PrepElite-GVS-LC/MSMS检测牛奶中的硝基咪唑类药物残留

本文介绍的方法采用PrepElite-GVS （浓缩系统-GPC凝胶净化系统-SPE分离系统）全自动样品前处理平台对牛奶样品进行GPC和C18固相萃取柱净化，并采用液相色谱串联质谱分析检测其中的3种硝基咪唑类药物残留，3种硝基咪唑类药物残留的回收率均在60%～85%之间，RSD均小于7%。

生物分析仪器在食品检测方面的应用

食品检测分析仪的常见应用及功能
　　质谱分析。用电流将被检测的食品样品进行轰击，之后将轰击之后形成的食品样品正离子碎片用图谱进行定量，之后将结果记录下来。食品样品中的香味成分、蛋白质成本、有机化合物、有毒物质、定量或者定性的糖类组成等都可以被分析检测出来。

赛默飞推出两款Orbitrap系列质谱新品开启质谱分析新时代

10月13日，科学服务领域的世界领导者赛默飞世尔科技（以下简称：赛默飞）暨Orbitrap十周年客户会议召开之际，在北京发布该系列两款质谱新品--Thermo ScientificTM Orbitrap FusionTM LumosTM三合一质谱仪和Thermo ScientificTM Q ExactiveTM GC Orbitrap GC-MS/MS系统，以及一款色谱新品Thermo Scientific Vanquish Flex UHPLC系统，全面彰显赛默飞卓越的技术革新和深耕本地市场的决心，进一步推动国内分析检测领域的飞速发展。

蛋白质组学:在生殖系统疾病研究的新方法

人类基因组大规模测序,揭示基因组精细结构的同时,还显示出基因数量的有限性和结构的相对稳定.随着生物技术的飞速发展,创立了与基因组相对应的蛋白质组学(proteomics),将从生命功能的执行体--蛋白质水平研究基因的表达及功能.生殖系统的疾病,并非均由遗传变异引起,许多分子水平的变化发生在翻译后蛋白质的修饰.利用蛋白质组学可从分子水平了解生殖系统的健康状况和疾病的发生机制.

大鼠精子发生过程中热休克蛋白70-2特异表达的研究

目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白质,找到目标蛋白质后,进一步用免疫组织化学方法做定位研究.方法用重力沉降法(STAPUT法)从9 d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞.分别提取这3种细胞的总蛋白质,进行双向电泳.对所得双向电泳凝胶扫描,分析并找出差异蛋白质.对挑选出的差异蛋白质做质谱分析,发现在这3种不同细胞的表达上有明显差异的蛋白.进一步做睾丸免疫组织化学组织定位、定量研究.结果双向电泳结果显示,HSP70-2在粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量较高,在A型精原细胞则表达量极少.HSP70-2在粗线期精母细胞中表达量大.用HSP70-2抗体对大鼠睾丸组织切片行免疫组织化学研究,发现粗线期精母细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞有阳性颗粒反应.HSP70-2主要表达于细胞质. 结论HSP70-2在精子发生过程中有明显的差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用.

质谱仪在乳腺癌生物标记物研究中的应用

乳腺癌是一种威胁女性健康的常见恶性肿瘤,目前临床上主要依据组织病理学要素对乳腺癌进行病情预测和治疗.以生物标记物的发现和确认为核心的临床蛋白质组学研究逐渐成为了乳腺癌研究的主流方向,这大大提升了临床对乳腺癌分子机理的认识,并推动了对乳腺癌的临床诊断及预后.本文主要对质谱仪在乳腺癌生物标记物研究中的应用进展进行综述.首先介绍了基于质谱的蛋白质组学的基本概念,然后具体阐述了质谱技术中的一些新研究进展以及相关技术在乳腺癌生物标记物研究中的应用,并且还分析了一些利用质谱技术寻找到的潜在乳腺癌生物标记物及其应用前景,后对质谱技术应用于该领域的局限性以及未来发展趋势进行了展望.

鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷症致围生期母婴死亡1例

鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷症(ornithine carbamoyltransferase deficiency,OTCD)是尿素循环障碍(urea cycle disorders,UCDs)的一种常见类型,是由鸟氨酸氨甲酰基转移酶(omithine carbamoyltransferase,OTC)基因突变引起,为一种不完全显性或隐性X连锁遗传病,平均患病率约为1/14 000[1],常以脑损害和肝脏损害为首发表现.临床上表现为高氨血症及其所引起的不同程度的神经系统和肝损害,严重者在新生儿阶段可出现呕吐、拒食、嗜睡、抽搐、昏迷以致死亡[1].迟发型可在成年发病.对不明原因脑病患者,应尽早行血氨测定、血尿有机酸质谱分析有助于OTCD诊断.本文报告1例罕见的围生期母儿死亡病例,后诊断均确诊为OTCD,并结合国内外相关资料,探讨OTCD的临床特点,以达到及早诊断、改善预后的目的.

汞砷等元素在多指(趾)畸形发生中的作用

目的探讨汞(Hg)、镉(Cd)、砷(As)、铅(Pb)与人群中多指(趾)畸形的关系. 方法采用1∶1配对病例对照研究方法,在"中美预防出生缺陷监和残疾合作项目"监测系统中,募集新近发生的86对多指(趾)畸形病例和相应对照,问卷调查引起出生缺陷可能的环境危险因素的暴露情况;采用微波消化、ICP质谱分析等方法,测定了多指(趾)畸形病例和对照组产妇早孕阶段毛发中汞、铅、砷、镉元素的含量;利用COX比例风险模型进行流行病学配对资料多因素分析. 结果孕期从事化工职业工作、膳食中水果类摄入较少以及发汞含量为3个有显著性意义的环境危险因素,对应的OR值分别是9.99、1.89和1.95,P值分别是0.029、0.028和0.022. 结论孕期工作环境、饮食情况与胎儿多指畸形有关;孕早期汞的环境暴露可能是多指(趾)畸形的危险因素之一.

080 超临界流体萃取和液相色谱-电喷雾质谱分析长春花中的长春碱

液质联用法监测元胡止痛胶囊原料药的投料分析研究

目的 应用液质联用法(liquid chromatograph-massspectrometer, HPLC-MS/MS)监测元胡止痛胶囊中延胡索和白芷的投料情况,并同时检测其延胡索乙素、欧前胡素含量.方法 采用Inertsil ODS-3柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),柱温40 ℃,流动相为0.1%甲酸-乙腈溶液,梯度洗脱,以HPLC法检测延胡索乙素、欧前胡素含量;采用电喷雾离子源负离子模式检测,选择多反应离子监测方式进行定性监测原料药的投料情况.结果 通过分析供试品与对照药材、对照品的一级质谱图相同的特征峰,可判断该中成药是按处方工艺投料;通过测定HPLC-MS/MS色谱峰面积,可对供试品进行定量.方法学验证结果表明,延胡索乙素和欧前胡素分别在 5.08×10-5～30.45×10-5μg(r＝0.999 4)、5.02×10-5～30.09× 10-5μg(r＝0.999 2)范围内呈良好线性关系;精密度试验RSD分别为0.99%、1.14%;回收率分别为97.02%～99.66%、97.62%～99.94%.结论 该法快速简便、灵敏度高、准确可靠,适用于全面监测元胡止痛胶囊中延胡索和白芷的投料情况及质量.

液质联用法分析雾灵乌头不同部位生物碱成分研究

目的 应用高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱法分析雾灵乌头不同部位提取物的生物碱.方法 采用Agilent XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.1%氨水-乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1 ml/min,柱温为30 ℃;正离子模式采集.结果 雾灵乌头根部发现61种生物碱,鉴别出46种.在茎中发现38种生物碱,鉴定出33种,有27种与根部相同.在叶中检测出18种生物碱,其中8种与根部生物碱相同.结论 该方法精确、可靠、高效,适用于雾灵乌头成分的快速鉴定,为雾灵乌头的开发利用及阐明其药效物质基础提供参考.

基于双向凝胶电泳技术的中医寒、热体大鼠蛋白质组表达谱研究＊

目的：利用双向凝胶电泳技术对中医寒、热体大鼠进行蛋白质组表达谱研究，以期寻找与寒热体相关的蛋白质，并探讨中医寒、热体形成的生物学基础。方法：提取大鼠肝脏细胞的总蛋白，采用双向凝胶电泳（2-DE）及MALDI-TOF-MS质谱技术筛选并鉴定寒热体表达差异的蛋白质群。结果：经过筛选和质谱技术共获得10个具有统计学意义的蛋白表达差异点：氨甲酰磷酸合成酶、二硫键异构酶、过氧化氢酶、过氧化氢异构酶、细胞质氨肽酶、谷氨酸脱氢酶、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶、热休克蛋白前体、同型半胱氨酸、葡萄糖调节蛋白前体。结论：中医寒热体大鼠在蛋白质组表达方面存在一定的差异性，酶类蛋白代谢异常可能是寒热体形成的物质基础之一。

不同中医证型鼻咽癌原发病瘤灶组织差异表达蛋白

目的:寻找不同中医证型鼻咽癌患者原发病瘤灶组织差异表达蛋白.方法:采用双向凝胶电泳对不同中医证型鼻咽癌患者的鼻咽癌组织和健康人鼻咽组织总蛋白进行分离,对比分析找出差异表达蛋白质斑点,结合基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析技术和数据库信息检索鉴定差异蛋白点.结果:与健康对照组比较,气血凝结型鼻咽癌组差异表达蛋白点共计23个,其中表达活性上调12个、表达活性下调11个,选择10个差异蛋白质斑点进行质谱鉴定,成功鉴定出5个,其中表达上调的有SH3域结合谷氨酸丰富样蛋白3、磷酸甘油酸变位酶1和烯酰水合酶辅酶1;表达下调的是α1抗胰蛋白酶和巨噬细胞帽蛋白.与健康对照组比较,火毒困结型组鼻咽癌差异表达蛋白点共计23个,其中表达活性上调12个、表达活性下调11个,选择10个差异蛋白质斑点进行质谱鉴定,成功鉴定出6个,其中表达上调的有膜联蛋白11、肌动蛋白相关蛋白3和蛋白酶体激活因子亚基2;表达下调的有谷胱甘肽S-转移酶P1、血清白蛋白和内质网蛋白29.与气血凝结型组比较,气阴两虚型组差异蛋白点共计27个,其中表达活性上调17个、表达活性下调10个,取其中10个差异点进行质谱鉴定,共有6个点得到鉴定,其中表达上调有线粒体延长因子Tu和Rab GDP解离抑制因子β;表达下调的有线粒体富马酸水合酶、免疫球蛋白KAPPA链C区、前凋亡胱冬酶衔接因子蛋白和N(G)N(G)的二甲基精氨酸二甲胺水解酶1.结论:火毒困结型、气阴两虚型和气血凝结型鼻咽癌患者原发病瘤灶组织存在差异表达蛋白质.

比格犬口服益智亲水凝胶骨架片后栀子苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的药动学研究

目的:研究比格犬口服益智亲水凝胶骨架片后栀子苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的体内药动学,与益智普通片比较生物利用度.方法:采用质谱分析方法(HPLC-MS/MS)测定栀子苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1在血浆中的药物浓度,用Kinetica 4.4软件对血药浓度数据进行处理.结果:益智亲水凝胶骨架片与益智普通片的药动学参数相比,栀子苷、三七皂苷R1和人参皂苷Rb1的Cmax,AUC,MRT明显增加(P＜0.05),人参皂苷Rg1的AUC和MRT明显增加(P＜0.05).结论:药动学参数的增加表明骨架材料可以用于中药复方缓控释制剂.利用HPMC制备的益智亲水凝胶骨架片可以增加栀子苷和三七总皂苷的生物利用度,因此提高了其治疗效果以及临床应用范围.

脑梗死肝阳化风证外周血淋巴细胞相关蛋白质鉴定和分析

目的 应用比较蛋白质组学方法分析并鉴定脑梗死肝阳化风证和阴虚生风证的相关蛋白质,探讨中医肝阳化风证及阴虚生风证的本质内涵.方法 设计选择脑梗死肝阳化风证,阴虚生风证患者及健康人各15例,提取外周静脉血淋巴细胞总蛋白质,经双向凝胶电泳,考马斯亮蓝染色获取凝胶图谱,PDQuest V7.3.1软件比较分析3组双向凝胶电泳图谱并识别差异表达蛋白质,对有意义的蛋白进行质谱分析和数据库检索鉴定.结果 经比较分析,发现肝阳化风证组与阴虚生风证组差异蛋白质点23个,鉴定出22个共15种蛋白质,相同表达蛋白质点8个,鉴定出6个蛋白质点共5种蛋白质.包括代谢酶类、信号传导蛋白、细胞骨架蛋白,抗氧化蛋白等多类蛋白质表达异常.结论 脑梗死肝阳化风证与阴虚生风证具有相同蛋白和差异蛋白,提示二者具有相同的物质基础和不同的本质内涵.

燕窝酶解产物中多肽的液相色谱质谱分析

目的:针对燕窝中蛋白质糖基化程度不均一和相对分子质量范围不稳定,以及由此导致的蛋门质难以分离、分析和鉴别的问题,研究1种燕窝巾蛋白质和多肽的分析方法.方法:利用分步法从燕窝中提取了蛋白质组分,采用糖苷酶和蛋白酶对蛋白质组分进行了处理,采用牛物质谱技术对蛋白质降解物进行了分析,并对其中的多肽进行了序列分析.结果:燕窝中的蛋白提取率为79.7％,采用多级质谱技术从提取蛋白质的糖苷酶和胰蛋白酶处理后的混合物中检测出20种多肽.结论:这些多肽的序列与已有蛋白质数据库中不同种类蛋白的局部序列相似,为富含糖蛋白的动物药成分研究提供了技术参考.

宜昌细辛挥发油化学成分的GC-MS测定分析

宜昌细辛来源于马兜铃科植物宜昌细辛Asarum ichangense C.Y.Cheng et C.S.Yang的干燥全草,该药性温、味辛,具祛风散寒、开窍止痛功效,鄂西地区作土细辛药用,宜昌地区分布甚广,资源丰富.为进一步弄清所含挥发性成分,本实验对宜昌细辛的挥发油进行了气相色谱-质谱分析.

类风湿关节炎寒湿痹阻证患者血清蛋白组学分析

目的 从蛋白质表达水平初步探讨类风湿关节炎中医寒湿痹阻证的本质内涵.方法 选择24例2009年7月-2010年9月南京中医药大学附属医院风湿免疫科类风湿关节炎(RA)患者,按中医辨证分型分为寒湿痹阻证组和湿热痹阻证组,每组12例,另选择本院体检中心健康志愿者12名作为正常对照组.采用双向凝胶电泳技术分析各组蛋白图谱,分别比较寒湿痹阻证组和其他两组图谱,找出共同的寒湿痹阻证差异蛋白质点,应用基质辅助激光解吸飞行时间质谱进行鉴定.采用Mascot 软件在SwissProt数据库中搜索肽质量指纹谱数据并确定蛋白质.结果 寒湿痹阻证组与正常对照组差异蛋白质点共有81个;寒湿痹阻证组与湿热痹阻证组差异蛋白质点共有45个;有13个蛋白点是寒湿痹阻证组较其他两组蛋白表达量均高或均低的蛋白点;通过质谱鉴定和数据库检索获得9个差异蛋白质.这些差异蛋白大多与细胞增殖、细胞分化等细胞事件的抑制相关.结论 4.1蛋白、DLC-1蛋白等与细胞增殖和细胞分化相关蛋白具有潜在的作为类风湿关节炎寒湿痹阻证诊断、预后标志物或治疗靶点的意义,也为进一步研究寒湿痹阻证实质提供了依据.

清胰颗粒干预重症急性胰腺炎后胰腺蛋白组学表达差异性研究

目的 观察清胰颗粒(Qingyi Granules,QYG)对牛黄胆酸钠(sodium tauro cholate,STC)诱导大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)胰腺组织中总蛋白表达变化的影响.方法 36只SD大鼠经胰胆管逆行注射5% STC诱导SAP,随机分为SAP组和QYG治疗组(QYG组),每组18只.建模成功后,QYG组每12 h 1次QYG对水(W∶W=1∶1)灌胃[1 mL/(100 g·只)],SAP组以生理盐水替代,共给药4次.提取两组大鼠胰腺组织总蛋白行双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)、荧光染色和图谱分析,选择48 h两组间差异表达超过4倍的蛋白质点进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物信息学分析,观察两组蛋白质点的差异.结果 5%STC诱导出SAP大鼠模型,胰腺组织有典型病理学改变.经凝胶图像处理软件分析胰腺组织蛋白组学变化:48 h 时两组有22个差异点,用药后5个点蛋白上调,17个点下调.48 h时间点比较两组表达差异超过4倍且稳定的蛋白质斑点共有9个,质谱分析和数据库检索共鉴定出7种蛋白质,分别是丝氨酸蛋白酶抑制剂b1a (39 kb)、丝氨酸蛋白酶抑制剂b1a (43 kb)、硫氧还蛋白过氧化物酶-Ⅳ(Prx Ⅳ)、糜蛋白酶样蛋白(Clps)、γ-肌动蛋白(Actg1)、谷氨酰-脯氨酰tRNA合成酶(Eprs)、短链羟酰辅酶A脱氢酶(Hadhsc).从功能分析,这些蛋白与SAP胰腺病理损伤过程中信号传导相关.结论 比较蛋白质组学能较好地反映QYG对SAP大鼠胰腺组织中差异表达蛋白的影响,研究差异表达蛋白有可能为QYG治疗SAP提供新的理论基础和分子靶点.

卫气月生理变化周期中大鼠血浆代谢标志物的特征

目的 探讨卫气月生理变化的潜在代谢标志物.方法 以秋分日所在的农历月确定月初(农历八月初一)、月中(八月十五)及月末(八月三十).将10只SD大鼠分别在相应日期的正午12:00眼眶后静脉丛采血,采用高效液相色谱-质谱联用仪检测血浆代谢物,利用主成分分析和偏小二乘法对数据进行统计分析,比较各组之间血浆代谢组学数据,探索各组之间差异性代谢标志物,推测卫气月生理变化的潜在标志物. 结果 与月中比较,月初有7种差异代谢物为区分两组的可能标志物,月末有8种差异代谢物为区分两组的可能标志物;与月末比较,月初有9种差异代谢物为区别两组的可能标志物.推测其中的二十碳五烯酸、皮质醇、脯氨酸和富马酸二甲酯4种差异代谢物为卫气月生理变化的潜在差异性标志物.结论 卫气的月生理变化可能与脂质代谢、氨基酸代谢密切相关,并可能受到激素水平变化的影响.