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添加VB1后安神补脑液对神经细胞的保护作用
目的：通过研究含VB1的全方安神补脑液、不含VB1的安神补脑液、VB1液三种药液对H2O2诱导损伤PC12细胞的保护作用，探讨添加VB1后的全方安神补脑液对神经的保护作用。方法：利用H2O2诱导损伤PC12神经细胞，通过MTT法检测细胞存活率，试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶（CAT）活性、丙二醛(MDA)含量，观察安神补脑液对PC12神经细胞损伤的保护作用。结果：三种药液对PC12神经细胞存活率均无显著影响，对H2O2诱导损伤的PC12细胞均具有保护作用。添加VB1后的全方安神补脑液对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用优于不含VB1的安神补脑液及VB1药液。结论：添加VB1后的全方安神补脑液能增强其对神经细胞的保护作用。
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苯甲酸钠对PC12细胞的增殖抑制及MAPKs活化表达的影响
目的 观察苯甲酸钠(sodium benzoate,SB)对PC12肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖的抑制作用及在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点,为进一步了解SB的神经毒性及相关的分子机制提供实验依据.方法 大鼠PC12细胞在含0～ 50 mmol/L浓度SB的培养基中培养24 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Western blot检测JNK和ERK磷酸化水平的改变.结果 SB可呈一定的时间和浓度依赖性抑制PC12细胞增殖,其中40 mmol/L SB作用24 h对PC12细胞的抑制率为47.81％ ±5.23％;Western blot结果显示,SB处理可增加JNK的磷酸化水平并降低基础的ERK磷酸化水平;预孵SP600125 30 min后再加入SB,则能短暂降低JNK的磷酸化水平.结论 SB能够明显抑制PC12细胞的增殖,JNK和ERK信号转导通路可能参与了SB对PC12细胞的毒性作用机制.
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铁离子对二氢青蒿素神经毒性的作用
青蒿素(artemisinin)是从菊科植物艾属黄花蒿中提取的一种化合物,已被广泛用于各型疟疾的治疗[1].青蒿素类药物结构中含有内过氧桥,可与铁离子反应产生氧自由基(reactive oxygen species,ROS),进而导致疟原虫的死亡[2].二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)是青蒿素在体内的主要代谢物,其水溶性和抗疟疾疗效均比青蒿素要高,是一种有效的口服抗疟疾药物.近年来研究发现,青蒿素类药物具有一定的毒性,可导致大鼠胚胎发育畸形;也可通过血脑屏障进入中枢,导致大鼠发生运动障碍和脑干损伤[3-5].
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乙醇对PC12细胞p53蛋白的影响
过量饮酒也称酗酒,在大多数国家是一个严重的社会和公共卫生问题.酗酒不但导致各种刑事犯罪、交通事故、意外伤害和自杀及家庭破裂等,而且可引起多系统、多脏器和多功能损害,对神经系统损害尤为突出[1].乙醇是一种亲神经物质,极易透过血脑屏障,对中枢神经系统有抑制作用.体内试验表明神经元和星形胶质细胞是乙醇作用的靶细胞[2,3].许多体外试验也证实,乙醇作用神经元和神经胶质细胞后,可使其细胞数目减少及增加细胞死亡数[4].转录因子p53在细胞凋亡与细胞周期过程中蛋白分子调控网络起着"分子警察"的关键作用.本研究通过体外培养的PC12(pheochromocytoma)细胞探讨p53蛋白在乙醇诱发的神经细胞毒性中所起的作用.
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阿特拉津致PC12细胞损伤机制的研究
目的 通过体外实验,探讨阿特拉津(atrazine,ATR)对多巴胺能神经元的的毒性作用及损伤的分子机制.方法 在体外培养PC12细胞,加入不同浓度ATR染毒,在12和24 h收获细胞和培养液,通过高效液相色谱荧光法(HPLC-FL)测定多巴胺(Dopamine,DA)浓度,通过逆转录聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western-blot)检测ATR对PC12细胞酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1,Nurr1)、巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)和囊泡单胺转运体2(vesicular monoaminetransporter 2,VMAT2)基因表达的影响与蛋白表达量的变化,并用SPSS17.0进行统计学分析.结果 HPLC-FL显示随着ATR染毒剂量的增加,细胞DA含量呈剂量依赖性降低(P＜0.05),并随时间增长减少.Real-time PCR结果显示,用100、200和400μmol/L浓度的ATR染毒12与24 h的PC12细胞,与对照组比较差异显著(P＜0.05),存在剂量-反应关系,呈负相关性.PC12细胞中Nurr1、DAT、VMAT2、TH蛋白显著降低(P＜0.05).结论 ATR通过影响巴胺代谢途径中的相关酶及其调控酶形成的基因致PC12细胞多巴胺能损伤.
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PC12细胞中氧化还原因子-1对过氧化氢和谷氨酸损伤的不同反应
目的 通过研究PC12细胞抗氧化应激的氧化还原因子-1(apurinic/apyrimidimic endonuclase/redox factor1,APE/Ref-1)分子在过氧化氢和谷氨酸损伤过程中表达水平的变化,探讨谷氨酸对神经细胞损伤的分子机制.方法 以PC12细胞作为神经细胞模型,以200和400 μmol/L浓度的过氧化氢或以10和20 mmol/L谷氨酸钠处理PC12细胞,用噻唑蓝法(MTT法)检测细胞的损伤程度,以Western blot方法测定APE/Ref-1表达水平.结果 过氧化氢对PC12细胞的APE/Ref-1蛋白表达具有诱导作用.谷氨酸对PC12细胞的APE/Ref-1蛋白表达无影响.结论 谷氨酸对PC12细胞的损伤过程中,所产生的氧化应激作用的水平很低,远不足以引起抗氧化应激的APE/ref-1蛋白的代偿反应.
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锰处理PC12细胞某些生化指标的变化
目的 研究不同浓度氯化锰处理对细胞脂质过氧化及抗氧化酶的影响.方法 不同浓度氯化锰处理体外培养的PC12细胞,测定细胞内丙二醛(malonaldehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidaec,GSH-Px)的活力.结果 3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTY)实验结果显示不同浓度的氯化锰对细胞的生长增殖有不同程度的抑制(P<0.05).MDA的含量与对照相比显著升高(P<0.05).且锰处理组SOD和GSH-Px的活力显著低于对照组(P<0.05).结论 过量的氯化锰会增加细胞脂质过氧化水平,同时抑制细胞内SOD及GSH-Px的活力,导致细胞产生高氧化水平,造成细胞功能损伤.这可能是二价锰发挥毒性的途径之
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海风藤对氯化钴诱导PC12细胞凋亡的保护作用
目的 研究海风藤对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞凋亡的分子机制,从而确定海风藤对缺氧诱导的神经细胞凋亡的保护作用.方法 设立海风藤保护组,CoCl2诱导组和正常细胞对照组;倒置相差显微镜观察细胞形态变化,四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率,分光光度法检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量和活性氧(ROS)生成量水平变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase-3表达量的变化;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-xl的表达.结果 海风藤预保护的PC12细胞在CoCl2诱导后,与CoCl2诱导组相比,细胞形态有明显改善,细胞存活率显著上升,由28.7%变为65.1%(P＜0.01);培养基中LDH含量和ROS生成量明显下降,相应吸光度分别由29.8和18.3变为18.33及7.8(P＜0.01);细胞ATP释放量明显增加,保护组为诱导组的1.2倍(P＜0.01);基因bcl-xl表达上升;Caspase-3在细胞凋亡中的活性被抑制,保护组为诱导组的81%(P＜0.01).结论 海风藤能通过抑制氧化应激损伤对线粒体功能破坏,增强bcl-xl的表达,抑制Caspase-3激活等机制提高细胞存活率,达到抑制CoCl2诱导PC12细胞凋亡作用.
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PC12细胞在神经细胞分泌研究中的应用
1概述细胞分泌(胞吐作用)是神经元之间信息交流的关键环节,也是多年来学者们广泛研究的焦点之一.细胞外分泌可以看作是包含有神经递质的囊泡向细胞膜迁移(人坞)并与之融合,随后释放内容物的过程[1-3].这一过程使电信号转变为化学信号,从而实现细胞之间的信息交流.传统的观察和量化个体细胞外分泌时间的方法包括电子显微镜和膜片夹电容测量法等等[4].1990年,Wightman等[5]发现使用微电极电流分析法可以直接监测毫秒时程内发生的细胞外分泌事件,此后,电流分析法被广泛应用于细胞分泌过程的研究中.
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核因子-kB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用
目的 探讨核因子kB(NF-KB),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用.方法 应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NF-kB、p53、Bel-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理.结果 PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性.差异有显著性(P<0.05).RT-PCR结果显示NF-kB p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性.Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低.结论 铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NF-kB及D53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关.
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醋酸铅对PC12细胞核转录因子-кB转录活性的影响
目的 探讨醋酸铅及NF-кB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对核转录因子-kappa B(NF-κB)转录活性的影响. 方法 将大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)暴露于不同浓度的醋酸铅0、12.5、25、50、100、200、400、800和1600 μmol/L,采用四唑盐比色实验(MTT)检测IC50值.用脂质体将pNF-кB-Luc报告基因质粒转染入PC12细胞,转染后的PC12细胞分别暴露于不同浓度的醋酸铅(100、200和400 μmol/L)及不同浓度醋酸铅加PDTC 100 μmol/L,24小时后采用萤光素酶检测试剂盒检测萤光素酶活性. 结果 用不同浓度的醋酸铅处理细胞24小时,其生长增殖受到不同程度的抑制,且呈现出剂量-反应关系,其IC50值为(533.966±100.830) μmol/L.用不同浓度的醋酸铅处理转染后的PC12细胞24小时,结果显示:PDTC对照组萤光素酶活性较空白对照组降低(P＜0.01);铅处理组萤光素酶活性较空白对照组高(P＜0.01),且具有剂量依赖性;铅+PDTC联合作用组与PDTC对照组相比,PC12细胞内萤光素酶活性增高(P＜0.01). 结论 醋酸铅可诱导PC12细胞的NF-кB转录活性升高.
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类毒素-A激活PC12细胞时胞内即刻早期基因的表达
目的探讨即刻早期基因在类毒素-A激活PC12细胞烟碱受体过程中的调控作用.方法运用逆转录聚合酶链反应方法测定类毒素-A激活PC12细胞烟碱受体时胞内c-fos,c-jun,NGFI-A和NGFI-B四个即刻早期基因的mRNA基因表达情况.结果当10-9、10-8、10-7mol/L类毒素-A激活PC12细胞烟碱受体1小时,或10-7mol/L类毒素-A激活PC12细胞30、60、120分钟时,细胞内c-fos和NGFI-A mRNA基因表达均显著高于对照组(P＜0.05),是对照组的2～6倍,且c-fos基因表达呈剂量反应和时间效应关系.而此间c-jun和NGFI-B基因表达与对照比较没有明显变化.结论c-fos和NGFI-A可能参与调控类毒素-A激活PC12细胞烟碱受体的作用.
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锰对多巴胺能神经细胞PC12的毒性及其机制研究
为探讨锰(Mn)抑制神经细胞增殖的机制,体外培养神经细胞株PC12,培养基分别含有100、200及500 mmol/L MnCl2, 作用24、48、72h后,用四唑盐比色实验(MTT)和平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长;台盼蓝拒染法绘制生长曲线; DTNB法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性、丙二醛比色法测定丙二醛(MDA)的含量;DNA凝胶电泳检测神经细胞凋亡.结果显示,MTT和平板克隆形成实验检测结果显示100～500mmol/L的Mn均对PC12细胞株有显著的抑制作用,且呈剂量-效应关系.GSH-Px活性降低;MDA的活性升高.DNA凝胶电泳结果显示锰能够诱导PC12细胞凋亡.提示锰对神经细胞PC12的增殖具有显著的抑制作用,其机制是通过降低过氧化物酶的活性、干扰神经细胞的DNA代谢和诱导神经细胞凋亡.
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海参脑苷脂对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用
目的 研究海参脑苷脂(SCC)对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用.方法 建立H2O2致PC12细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶( LDH)漏出量,评价细胞的损伤程度;利用荧光探针DCFH-DA对细胞内活性氧(ROS)进行荧光染色,检测荧光强度;化学比色法测定细胞内总抗氧化能力(T-AOC),黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 海参脑苷脂能明显改善H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤,与模型组相比,SCC处理组可使细胞存活率升高,细胞培养液中LDH的漏出量明显减少(P＜0.01),细胞内ROS的积累量明显降低(P＜0.01),同时细胞内T-AOC和SOD活性明显增加(P＜0.01).结论 SCC对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有一定的保护作用.
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葡萄籽原花青素对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制研究
目的 探讨葡萄籽原花青素(GSP)对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制.方法 用H_2O_2作用于PC12细胞,MTT检测细胞活性,用流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率,共聚焦显微镜观察细胞Caspase-3活性的变化.结果 与模型组比较100μg/ml葡萄籽原花青素可使PC12细胞活性升高(P
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桑椹提取物对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤保护作用的初步研究
目的 观察桑椹提取物(ME)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)致PC12细胞损伤的保护作用,并初步探讨相关机制.方法 将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及(25、50、100、200、400和800μg/ml) ME预孵育组(ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用MTT法确定ME的干预浓度.在此基础上,将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、ME组(200μg/ml ME作用24h)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及ME预孵育+Aβ25-35组(200μg/ml ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用分子探针DCFH-DA及Hoechst33342染色法分别进行细胞内活性氧(ROS)含量及细胞凋亡的测定.结果 (1)与对照组相比,Aβ25-35组细胞存活率显著降低(P＜0.05)；与Aβ25-35组相比,100、200μg/ml ME预孵育组细胞存活率显著提高(P＜0.05).(2)与对照组相比,200μg/ml ME组细胞ROS的生成及细胞凋亡率无显著变化(P＞0.05),而Aβ25-35组细胞内ROS的生成显著升高(P＜0.05)、细胞凋亡率也明显增加(P＜0.05)；与A β25-35组相比,200μg/ml ME预孵育组细胞内ROS的生成显著减少(P＜0.05)且细胞凋亡率明显降低(P＜0.05).结论 桑椹提取物对Aβ25-35致PC12细胞损伤有明显的保护作用,机制与其抗氧化及抑制凋亡作用有关.
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染料木黄酮对β淀粉样肽25-35介导的PC12细胞凋亡过程相关基因表达的影响
目的 研究不同剂量的染料木黄酮(Gen)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)介导的PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨了可能的分子调控机制.方法 PC12细胞传代培养48 h后,选取生长良好的同批次细胞,随机分为5组,即对照组、Aβ模型组(20 μmol/L),Gen干预组(25,50和100 μmol/L),Gen预处理2h后,经Aβ25-35染毒,建立细胞损伤模型;24 h后,收集细胞,用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PC12细胞caspase-3,caspase-9,bcl-xl,bad和LRP5基因的表达.结果 与对照组相比,Aβ组细胞caspase-3,caspase-9和bad mRNA表达上调,其差异具有统计学意义(P <0.05),bcl-xl,LRP5 mRNA表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);与Aβ组相比,Gen高剂量组可显著下调PC12细胞caspase-3,caspase-9和bad mRNA表达(P <0.05);Gen高剂量组可显著上调bcl-xl,LRP5 mRNA,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Gen可能是通过下调细胞凋亡促进基因caspase-3,caspase-9和bad mRNA表达,上调细胞凋亡抑制基因bcl-xl,LRP5 mRNA表达,拮抗Aβ诱导的神经细胞凋亡,从而发挥神经细胞保护作用.
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吡咯喹啉醌对衰老大鼠学习记忆的影响及机制研究
目的 研究吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone,PQQ)对受到氧化损伤的神经细胞的修复作用,探讨PQQ在因衰老产生机体氧化损伤的大鼠体内、脑内的抗氧化作用,以及该抗氧化作用对衰老大鼠学习记忆能力产生的影响.方法 使用H2O2诱导PC12神经细胞(大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株)氧化损伤,随后用噻唑兰法检测PQQ对PC12的修复作用.用PQQ(O、10、20、40 mg/kg)灌胃18月龄雄性SD大鼠,4周后用Morris水迷宫试验测定大鼠的学习记忆能力,6周后测定血清和脑组织的氧化损伤水平和抗氧化能力.结果 200 nmol/L的PQQ使PC12细胞的存活率从59.1％增加到90.5％;与衰老模型组比较,PQQ中和高剂量组(20、40 mg/kg)大鼠在Morris水迷宫试验中的5d潜伏期缩短、5d游泳总路程减少,PQQ各剂量组(10、20、40 mg/kg)7 d穿越次数增加、7d第一次平台穿越时间减少.同时PQQ各剂量组大鼠血清和脑组织中丙二醛、脑组织中脂褐素水平降低,中和高剂量组(20、40 mg/kg)血清和脑组织中超氧化物歧化酶水平、谷胱甘肽过氧化物酶活力以及脑组织中抗氧化能力增强.结论 PQQ可修复神经细胞的氧化损伤,证实了PQQ能够在体内与大脑中同样发挥抗氧化作用,增加衰老大鼠学习记忆能力.
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电磁辐射急性辐照致PC12细胞的损伤效应
目的探讨电磁辐射急性辐照对PC12细胞的影响.方法对离体培养的PC12细胞以65mW/cm2电磁波急性照射20min,于辐照后即刻、3、12、24h四个时相点检测细胞存活率、乳酸脱氢酶释放率,并采用Annexin-V-FITC及PI双标记流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率.结果电磁波辐照后即刻PC12细胞存活率和LDH释放率变化不明显(P＞0.05),辐照后3h细胞存活率明显降低,而LDH释放率明显增加(P＜0.05),到24h后达到峰值(P＜0.01).电磁波辐照后即刻PC12细胞凋亡开始增加(P＜0.05),3h后凋亡细胞进一步明显增多,凋亡率约为20%,24h后细胞凋亡再次显著增加(P＜0.01).结论电磁辐射急性辐照后早期即可引起PC12细胞损伤,而在辐照后24h出现一种"继发损伤反应",细胞凋亡可能是电磁辐射辐照诱导PC12细胞损伤的主要原因之一.
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参附注射液对过氧化氢诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制
目的：观察参附注射液对过氧化氢(H2O2)诱导的氧化损伤神经细胞的保护作用，并探讨其作用机制。方法以H2O2(100μmol/L)刺激PC12细胞1 h制备细胞氧化应激损伤模型，测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)泄漏率，采用Western blot法测定NF-κB信号通路中NF-κB p65(p65)、NF-κBα抑制蛋白(IκBα)的表达变化。结果与模型组比较，参附注射液低、中、高剂量组细胞存活率[(83.11±2.59)%、(87.99±0.59)%、(85.26±1.07)%比(73.82±1.82)%]升高(P＜0.01或P＜0.05)，细胞 LDH 泄漏率[(32.75±4.10)%、(28.52±1.14)%、(35.79±1.62)%比(64.34±3.18)%]降低(P＜0.01或P＜0.05)， p-p65/p65蛋白[(1.30±0.10)、(1.17±0.06)、(1.37±0.15)比(1.70±0.10)]、p-IκBα/IκBα蛋白[(1.07±0.12)、(1.00±0.10)、(1.03±0.06)比(1.17±0.06)]表达下调(P＜0.01或P＜0.05)。结论参附注射液在体外对拟神经PC12细胞具有抗氧化损伤作用。
