茶多糖对胰岛β细胞体外培养试验影响研究

目的 通过茶多糖(TP)对胰岛β细胞体外培养试验影响研究,探讨TP降血糖作用的机制.方法 采用Beta-TC-6小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞为实验对象,分别给予茶多糖50、100和200 μg/ml,37 ℃孵育24 h后噻唑蓝(MTT)法测定细胞活率.用3 μmol/l H2O24℃孵育10 min诱导Beta-TC-6细胞损伤,分别给予茶多糖50、100和200 μg/ml,37℃孵育24 h后MTT法测定细胞活率.Beta-TC-6细胞分别加入20或200 μg/ml茶多糖及IBMX500 μmol/L,同时设置IBMX对照及溶剂对照进行体外培养,测定胰岛β细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量.结果 3个浓度的茶多糖对Beta-TC-6细胞存活率无显著影响(P＞0.05).200 μg/ml茶多糖对H2O2诱导的Beta-TC-6细胞损伤具有保护作用,细胞存活率与损伤模型组相比显著升高(P＜0.01).20和200 μg/ml茶多糖组Beta-TC-6细胞内cAMP含量明显提高,与对照组比较P＜0.05,或P＜0.01.结论 适当剂量的茶多糖对H2O2诱导的胰岛β细胞损伤具有明显的保护作用,能明显提高胰岛β细胞内cAMP含量的作用.

甲基苯丙胺对海马神经元的损伤作用及炎性因子表达的影响

目的 观察甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)对大鼠海马神经元的损伤作用及炎性反应.方法 原代培养大鼠胎鼠海马神经元,利用MTT和TUNEL实验技术观察METH对神经元的损伤;采用Affymetrix芯片结合实时荧光定量聚合酶链反应法(reahime-PCR)法,观察METH作用后海马神经元细胞炎性相关因子的表达变化.结果 METH对海马神经元的损伤具有浓度依赖性.30 μmol/L的METH即可引起神经元的活力降低.基因组芯片结果显示,与对照组相比,METH处理组与炎症信号相关,增加的有IL-1R、IL-1 rap、IL-4、IL-1O、IL-15、IL-24、Peli2、Peli3、NOS1、NOS2、Sig1-R、TNFα和TLR4;减少的有IL-13、Peli1、Traf3、Traf6和NOS3.实时PCR结果显示,与对照组相比,METH使炎性因子IL-1R、IL-1 rap、IL-4、IL-24、Peli1、Peli2、Peli3、Traf3、Traf6、NOS1、NOS2、NOS3、Sig1-R、TNFα和TLR4的mRNA表达增加,其中IL-1R、IL-1 rap、IL-4、IL-24、Traf6和NOS3的表达增加有统计学意义(P ＜0.05);IL-1β、IL-6、IL-10、IL-15和Traf3的mRNA表达降低,其中IL-1β和Traf3的表达减少有统计学意义(P＜0.05).结论 METH可导致海马神经元损伤,影响炎性及相关因子的表达,可能会对学习记忆能力造成潜在影响.

苯并[a]芘对原代培养大鼠神经元细胞损伤及Hsp70表达的影响

目的 研究苯并[a]芘(B[a]P)对体外原代培养大鼠神经元细胞损伤及热休克蛋白70(HBpT0)表达的影响.方法 分离培养l -3 dSD大鼠皮层神经元细胞,不同剂量B[a]P+s9染毒处理24 ho光镜观察神经细胞的形态学变化,MTT法检测细胞活性,紫外分光光度法检测细胞培养液中LDH活力和MDA的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,碱性单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤情况,Western blot法检测细胞Hsp70的表达水平.结果 随着B[a]P剂量的增大,神经元细胞的轴突和树突的数量减少,长度缩短,部分细胞出现空泡化,细胞活力下降.培养液中LDH活力、MDA含量和细胞Olive尾距、细胞凋亡率均随B[a]P剂量增大而升高,0.5～10 μmol/L组与Oμmol/L组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).0.5～10 μmoL/L组神经细胞Hsp70表达水平随剂量增大而下降,显著低于0.1μmol/L组(P<0.05),10 μmol/L组显著低于0μmol/L组(P<0.05).相关分析显示,MDA与LDH、Olive尾距、细胞凋亡率呈显著正相关,与细胞活力、Hsp70表达水平呈显著负相关.HspT0表达水平与LDH、Olive尾距、细胞凋亡率呈显著负相关,与细胞活力（A值）呈显著正相关.LDH、Olive尾距与细胞凋亡率之间呈显著正相关.结论 B[a]P代谢产物可导致体外原代培养神经元细胞损伤和凋亡,抑制Hsp70表达.BEa]P抑制Hsp70表达可能与其神经毒性有关.

姜黄素对纳米二氧化硅诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究姜黄素对纳米二氧化硅诱导HaCaT细胞损伤的保护作用.方法 建立15-nm二氧化硅致HaCaT细胞损伤的体外研究模型,通过CCK-8法检测细胞活力水平;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和细胞内丙二醛(MDA)含量,评价细胞的损伤程度.结果 姜黄素能明显改善15-nm二氧化硅诱导HaCaT细胞的损伤,与二氧化硅组相比,姜黄素干预组能提高细胞存活率,细胞培养液中的LDH漏出量明显减少(P＜0.05),细胞内的MDA明显降低(P＜0.05).结论 姜黄素对15-nm二氧化硅诱导的HaCaT的细胞损伤具有一定的保护作用.

2-10 SiO2刺激PAM上清液对Ⅰ型肺上皮细胞的增殖效应

目的探讨二氧化硅(SiO2)刺激肺巨噬细胞(PAM)上清液在Ⅰ型肺上皮细胞损伤中的作用.方法分别用体积分数为5%和10%不同剂量的SiO2刺激大鼠(SD)肺泡PAM上清液作用于貂肺上皮细胞(CCL-64),采用四唑盐(MTT)比色法测定其增殖效应.结果在0、50、100、200、500μg/m1SiO2浓度范围,5%SiO2刺激的PAM上清液引起细胞增殖,500 μg/m1剂量组(0.30±0.02)与对照组(0.26±0.04)差异有显著性,并存在剂量-效应关系(r=0.975,P＜0.01).10%SiO2刺激PAM的上清液表现为细胞损伤作用,50 μg/m1剂量组(0.21±0.04)与对照组吸光度值差异有显著性.结论随着作用剂量的增加,SiO2刺激PAM分泌活性物质将加重Ⅰ型肺上皮细胞的损伤,促进矽肺纤维化的进程.

直链烷基苯磺酸钠致人张氏肝细胞损伤的毒性作用

目的 通过检测不同剂量的直链烷基苯磺酸钠(LAS)对人张氏肝细胞(Chang liver cells)增殖、损伤、凋亡及坏死的影响,探讨LAS对人张氏肝细胞的毒性作用.方法 体外培养人张氏肝细胞,将细胞分为对照组及LAS不同剂量组,分别为正常对照组(不合LAS的正常培养基培养细胞)、LAS低、中、高剂量组(37.5、75.0及150.0 mg/L).各组细胞培养24 h后,倒置显微镜下观察细胞形态及结构;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生存率;检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以了解肝细胞损伤程度;Hoechst 33342及PI染色观察细胞凋亡及坏死情况.结果 LAS处理后细胞表面出现黑色颗粒,部分细胞变圆脱落并产生碎片,高剂量组出现细胞脱落、死亡.LAS各处理组细胞存活率明显低于对照组(P＜0.01),MDA、LDH及AST水平也均明显高于对照组;细胞凋亡率与坏死率明显增加(P＜0.01),且这些变化随LAS剂量增加更加明显(P＜0.01).结论 LAS可抑制人张氏肝细胞增殖,改变细胞形态,并导致细胞损伤、凋亡和坏死.

自由基,趋化因子与HIV-1/SIV感染及酒精肝疾病

自由基医学是近30年来迅速发展起来的一门新兴的边缘学科,它为许多疾病的发病原因、发病机制提供了新的理论、新的内涵.生物体内的自由基95%以上是氧自由基,一旦氧自由基产生过多或抗氧化体系出现障碍,体内氧自由基代谢就会出现失衡,产生大量的活性氧(reactive oxygen species,ROS),使机体处于氧化应激状态.氧化应激可导致细胞损伤,引起多种严重疾病.越来越多证据表明,HIV(human immun-odeficiency virus)感染者处于慢性氧化应激状态.笔者对自由基和趋化因子在HIV-1/SIV(Simian immmunodeficiency virus)和酒精肝中对细胞的损伤作用进行了综述.

PM2.5损伤血管内皮细胞的研究进展

近年来,PM2.5越来越多引起公众的关注.有研究显示,PM2.5可对血管内皮细胞造成损伤,从而影响其功能.PM2.5对血管内皮细胞的损伤主要表现在PM2.5可影响血管内皮细胞介导的舒缩血管功能,损伤血管内皮细胞的血管形成能力,损害血管内皮细胞的血管屏障作用.损伤的可能机制包括氧化应激,炎症反应和内皮祖细胞的损伤.本研究现就PM2.5损伤血管内皮细胞的表现及可能机制做一综述.

中药与食物成分之间的抗氧化协同作用

由于正常生理活动或氧化压力过剩,人体内会不断产生活性氧自由基.自由基可与人体内的DNA、蛋白质、脂肪等生物分子发生反应,导致细胞损伤,引起心血管疾病、癌症和衰老等退行性疾病[1,2].大量人群和其他实验研究表明,采取有效预防手段,特别是合理服用抗氧化剂或自由基清除剂,均可在控制这些疾病的发生与发展中发挥良好的预防作用[3].

138 郁金、Samallanthus sonchifolius及块茎土栾儿提取物抑制细胞损伤和清除活性的作用

PC12细胞氧糖剥夺模型细胞自噬与损伤的关系及黄芪甲苷的保护作用研究

目的:研究PC12细胞OGD/R后自噬与损伤的经时性变化以及黄芪甲苷的干预效应.方法:探讨PC12细胞OGD/R后不同时间自噬的变化及与细胞损伤的关系,初步确定细胞发生自噬性损伤的时间点,再制作PC12细胞OGD/R自噬性损伤模型,研究黄芪甲苷抗自噬性损伤的作用.结果:复糖复氧6～36 h后,细胞存活率降低、LDH漏出率增加;用3-MA预处理后,可使复糖复氧6～12 h细胞存活率降低、LDH漏出率增加,复糖复氧后24～36 h相反.激光共聚焦和west-ern-blot检测显示,复糖复氧后6 hLC3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,至24h达高峰;p62蛋白表达随再复糖复氧时间的延长逐渐降低.黄芪甲苷对OGD 2 h复糖复氧24 h的PC12细胞自噬具有显著抑制作用,且呈剂量依赖性.结论:PC12在在OGD复糖复氧6～12 h,自噬减轻神经细胞的损伤,而在24～36 h后加重细胞损伤;黄芪甲苷可通过抑制细胞过度自噬诱导的细胞损伤,从而发挥对受损细胞的神经保护作用.

人参皂苷Rg1及Rb1对Aβ25-35诱导CHO细胞毒性影响

目的:观察人参皂苷Rg1及Rb1对β-淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导中国仓鼠卵巢瘤(CHO)细胞损伤的保护作用.方法:利用MTT法和Annexin V-FITC染色流式细胞仪检测法,依次观察人参皂苷Rg1及Rb1对40μM的Aβ25-35多肽诱导CHO细胞24h后细胞活性和细胞凋亡的干预作用.结果:加入Aβ25-35多肽模型组细胞较未加用对照组细胞活性低(P<0.05),加入Aβ25-35多肽模型组细胞凋亡数高于未加用对照组(P<0.05),模型组细胞加用人参皂苷Rg1及Rb1组细胞损伤和凋亡数均较未加用组细胞有不同程度减少(P<0.05).结论:天然药单体人参皂苷Rg1及Rb1在一定剂量范围内均能抑制Aβ25-35诱导的神经细胞损伤.

虫草菌丝提取物对白介素1β损伤的胰岛细胞损伤保护作用的实验研究

目的:研究虫草菌丝(Cordyceps sinensis,CS)提取物对白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)损伤胰岛细胞的保护作用以及其机制与氧自由基和NO的关系.方法:IL-1β损伤离体培养的乳鼠胰岛细胞,采用不同浓度CS虫草菌丝提取物共同孵育,应用MTT法检测细胞活性,放免法检测基础和高糖胰岛素分泌量,比色法检测细胞培养上清液中NO的含量,诱生型一氧化氮合酶(Induced nitric oxide synthase,iNOS)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione perioxidase,GSH-PX)的活性.结果:CS提取物显著提高IL-1β损伤的胰岛细胞活性、胰岛细胞基础和高糖刺激胰岛素分泌量;并且可反转IL-1β作用后细胞培养上清液中iNOS活性和NO含量以及SOD、GSH-PX的活性水平,且呈剂量依赖性.结论:CS提取物对IL-1β损伤的胰岛细胞有保护作用,其机制与降低iNOS的活性,减少NO生成以及提高SOD、GSH-PX的活性,增加抗氧化能力有关.

茜草炭不同极性部位化学成分组成及保护氧化损伤活性比较

采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型,MTT比色法测定细胞活力,评价茜草炭不同极性部位提取物的抗氧化损伤活性,同时采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)对各极性部位化学成分进行定性研究.结果显示,乙酸乙酯部位与正丁醇部位均可显著提高细胞活力(P＜0.01),石油醚部位对细胞活力影响不大,水提取部位对损伤的HUVECs有一定的抑制作用.UPLC-Q-TOF-MS分析结果显示,从茜草炭4个极性部位提取物中共鉴定化合物32种,包括31种醌类及其糖苷类和1个烯萜(茜草哌唑嗪C),石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水提取部位分别鉴定出化合物23,32,26,15种.关联体外细胞实验结果表明,乙酸乙酯部位和正丁醇部位为茜草炭抑制ox-LDL诱导HUVECs损伤的有效部位,为阐明茜草炭的药效物质基础提供科学依据,为茜草炭功效-物质相关性研究奠定基础.

免疫介导的造血抑制与骨髓衰竭

再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA,以下简称再障)是一组以造血干/祖细胞损伤、外周血全血细胞减少,临床以贫血、出血、感染为主要表现的骨髓造血功能衰竭性疾病(骨髓衰竭).先天性或遗传性骨髓衰竭的发病机制研究近年来获得不少新进展.本文主要讨论获得性再生障碍性贫血.我国再障的年发病率为7.4/105,高于欧美国家,其中急性再障(AAA)的发病率为1.4/105,慢性再障(CAA)的发病率为6.0/105.再障的发病机制有造血干/祖细胞减少或缺陷、造血微环境缺陷和免疫异常.目前再障的临床治疗,国外主要用免疫抑制剂抗胸腺球蛋白(ATG)或/和环胞菌素A(CsA)及骨髓移植,雄激素已极少应用,仅作为"补救"或"替代"治疗措施;国内主要是免疫抑制剂、雄激素和补脾肾中药.

生血丸对低剂量敌百虫暴露小鼠肝、脾、骨髓细胞及外周血淋巴细胞的影响

目的 探讨生血丸对长期接触低剂量敌百虫水溶液小鼠细胞损伤的影响.方法 将150只BalB/C小鼠随机分空白组(生理盐水灌胃40天)、模型1组(敌百虫灌胃20天+生理盐水灌胃20天)、治疗组(敌百虫灌胃20天+生血丸灌胃20天)、模型2组(生理盐水灌胃20天+敌百虫灌胃20天)、预防组(生血丸灌胃20天+敌百虫灌胃20天).敌百虫溶液剂量为2 mg/kg,生血丸剂量为2.5g/kg,每日1次.检测各组小鼠肝、脾细胞中羟自由基、超氧阴离子活性、鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达的OD值,计算外周血淋巴细胞、骨髓细胞微核率.结果 模型1组、模型2组小鼠肝细胞内羟自由基、超氧阴离子活性、ODC表达、外周血淋巴细胞微核率与空白组相比差异有统计学意义(P＜0.05),治疗组与模型1组、预防组与模型2组比较,肝细胞内羟自由基、超氧阴离子活性、ODC表达、外周血淋巴细胞微核率差异有统计学意义(P＜0.05).各组小鼠脾细胞内羟自由基、超氧阴离子活性、ODC表达、骨髓细胞微核率未见明显差异(P＞0.05).结论 生血丸能有效预防和改善低剂量敌百虫暴露小鼠肝细胞氧化损伤,降低外周血淋巴细胞的微核率.

地塞米松抑制哮喘大鼠模型肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤

支气管哮喘(简称哮喘)作为整个气道和肺组织病变性疾病已逐渐被认识[1].研究表明,哮喘急性发作时存在肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar typeⅡcell,AT-Ⅱ)结构和功能的改变.本研究通过建立哮喘大鼠模型并检测AT-Ⅱ细胞的损伤来探讨其可能的发生机制及地塞米松的影响.

缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞损伤的动态观察

目的 探讨缺氧缺糖/复氧复糖不同时间点小鼠海马神经元细胞系HT22细胞损伤情况.方法 取对数生长期的HT22细胞,随机分为6组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)0 h组(OGD/R 0 h)、缺氧缺糖/复氧复糖12h组(OGD/R 12 h)、缺氧缺糖/复氧复糖24h组(OGD/R 24 h)、缺氧缺糖/复氧复糖48 h组(OGD/R48 h)、缺氧缺糖/复氧复糖72 h组(OGD/R 72 h).除正常对照组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6h后进行复氧复糖.倒置显微镜下观察细胞形态,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况,Bax、Bcl-2免疫荧光染色检测细胞凋亡情况.结果 正常组HT22细胞呈两极或多极,突起明显,突起之间相互交织成网状,细胞膜光滑且完整,胞体折光性强,OGD/R各组细胞胞体轴突减少,细胞皱缩,胞质凝聚.与正常组比较,OGD/R各组细胞存活率均显著降低(P＜0.05),OGD/R 12 h至OGD/R 24 h达到低(P＜0.05);OGD/R 12 h及OGD/R 24 h组LDH显著升高(P＜0.05),OGD/R 0 h、48 h、72 h组均有升高趋势.除OGD/R0h组和OGD/R 72 h组外,OGD/R各组Bax/Bcl-2比值均较正常组显著升高(P＜0.05),峰值出现于OGD/R 24 h.结论 缺氧缺糖/复氧复糖细胞损伤是一个复杂的动态过程,随着复氧复糖时间的延长,细胞损伤不断加重,24 h达到顶峰,随后细胞损伤情况逐渐缓解.

硫化氢对氧糖剥夺／复氧诱导小鼠脑皮层神经元损伤的体外观察

目的：探讨硫化氢（ H2 S）对氧糖剥夺/复氧（ OGD/R）诱导神经元损伤的影响。方法小鼠皮层神经元用无糖厄尔氏平衡盐溶液（EBSS）于2％ O2、5％ CO2、93％ N237℃培养4h，换用neurobasal ＋B27培养基于37℃5％CO2培养箱中继续培养12h，建立OGD/R模型。以硫氢化钠（NaHS）作为H2S的供体，采用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率；用fura-2/AM和显微荧光成像系统检测神经元胞质钙离子浓度（[Ca2＋]i）；利用比色法检测乳酸脱氢酶（ LDH）释放率；碘化丙啶（ PI）染色检测细胞损伤。结果200、300与600μmol/L NaHS预处理30min再OGD/R，神经元存活率显著提高（n＝4）；300μmol/L NaHS预处理后再OGD/R，[Ca2＋]i（n＝5）、LDH释放率（ n＝4）和细胞损伤率（ n＝6）均低于OGD/R组，且使用10μmol/L钙螯合剂BAPTA也降低OGD/R诱导的LDH释放率和细胞损伤率。结论 H2 S减轻OGD/R所致皮层神经元损伤，其机制与H2 S抑制OGD/R诱导神经元钙超载有关。

核因子E2相关因子2与肾间质纤维化研究进展

肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是慢性肾衰竭的主要原因之一,是各种慢性肾脏疾病的共同结果,其发病机制与肾间质成纤维细胞,肾小管上细胞,炎性细胞以及肾小管周围毛细血管内皮细胞的转型,损伤和数量相关[1].氧化应激是导致细胞损伤、衰老和死亡的主要原因之一,其在神经退行性疾病、缺血性心脏病、肝、肺纤维化和癫痫等重要疾病的发生和发展中起重要作用[2-4].核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路是近年来发现的非常重要的抗氧化应激通路[5].本文就Nrf2/ARE通路的新研究进展,及其在氧化应激所致肾间质纤维化中的作用综述如下.