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自体CIK细胞的体外增殖与免疫学表型的研究
目的:观察人体CIK(cytokine-induced killer)细胞的体外增殖和免疫学表型.方法:健康自愿者的成份血,用淋巴细胞分离液分离获得外周血单个核细胞(PBMC),在体外与不同细胞因子(IFN-γ,IL-1α,IL-2,CD3mAb)共同培养诱导成CIK细胞和LAK细胞,观察不同的增殖能力;用免疫学染色法对CIK和LAK进行免疫学表型分析.结果:经诱导的CIK细胞增殖显著高于LAK细胞(P<0.01);以CD3、CD56型增殖为主.结论:CIK和LAK细胞均属异质细胞群,起主要效应细胞不同,前者以CD3、CD56型细胞为主,后者以CD3、CD8型细胞为主.
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整片组织免疫染色显示淋巴管构筑
目的 探讨整片组织内淋巴管免疫染色,并与间接注射法和组织切片免疫染色法比较.方法 用普鲁士蓝间接注射新生儿肝被膜内淋巴管,观察肝浅淋巴管的构筑.通过火棉胶切片分析肝浅淋巴管的流向.取人大腿皮肤,作石蜡切片和冷冻切片,免疫染色后观察淋巴管的分布.取大鼠耳和背部的皮肤、膈和小肠,将整片组织作免疫染色,观察组织内淋巴管构筑.结果 间接注射普鲁士蓝可显示淋巴管构筑和流向,但淋巴管染色缺乏特异性.组织切片免疫染色可显示淋巴管分布,然而不能准确地分析淋巴管密度.整片组织的免疫染色很理想,毛细淋巴管盲端、毛细淋巴管网和淋巴管丛清晰可见.结论 整片组织免疫染色能够很好地显示组织内完整的淋巴管构筑.
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骨髓活检塑料包埋切片免疫双标法的建立
双重免疫染色用于恶性血液病骨髓活检的研究国内外报道甚少,我们借鉴了非洗脱法中的间接法-异种动物抗体法,对多发性骨髓瘤患者选用了浆细胞抗体CD38和增殖细胞抗体Ki-67抗体的配对,建立了重复性和稳定性好的双标记法.
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中药复方肠安泰对肠癌肺转移模型小鼠肠黏膜固有层B细胞及IL-12的影响
目的:探讨中药复方肠安泰对肠管绒毛黏膜固有层B细胞及IL-12的影响及其与肺转移的关系.方法:经皮下植入大肠癌高度肺转移细胞(C026Lu),建立大肠癌肺转移小鼠动物模型,采用ABC免疫染色及免疫荧光染色方法做相关分析.结果:荷瘤治疗组与荷瘤对照组相比IgA、IgM及IL-12阳性细胞在小肠绒毛黏膜固有层均有显著意义的增加.两组数值依次为172.3±6.7,59.2±53,79.6±4.1;131.2±53,45.1±4.3,24.4±2.5(P<0.01).结论:中药复方肠安泰预防大肠癌肺转移的机制,与其促进了荷瘤小鼠小肠绒毛黏膜固有层B细胞的活化及IL-12的诱导有关.
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膀胱移行细胞癌、原位癌和淋巴结转移的E-cardherin免疫染色以及长期随访
作者分析了膀胱移行细胞癌、原位癌区域和淋巴结转移的E-cardherin表达,研究E-cardherin的免疫反应性对预测膀胱癌患者疾病进展和患者生存的价值.研究组包括77例接受根治性膀胱切除术的患者.
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石蜡切片的NOS免疫染色技术介绍
一氧化氮是重要的肺动脉压介导/调节因子.测定一氧化氮的变化具有重要的临床和实验意义.由于一氧化氮的半衰期仅3~5 s,较难测定,故多采用测定其合成关键酶一氧化氮合酶(nitricoxide synthase,NOS)的方法来反映一氧化氮的变化.国内外现多采用冰冻切片进行免疫组化染色[1~3]测定NOS,但此方法存在切片厚,结构易变形,染色效果及定位不够理想,标本不易长期保存等缺点.1998年9月至2000年4月,我们在肺动脉高压机制的研究中,采用石蜡切片方法进行NOS的免疫组化染色,克服了冰冻切片带来的不足,取得了较好的实验效果.
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免疫细胞化学方法对照设置
利用抗体为媒介显示培养细胞或组织切片中的局部结构是一种十分有用的方法,已经成功地应用于很多重要的发现之中,包括基于同一原理的免疫细胞化学、免疫组织化学以及免疫荧光在内的多种具体方法.本文泛指基于抗原抗体结合反应多种方法统称的免疫细胞化学(immunocytochemistry,IHC).IHC 方法被广泛应用于科学研究中,并有很高的科研产出,在PubMed进行相应词条检索,列出的科研文章多达50万篇,而其结果的可靠性也成为一个重要的科研命题.
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Erdheim-Chester 病的影像学研究进展
Erdheim-Chester 病( ECD)是一种罕见的非朗汉(Langerhans)细胞组织细胞增生性疾病,1930年 William Chester 和 Jakob Erdheim 首次报道,至今全世界报道约600例[1],国内也有部分报道[2-3]。该病好发于40~70岁,男性略多于女性。病因及发生机制不明,新研究认为可能源于体细胞突变,与免疫失调和炎症有关[4]。典型病理表现为CD68(+)、CD1α(-)、s-100(-)的泡沫样脂质细胞异常沉积形成黄色肉芽肿样浸润,常伴纤维化。由于其形态学和免疫染色特点同幼年性黄色肉芽肿(juvenile xanthogranuloma, JXG)相同,国际组织细胞协会将其纳入 JXG 疾病家族,近来研究也认为 ECD 是不以皮肤侵犯为主的 JXG 特殊类型[5]。ECD 可发生于任何部位,常累及多系统多器官,常累及骨、中枢神经系统、心血管系统、肺、腹膜后腔等[6]。临床表现多样,缺乏特异性,预后较差。确诊需依靠组织病理学检查。
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消化道蠕动的起搏器与Cajal间质细胞
消化道蠕动是消化道平滑肌群的节律性收缩活动.越来越多的研究证据表明,这种活动是由一类叫做(pacemaker)起搏器的特殊细胞引起的.这些细胞可能就是分布在消化道平滑肌层间的(interstitial cells of Cajal)ICC.它们因分布的部位不同而形态各异.但它们都含有丰富的线粒体,呈c-Kit免疫染色阳性,并伸出很多突起形成网络.他们相互之间及与周围的平滑肌细胞之间以缝隙结合相连接.这篇综述主要介绍此类细胞的形态结构及分布特点.
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哮喘肺组织和外周血淋巴细胞端粒酶逆转录酶表达上调及其意义
目的:研究支气管哮喘(哮喘)肺组织和哮喘病人外周血淋巴细胞端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA和蛋白质的表达,并探讨其在哮喘发病机制中的作用及其临床意义.方法:用核酸原位杂交和免疫组织化学方法检测了6只豚鼠哮喘模型组织、6只正常对照组肺组织、16例哮喘发作期和14例正常人外周血淋巴细胞TERTmRNA和蛋白质的表达.结果:哮喘豚鼠肺组织中气道上皮细胞和淋巴小结,以及哮喘病人外周血淋巴细胞TERT mRNA和蛋白质表达强度显著高于正常对照组,哮喘病人外周血淋巴细胞TERT mRNA和蛋白质表达的阳性指数与哮喘病人FEV1/预计值、MVV/预计值比值呈显著负相关,与血清IgE水平呈显著正相关.结论:(1)TERT在哮喘豚鼠气道上皮、肺淋巴小结和人体外周血淋巴细胞中表达上调;(2)检测人体外周血液中淋巴细胞TERT表达强度有望可以作为衡量哮喘病情的指标.
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HE染色涂片退色后原位免疫染色在肿瘤诊断中的应用价值
目的:探讨HE染色涂片退色后原位免疫染色在肿瘤诊断中的应用价值。方法:随机选取2012年11月--2013年11月在我院进行肿瘤细胞诊断的180例细胞涂片作为研究对象。所有涂片均经过HE染色。其中,确定为肿瘤或可疑肿瘤的38例涂片经退色后行原位免疫染色处理,并将其中30例存在对应组织学检测的涂片检测结果与其组织学检查结果进行对比,以分析免疫染色细胞的确诊率。结果:①HE染色的细胞确诊率为80.56%,免疫染色的细胞确诊率为89.47%,HE染色联合免疫染色的细胞确诊率为97.78%。HE染色和免疫染色细胞确诊率间的差异无统计学意义(P>0.05),而HE染色联合免疫染色的细胞确诊率高于HE染色和免疫染色的细胞确诊率,且组间差异具有统计学意义(P<0.05)。②30例进行退色原位免疫染色处理的涂片其检测阳性率与组织学检测阳性率间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在肿瘤细胞诊断中进行HE染色后的免疫染色操作可以有效提升肿瘤细胞的阳性确诊率,从而有利于确定肿瘤细胞的来源。
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乙型肝炎患者HBsAg携带者血清中多肽图谱的研究
本文建立了自少量血清中研究I-IBsAg多肽图谱的方法,患者血清经纯化、SD.S聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western吸印后,HBgAg多肽用酶免疫染色或放射自显影进行分析,发现10例慢性乙肝患者血清HBsAg多肽组成有明显差别.同一来源的HBV毒株在不同个体或同一个体随病程不同多肽图谱亦不同.血清HBV DNA阳性与多肽P39/P42的关系较P31/P34为密切,提示Pre-S1抗原不仅在急性感染中与病毒复制有关,在慢性感染中亦有关,PHSA'受体与P31/P42的符合率为94.1%,反映这一多肽确带有PHSA受体.
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活体免疫染色评估眼底新生血管实验研究
目的 探寻更好地对视网膜新生血管(RNV)和脉络膜新生血管(CNV)及其渗漏作定性和定量分析的方法 .方法 13只小鼠随机分为RNV评估组(n=7)和CNV评估组(n=6).①RNV评估:取3只小鼠作为正常对照组,其余4只制作成未成熟视网膜病变(ROP)模型,分别于出生后第16天双眼内注射FITC标记的抗体或未经FITC标记的抗体以及空白组,12 h后直接视网膜铺片或用带荧光的二抗孵育后再铺片镜检.②CNV渗漏评估:激光诱导6只小鼠(12眼)制作CNV模型,随机平分为两组,分别于光凝后第7和14天眼内注射非荧光标记的抗体,12 h后腹腔内注射荧光素钠,并定量分析CNV面积及其渗漏面积.结果 FITC标记抗体组的视网膜表现出高荧光、高清晰度的视网膜结构血管和RNV,而非FITC标记抗体组的视网膜只选择性染色RNV,几乎无干扰荧光背景,可观察到细微变化,利于应用图像软件对RNV图片进行定性和定量分析.应用SPOT图像软件把CNV染色的图片与CNV渗漏荧光的图片进行叠加,能够明确区分CNV及其渗漏面积;第14天与第7天CNV面积及其渗漏面积比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 使用活体免疫染色技术可以方便地观察视网膜血管细微结构,并精准地定性和定量分析RNV和CNV渗漏.
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REEP6在人睾丸和精子中的表达及定位
目的:通过对人受体相关蛋白(receptor accessory protein 6,REEP6)在睾丸和精子中表达研究来探讨REEP6蛋白在雄性生殖中潜在的功能。方法:Western blot检测REEP6在人睾丸及精子中的表达;免疫组化及组织免疫荧光方法对REEP6在人睾丸组织中的定位进行研究:人精子免疫荧光对REEP6在精子顶体反应前后的定位进行研究。结果:REEP6在人睾丸及精子中均有表达,在睾丸组织中REEP6定位于各级生精细胞的细胞膜,在精子中则定位于核后区附近,并且在顶体反应前后,REEP6在人精子的定位及表达量不发生改变。结论:REEP6在人睾丸和精子中均有表达,其表达定位具有细胞特异性和区域特异性,提示其可能在人睾丸精子发生和(或)精卵融合过程中发挥作用。
关键词: REEP6 睾丸 精子 Western blot 免疫染色 -
自身免疫性胰腺炎3例临床分析
自身免疫性胰腺炎(AIP)是慢性胰腺炎(CP)的一种特殊类型,临床上较为少见.AIP影像学检查常表现为胰腺局限性肿块,易被误诊为胰腺癌,导致不必要的手术治疗[1].本文选取我院自2006年以来手术病理资料诊断为胰腺炎的15例患者,参照AIP病理诊断标准,经病理回顾诊断分析(疑似病例加做免疫染色),其中3例符合AIP病理诊断(病理表现:胰腺内大量纤维组织增生,淋巴细胞及浆细胞浸润,胃周及胰腺周围淋巴结反应性增生;免疫酶标示IgG4阳性).现将此3例患者的临床资料报道如下,以期为临床诊断提供帮助.
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一种高纯度和高活力的大鼠脑微血管内皮细胞的提取及原代培养方法
目的:建立一种纯度和活力较高、简单实用的大鼠脑微血管内皮细胞分离及原代培养方法,为建立体外血脑屏障提供材料。方法采集1-2周SD大鼠大脑皮质,应用Ⅱ型胶原酶和分散酶/胶原酶连续消化法,筛网过滤法及20%BSA和44%Percoll两次梯度离心法获得脑微血管段后,接种于培养瓶中进行原代培养,采用倒置显微镜对所培养的细胞进行形态学观察,以Ⅷ因子相关抗原免疫染色法对其进行鉴定。结果体外培养2h后,微血管内皮细胞爬出血管段进行贴壁生长,3~4 d呈典型的铺路卵石样结构,Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达呈阳性,可见细胞胞质呈棕色,阳性细胞占99%以上。结论该方法能成功地分离并培养出高纯度的大鼠脑微血管内皮细胞,对体外血脑屏障的建立以及脑微血管内皮细胞的生物学特性和功能的深入研究具有重要意义。
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端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白质在正常肺组织和正常人外周血淋巴细胞表达的研究
用核酸原位杂交和用免疫组织化学法检测了6例豚鼠正常肺组织、10~18例癌旁正常肺组织和14例正常人外周血端粒酶逆转录酶(TERT) 亚基的mRNA和相应蛋白质表达.结果显示,豚鼠和人体正常肺组织支气管上皮细胞,肺泡巨噬细胞和少数肺泡上皮细胞有TERT mRNA和蛋白质表达.正常人外周血淋巴细胞中TERT原位杂交阳性表达细胞数为(17.26±8.57)%,免疫组织化学阳性细胞表达数为(28.10±16.78)%.提示:①正常肺组织支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、少数肺泡上皮细胞和外周血淋巴细胞有TERT mRNA和蛋白质表达;②正常肺组织中上述细胞TERT mRNA和蛋白质的表达在生理状况下对于保证支气管上皮和肺泡上皮细胞再生,维持上皮组织的完整性可能起着重要的作用,同时有利于肺泡巨噬细胞发挥其肺内"卫士”功能;③淋巴细胞TERT表达对于维持机体的免疫功能可能有重要作用.
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人胎肺发育不同阶段端粒酶逆转录酶的表达及意义
目的检测端粒酶逆转录酶(hTERT)在人胎肺发育不同阶段的表达特征,探讨其在胎肺上皮干细胞发育、分化过程中的作用及意义.方法对孕妇自愿捐献的胎龄为10~34周的引产胎儿肺组织,用免疫组织化学技术检测hTERT的表达.结果胎龄10周的肺组织即检测到hTERT的表达,主要表达于正在分支的支气管原始上皮细胞浆内.随着胎肺发育,阳性表达的细胞逐渐向远端呼吸道迁移.到发育晚期,呼吸道上皮hTERT表达较前逐渐减弱,强阳性表达的细胞仅集中在细支气管的基底膜和少数新生肺泡内,在形态上类似基底细胞和Ⅱ型肺泡细胞.结论在人胎肺发育中hTERT的表达可能是肺上皮干细胞或祖细胞维系其未分化状态和自我更新能力的重要标志;对保证支气管上皮和肺泡上皮细胞持续正常分化和再生,维持上皮组织的完整性起着重要的作用.
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肝癌组织中金属蛋白酶组织抑制物蛋白的表达
1.资料与方法:经外科手术切除的肝组织标本选自本校西京医院病理科,10例为原发性肝癌患者,男9例,女1例,平均年龄59岁;9例为肝高分化腺癌(转移癌)患者,男8例,女1例,平均年龄57岁;10例为正常肝组织对照.链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶免疫染色超敏试剂盒(SPKit)购自福州迈新生物技术开发公司.产品编号KIT-9710,按试剂盒说明书常规进行免疫组织化学操作,鼠抗金属蛋白酶组织抑制物TIMP-1和TIMP-2单克隆抗体购自美国Maxin公司.图象分析:免疫组织化学半定量判断指标:未见阳性细胞(-);阳性细胞占1/3以下(+);1/3~2/3为(++);2/3以上为(+++).
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柯萨奇病毒B组3型和肠道病毒71型入胞机制比较研究
目的 比较柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CV-B3)和肠道病毒71型(enterovirus 71,EV A71)的入胞机制.方法 分别用CV-B3和EV-A71感染经不同小分子入胞抑制剂处理后的HeLa细胞,通过细胞免疫染色及图像分析,量化比较感染结果.结果 细胞松弛素D、长春碱、巴弗洛霉素A1及布雷菲德菌素A均能抑制CV-B3和EV-A71对HeLa细胞的早期感染,表明两种病毒的入胞过程均需要细胞骨架、内吞小体酸化及膜泡运输作用;肝素能抑制EV-A71的感染并呈浓度依赖关系,但对CV-B3无显著作用,表明细胞膜表面的硫酸乙酰肝素参与EV-A71但可能不参与CV-B3的入胞过程;巴弗洛霉素A1对EV-A71的抑制更明显,说明在病毒脱衣壳过程中,EV-A71较CV-B3依赖更低的pH;细胞骨架抑制剂处理结果表明CV-B3的入胞过程更依赖于微管蛋白而非微丝蛋白的作用.结论 CV-B3和EV-A71具有相似的入胞机制,但却各具特点,为研究两者的抗病毒药物提供了依据.