(P＜0.01),但NK细胞、NKT 细胞的表达率在2组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 T 细胞、NKT细胞是结核病细胞免疫的重要组成部分.对NKT细胞只在活动性肺结核患者才会呈现高表达,测定外周血NKT细胞可能成为辅助诊断活动性肺结核的手段之一.
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自体CIK细胞的体外增殖与免疫学表型的研究
目的:观察人体CIK(cytokine-induced killer)细胞的体外增殖和免疫学表型.方法:健康自愿者的成份血,用淋巴细胞分离液分离获得外周血单个核细胞(PBMC),在体外与不同细胞因子(IFN-γ,IL-1α,IL-2,CD3mAb)共同培养诱导成CIK细胞和LAK细胞,观察不同的增殖能力;用免疫学染色法对CIK和LAK进行免疫学表型分析.结果:经诱导的CIK细胞增殖显著高于LAK细胞(P<0.01);以CD3、CD56型增殖为主.结论:CIK和LAK细胞均属异质细胞群,起主要效应细胞不同,前者以CD3、CD56型细胞为主,后者以CD3、CD8型细胞为主.
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自体细胞因子诱导的杀伤细胞治疗急性白血病临床研究
目的:探讨自体细胞因子诱导的杀伤细胞治疗急性白血病的临床疗效,为医院提高急性白血病的整体诊治水平提供重要的数据参考.方法:收治急性白血病患者68例,作为研究对象,并按照入院先后顺序,将其分为对照组和观察组,每组34例,其中对照组单用化疗治疗,观察组在此基础上加用自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗,分析和比较两组的临床治疗情况.结果:经研究发现,观察组34例患者中,共有32例获得完全缓解,治愈率94.12％;2例发生骨髓抑制期感染(5.88％);并且无1例死亡;分别与对照组的27例(82.35％)、7例(20.59％)和4例(11.76％)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:给予急性白血病患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞治疗,能够有效提高临床治疗效果,控制骨髓抑制期感染率,提高患者的生存质量,具有较高的临床应用价值.
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香菇多糖联合CIK细胞对恶性胸腔积液的临床研究
恶性胸腔积液是晚期癌症的一个常见并发症,严重影响患者生活质量.有效地控制恶性胸腔积液对提高患者生活质量,延长生存期有重要意义,2007年5月～2012年5月采用胸腔留置中心静脉导管引流胸腔积液,向胸腔内注入香菇多糖(LNT)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)静脉输注治疗恶性胸腹腔积液患者62例,取得良好疗效,现将结果报告如下.
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微囊藻毒素LR对DNA和自然杀伤细胞的损伤效应研究
目的研究和探讨微囊藻毒素LR(microcystins LR,MCLR)的致癌和促癌机制.方法用单细胞微量凝胶电泳技术和3H-TdR释放法研究了MCLR对大鼠DNA及小鼠自然杀伤细胞(NK细胞)的损伤效应.结果研究表明,不同剂量的MCLR均可引起大鼠淋巴细胞DNA的损伤,其DNA迁移长度与对照组相比差异有高度显著性;随着剂量的增加和注射时间的延长对DNA的损伤效应未发现明显剂量反应关系;且在停止注射后DNA的损伤很快可得到修复.同时体内和体外动物试验还显示,MCLR可降低小鼠NK细胞对YAC-1细胞的杀伤活性,与对照组相比其差别有显著性.结论本研究将为进一步从分子水平及细胞水平阐明MCLR的促癌、致癌机制提供理论依据.
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肺气虚证和肺阴虚证患者外周血NK细胞表达分析
目的:观察肺气虚证患者和肺阴虚证患者外周血自然杀伤细胞(NK细胞)表达状况.方法:应用流式细胞仪分别对58例肺气虚证患者、12例肺阴虚证患者和20例健康查体者CD16/CD56进行测定.结果:肺气虚证患者和肺阴虚证患者NK细胞活性下降;肺气虚证各组间NK细胞活性也存在明显的差异.结论:肺气虚证患者免疫功能由早期的活跃状态逐步发展到不同程度的免疫抑制,然后发展至肺阴虚证,终导致免疫系统内环境稳定失调.
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艾灸神阙穴对移植瘤小鼠血清白细胞介素12及NK细胞活性的影响
目的:观察艾灸对H-22荷瘤小鼠血清白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素12(IL-12)水平、NK细胞活性及腹水瘤细胞活性的影响,探讨艾灸抗肿瘤的机制.方法:采用双抗体夹心ELISA法,测定小鼠血清IL-12、IL-2水平;采用MTT法测定小鼠NK细胞活性.结果:艾灸能提高荷瘤小鼠血清IL-12、IL-2水平,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05);艾灸能提高荷瘤小鼠NK细胞杀伤率,与移植瘤对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:艾灸有抑制肿瘤生长的作用,此作用与其提高血清IL-2、IL-12水平,增强NK细胞杀伤活性有关.
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与CIK细胞共培养降低K562/ADR来源DC细胞MDR-1基因表达
细胞因子诱导的杀伤细胞(eytokine induced killer cell,CIK)是一种高效、新型的免疫活性细胞.树突细胞(dendritic cells,DC)是目前发现的功能强的抗原呈递细胞(APC),它通过处理、呈递抗原,介导机体的免疫应答[1].
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CFSE/PI双标法检测CIK细胞对顺铂预处理肿瘤细胞的杀伤活性
细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞,具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等优点.如何对CIK细胞的效应功能进行客观准确的评价,如何使CIK和化疗有机地结合在一起,对CIK的临床应用具有重要的意义.
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免疫杀伤细胞治疗对恶性肿瘤患者T淋巴细胞免疫功能的影响
目的 探讨链式激活和诱导的免疫杀伤细胞(CAPRI细胞)治疗对肿瘤患者T淋巴细胞免疫功能的影响.方法 接受CAPRI细胞治疗的滨州医学院附属医院肿瘤内科收治的50例恶性肿瘤患者为研究对象(肿瘤组),同时选择体检健康者30例为对照组,用流式细胞术检测所有患者治疗前后外周血T淋巴细胞CD3+及CD4+、CD8+的百分率,计算CD4+/CD8+比值并进行比较.结果 肿瘤患者治疗前外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+[ (56.40±7.14)％、(30.69±8.01)％、(29.10±7.13)％、1.05 ±0.28]与健康对照组[(66.78±6.05)％、(41.35±5.71)％、(26.08±5.36)％、1.59±0.31]及治疗后13 d[ (59.35±6.31)％、(34.95±7.21)％、(27.95±6.03)％、1.25±0.22]和治疗后25d[(62.36±6.41)％、(37.03±7.62)％、( 25.04±4.53)％、1.46±0.48]比较,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显降低、CD8+均明显升高(均P＜0.05);治疗后25d与治疗后13d比较,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显升高、CD8+均明显降低(均P＜0.05).结论 CAPRI细胞治疗肿瘤,能够纠正CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+失衡状态,能够调节机体T淋巴细胞的免疫功能.
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免疫杀伤细胞治疗对恶性肿瘤患者T淋巴细胞免疫功能的影响
目的 探讨链式激活和诱导的免疫杀伤细胞(CAPRI细胞)治疗对肿瘤患者T淋巴细胞免疫功能的影响.方法 接受CAPRI细胞治疗的滨州医学院附属医院肿瘤内科收治的50例恶性肿瘤患者为研究对象(肿瘤组),同时选择体检健康者30例为对照组,用流式细胞术检测所有患者治疗前后外周血T淋巴细胞CD3+及CD4+、CD8+的百分率,计算CD4+/CD8+比值并进行比较.结果 肿瘤患者治疗前外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+[ (56.40±7.14)％、(30.69±8.01)％、(29.10±7.13)％、1.05 ±0.28]与健康对照组[(66.78±6.05)％、(41.35±5.71)％、(26.08±5.36)％、1.59±0.31]及治疗后13 d[ (59.35±6.31)％、(34.95±7.21)％、(27.95±6.03)％、1.25±0.22]和治疗后25d[(62.36±6.41)％、(37.03±7.62)％、( 25.04±4.53)％、1.46±0.48]比较,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显降低、CD8+均明显升高(均P＜0.05);治疗后25d与治疗后13d比较,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显升高、CD8+均明显降低(均P＜0.05).结论 CAPRI细胞治疗肿瘤,能够纠正CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+失衡状态,能够调节机体T淋巴细胞的免疫功能.
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干式融化箱与水浴锅复苏细胞因子诱导的杀伤细胞的比较
目的 对比干式融化箱与水浴锅复苏冻存细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)的效果.方法 提取10份健康志愿者外周血单个核细胞分别诱导培养CIK细胞并冻存于-80℃冰箱.1个月后从每份CIK细胞中取出相同的两个冻存管,分别采用干式融化箱和水浴锅进行复苏.记录复苏时间,检测复苏后细胞存活率及对K562细胞的杀伤作用.结果 干式融化箱较水浴锅复苏时间较长[(4.33±0.19)min、(2.47±0.30) min],差异有统计学意义(P＜0.05).但两种方法复苏的CIK细胞存活率[(89.55±5.36)％、(89.86±4.63)％]和对K562细胞的杀伤活性[(44.76±9.53)％、(46.97±10.17)％]差异无统计学意义(P＞0.05).结论 干式融化箱可以代替水浴锅进行冻存CIK细胞复苏.
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浙江汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究
本研究的目的是分析浙江汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的多态性及基因型.采用序列特异性引物PCR法(PCR-SSP)进行KIR基因低分辨率检测和基因型分析.结果表明:①在浙江汉族人群中共检出目前已知的17个KIR基因.2DL4、3DL2和3DL3基因存在于所有个体,其基因频率为1.00.2DL1、2DL3、2DP1、3DP1*003、3DL1、2DS4*001/002基因较为常见,频率分别为0.902、0.902、0.902、0.902、0.7598、0.5615;而2DL2、2DL5A、2DL5B、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4*003、2DS5、3DS1和3DP1*001/002基因频率较低.②浙江汉族人群中以A型单倍型为主,频率高达74.7%.在检测样本中共明确检出12种单倍型,常见的是单倍型2,频率为53.0%.③共检出26种基因型,常见为AJ(2,2)、AF(1,2)型,其次为AH(2,5)、NN2(2,6)、AI(1,5)和AG(1,1).其中有15种基因型在白人中尚未见报道,4种基因型无法根据相关文献标准分析出单倍型.结论:浙江汉族人群有其独特的KIR基因频率和基因型频率分布.
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DC-CIK联合化疗治疗初发多发性骨髓瘤的疗效及对其Treg细胞功能的影响
目的:探讨树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)为效应细胞的过继免疫联合化疗治疗初发多发性骨髓瘤(MM)的临床疗效及对患者外周血CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞影响.方法:42例MM患者随机分为两组:化疗组20例,给予合适的化疗方案;联合组22例,除接受合适的化疗外,还给予DC/CIK免疫治疗,比较两组患者的临床疗效及CI4+CD25+调节性T(Treg)细胞比例的差异.结果:治疗3个周期后,联合组患者的生活质量和临床疗效:PS评分2.09,瘤细胞15.56％,β2微球蛋白11.36 mg/L,血清M蛋白26.58 g/L;24 h尿液轻链9.86 mg和肌酐120.33 μmol/L,而化疗组上述指标检测分别为:2.66、28.22％、17.52 mg/L、36.26 g/L、14.76mg和200.19 μmol/L(P值均＜0.05).联合组CI4+CD25+/CD4+细胞数为3.54％、CD4+CD25+FoxP3+/CD4+CD25+比值为15.20％,均明显低于化疗组4.68％和27.55％ (P ＜0.05).结论:DC/CIK免疫治疗可使CD4+CD25+Treg细胞活化增强,配合化疗可进一步清除残存的肿瘤细胞,两者具有协同作用.
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可溶性HLA-G1与NK-92细胞表面ILT2及KIR2DL4受体相互作用的研究
目的 探讨可溶性 HLA-G1(sHLA-G1)对人 NK-92细胞杀伤活性的抑制与细胞表面免疫球蛋白样转录分子2(ILT2)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4)受体的关系.方法 ①通过原核表达技术获得 sHLA-G1重组蛋白(重组蛋白),并采用蛋白质印迹法进行鉴定.②取NK-92细胞,加入终浓度20μg/ml的重组蛋白分别培养10、30 min,再分别加入抗HLA-G1/G5、抗ILT2和抗KIR2DL4抗体,采用流式细胞术检测各组 NK-92细胞表面sHLA-G1和ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率;以NK-92细胞单独培养作为对照组.③以人白血病K562细胞为靶细胞,以经不同方式处理的NK-92细胞为效应细胞,效靶比为5∶1,共同培养2h,采用流式细胞术检测NK-92细胞对K562细胞的杀伤率.NK-92细胞处理方式为单纯重组蛋白处理(分别加入终浓度为0、10、20 μg/ml的重组蛋白培养30 min)和表面受体封闭+重组蛋白处理(分别加入抗ILT2、抗KIR2DL4、抗LT2+抗KIR2DL4抗体培养30min,再分别加入终浓度为0、10、20μg/ml的重组蛋白培养30 min).结果 ①蛋白质印迹分析表明所获重组蛋白为带有组氨酸标签的特异蛋白.②NK-92细胞与20μg/ml重组蛋白共培养30 min后,sHLA-G1表达阳性率明显高于而ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率均明显低于对照组(均P＜0.05).③以终浓度0、10、20μg/ml的重组蛋白处理的NK-92细胞对K562细胞的杀伤率分别为39.79%±2.00%、27.79%±0.75%、21.36%±0.67%(两两比较,均P＜0.01);单独封闭ILT2受体,杀伤率分别为23.09%±1.63%、21.13%±0.38%、18.42%±0.47%(两两比较,均P＜0.01);单独封闭KIR2DL4受体,杀伤率分别为30.74%±0.44%、26.03%±0.38%、21.15%±0.35%(两两比较,均P＜0.01).结论 sHLA-G1通过与NK-92细胞表面ILT2和KIR2DL4受体直接结合而抑制 NK-92细胞的杀伤活性.
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自体CD3AK细胞过继免疫治疗晚期恶性肿瘤的临床观察
目的 观察抗CD3单克隆抗体(anti-CD3 mAb)激活的杀伤细胞(CD3AK)过继免疫治疗晚期恶性肿瘤的疗效.方法 从51例恶性肿瘤患者自体外周血分离单个核细胞,加入anti-CD3 mAb、重组人IL-2(rML-2)体外诱导后扩增培养,制备自体CD3AK 细胞.待细胞培养至第10～12天时取样用于质控检测.收集质控检测合格的CD3AK细胞,调整至终浓度为(4.O～6.0)×10~9/L 静脉回输至患者体内,每例患者治疗3个疗程,每疗程回输5次(每2 d回输1次),每次回输细胞数不低于1×10~9,每疗程回输细胞总数大于5×10~9.应用人T细胞亚群检测试剂盒和流式细胞仪测定治疗前后患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞以及CD16+56+细胞(NK细胞)比例;观察治疗前后患者的相关化验指标、生活质量以及不良反应;评定疗效,计算有效率和临床受益率.结果 分离制备的 CD3AK 细胞符合理想活性细胞质量要求,可用于进一步实验治疗.CD3AK 细胞过继免疫治疗后,患者外周血 CD3+、CD4+、CD8+T细胞以及CDl6+56+细胞(NK细胞)比例分别为(48.88±9.42)%、(35.09±4.11)%、(28.17±4.97)%、(20.31±6.98)%]均显著升高(均P<0.05).51例患者中,45例患者治疗后全身症状改善明显;所有患者治疗后相关化验指标均未出现异常变化,也未出现其他全身毒副反应;其中完全缓解6例、部分缓解14例、微效11例、稳定12例、进展8例,总有效率达60.8%,临床受益率达84.3%.结论 CD3AK 细胞过继免疫治疗恶性肿瘤疗效确切、安全且无副作用,能有效改善和提高患者的机体免疫功能.
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GM-CSF与IL-21基因共转染卵巢癌细胞及其对NK细胞活性的影响
目的 探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与IL-21基因共转染的体外抗肿瘤效应.方法 制备pRSC-GM-CSF-IL21重组质粒,再用脂质体将质粒pRSC-GM-CSF、pRSC-IL21和pRSC-GM-CSF-IL21分别转染人卵巢癌SKOV3细胞(依次命名为SKOV3/GM.CSF、SKOV3/IL21、SKOV3/GM-CSF-IL21细胞).以RT-PCR方法检测GM-CSF与IL-21表达;倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化:噻唑蓝法测定各组细胞增殖活性:流式细胞仪检测各组细胞细胞周期分布,细胞表面HLA-ABC、主要组织相容性复合体Ⅰ类相关基因(MICA/B)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达,以及各组细胞培养上清液对NK细胞活性的影响.以未转染的SK0V3细胞和转染空质粒pRSC的细胞(SKOV3/Neo)为对照.结果 经酶切与测序鉴定,pRSC-GM-CSF-IL21重组体构建正确,共转染SKOV3细胞中有目的基因GM-CSF、IL-21的表达.各组细胞的形态学、增殖特性、细胞周期分布及HLA-ABC表达无明显变化.SKOV3、SKOV3/Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21和SKOV3,GM-CSF-IL21细胞的MIC A/B表达量分别为19.24%4±2.31%、31.11%±3.76%、37.27%±3.04%、54.97%±4.77%和63.94%±5.90%:ICAM-1表达量分别为35.88%±3.06%、37.75%±4.09%、68.59%±4.84%、78.53%±5.78%和84.10%±3.98%;加入各组细胞培养上清液后NK细胞活性分别为31.8%±3.6%、42.7%±3.3%、54.7%±7.4%、55.9%±4.4%及63.4%±6.4%.SKOV3/GM-CSF-IL21细胞分别与SKOV3、SKOV31Neo细胞比较,3项指标的差异均有统计学意义(P<0.01).结论 GM-CSF与IL-21基因共转染可上调SKOV3细胞表面MIC A/B与ICAM-1表达,表达产物可增强NK细胞活性,这有助于免疫细胞激活,增强抗肿瘤效应.
关键词： 卵巢肿瘤 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素21 杀伤细胞 天然 -
CIK细胞治疗非小细胞肺癌的研究进展
肺癌发病率和死亡率位居各种恶性肿瘤的首位,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占肺癌总数的 80%左右.确诊时,大多数患者处于晚期,生存率低,生存期短[1].近年来针对 NSCLC的手术、放疗、化疗及靶向治疗取得重大进展.但上述疗法的毒副作用较大,且患者的生活质量和生存期并未取得重大突破.肿瘤的生物免疫治疗抗瘤活性高、毒副作用小,已广泛应用于临床.细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)疗法是肿瘤生物免疫治疗的重要组成部分,可提高患者抗肿瘤免疫应答能力,改善患者生活质量,延长生存时间.CIK 细胞体外扩增能力强,生物学活性高,输注后毒副作用小,因此成为 NSCLC患者生物免疫治疗的前沿和热点.
