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桑椹提取物对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤保护作用的初步研究
目的 观察桑椹提取物(ME)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)致PC12细胞损伤的保护作用,并初步探讨相关机制.方法 将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及(25、50、100、200、400和800μg/ml) ME预孵育组(ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用MTT法确定ME的干预浓度.在此基础上,将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、ME组(200μg/ml ME作用24h)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及ME预孵育+Aβ25-35组(200μg/ml ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用分子探针DCFH-DA及Hoechst33342染色法分别进行细胞内活性氧(ROS)含量及细胞凋亡的测定.结果 (1)与对照组相比,Aβ25-35组细胞存活率显著降低(P＜0.05)；与Aβ25-35组相比,100、200μg/ml ME预孵育组细胞存活率显著提高(P＜0.05).(2)与对照组相比,200μg/ml ME组细胞ROS的生成及细胞凋亡率无显著变化(P＞0.05),而Aβ25-35组细胞内ROS的生成显著升高(P＜0.05)、细胞凋亡率也明显增加(P＜0.05)；与A β25-35组相比,200μg/ml ME预孵育组细胞内ROS的生成显著减少(P＜0.05)且细胞凋亡率明显降低(P＜0.05).结论 桑椹提取物对Aβ25-35致PC12细胞损伤有明显的保护作用,机制与其抗氧化及抑制凋亡作用有关.
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桑椹提取物对胰蛋白酶的抑制作用及对小鼠胰腺组织的损伤
目的 研究桑椹对胰蛋白酶的抑制作用及其对小鼠胰腺组织的影响.方法 体外采用Na-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基苯胺(BAPNA)法研究桑椹提取物(ME)对胰蛋白酶的抑制作用,将桑椹提取物分别经丙酮及硫酸铵分级沉淀,并测定各沉淀组分对胰蛋白酶的抑制作用,用酶解法失活桑椹提取物中的胰蛋白酶抑制剂(TI),得到胰蛋白酶抑制剂失活的桑椹提取物(T-ME),并通过动物试验进一步研究桑椹提取物及胰蛋白酶抑制剂失活的桑椹提取物对小鼠胰腺组织的影响.结果 桑椹提取物(ME)对胰蛋白酶表现出较强的抑制作用;丙酮沉淀组分对胰蛋白酶的抑制作用远远强于硫酸铵沉淀组分;桑椹提取物(ME)中的TI可经碱性蛋白酶失活;体内实验显示桑椹提取物(ME)高剂量组可致幼年小鼠胰腺组织氧化损伤及结构损伤,而胰蛋白酶抑制剂失活的桑椹提取物(T-ME)高剂量组未见相应损伤.结论 桑椹中含有蛋白质类TI,很可能为Bowman-Birk型;碱性蛋白酶可以有效失活桑椹中的TI;桑椹中TI可造成幼年小鼠胰腺组织损伤,损伤机制可能与胰腺组织产生的氧化应激有关.
