首页 > 文献资料
-
Bactec 9120血培养仪用于活菌计数的初步研究
临床微生物检验和抗生素药效动力学研究过程中,经常会用到活菌计数技术,经典的浇注MH琼脂过夜培养后计数菌落的方法,耗时、费力、且难以标准化[1].Bactec 9120血培养系统(简称Bactec 9120)系利用荧光增强的原理快速检测血液及无菌体液标本中细菌的生长,该系统配套使用的培养瓶内有微生物生长的各种营养物质,而微生物在生长过程中的代谢产物之一CO2会激活瓶内底部荧光感应物质而发出荧光,荧光信号变化与CO2变化成正比,该荧光信号的变化经一组运算公式的运算,得出荧光信号变化的各种参数,从而判断培养瓶内是否有微生物生长.Bactec 9120设定瓶位探测器检测与计算时间间隔为每10min一次,可以准确提供标本阳性报警时间,并保存在联机计算机内供实验室人员查询[2].过去,国内外学者只关心报警时间长短对标本诊断周期的影响,本研究旨在探讨报警时间长短与初始接种菌量的关系及其临床活菌计数中的潜在应用价值.
-
采用康宁 HYPERFlask?细胞培养瓶快速扩增人体脂肪干细胞
人脂肪干细胞(hASCs)是一种丰富、易得的多能成体干细胞[1]。尽管我们可获取大量吸脂术后的脂肪,但是细胞治疗所需的大量未分化存活细胞仍需要通过高效的体外扩增方法才能得到。例如,在一项旨在改善肌肉萎缩症,并以小鼠为模型的治疗实验中,我们在每月一次注射106个细胞时得到了阳性结果[2]。如果我们将其应用于人体,一个体重60 kg的人每月大约需要3×109个干细胞。我们试验了多种体外扩增方案,采用康宁 HYPERFlask?细胞培养瓶,我们能够生产大量用于研究的间充质干细胞,并开发出面向未来的细胞治疗手段。
-
“克疣灵”治疗尖锐湿疣的实验研究
尖锐湿疣(CA)为难治性病毒性疾病,缺乏有效的治疗手段,为探讨中药"克疣灵"外搽剂(主要含生药苦参、黄连等)治疗CA的作用机理,我们开展(1) 兔包皮表皮细胞、CA细胞的原代与传代培养:无菌条件下剥离CA组织、雄性大白兔包皮表皮组织,修剪成1mm2大小置含20%胎牛血清的25ml无菌培养瓶,待组织块固定后翻转培养瓶,加RPMI 1640培养液1.5ml 37℃,5% CO2无菌培养箱中静置3~4 h后轻轻翻转,使组织小块浸于培养液中,14 d后待细胞贴满瓶底后传代至第5代.(2) 不同浓度的"克疣灵"对CA细胞、兔包皮表皮细胞增殖的影响:
-
一次性痰培养瓶在临床的应用
我们给带有气管插管或气管切开的病人做痰培养时,都是用吸痰管吸痰,然后用无菌棉签蘸取吸痰管上的痰液,然后再放人无菌小瓶中.这种方法吸痰时,痰液不易保留.吸痰过程中,痰液来不及保留,即很快被抽到吸痰瓶中去.即使吸痰管中有痰液,由于吸痰管管径较细,也不易取出;另外污染机会大.由于痰液很滑,在用棉签蘸取痰液或往无菌瓶中放置痰液都有困难,痰液在空气中暴露时间较长,再有人为的因素,痰液易被污染.我科自1999年以来,采用一次性痰培养瓶为病人留痰培养,效果很好,受到临床医护人员的欢迎.
-
肝细胞、胰岛细胞与储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响
目的:探讨肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响.方法:采用改良胶原酶消化法分离获得大鼠肝细胞和储脂细胞,同时利用梯度离心分离胰岛细胞.分两组实验,肝细胞培养组(对照组),肝细胞用RPMI1640、胰岛素10-7mol/L、100 mL/L FBS及地塞米松10-8 mol/L配成细胞悬液,2 mL放入9 cm2培养瓶中连续培养15 d(37℃50mL/LCO2).肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养组(实验组):将1×107/L的储脂细胞2 mL先加入培养瓶中,培养条件及培养液同肝细胞培养组,培养48 h后弃上清后将肝细胞2×108/L 2 mL和胰岛细胞(100个)分别加入并观察肝细胞存活情况;全自动生化分析仪测定培养上清液中总蛋白及尿素氮的含量;两组细胞均在培养10 d行细胞组织学及组织化学检测,包括肝细胞HE染色、肝细胞内糖原PAS染色及葡萄糖-6-磷酸酶染色检测.结果:培养第7 d对照组部分肝细胞脱落,核固缩,胞质破碎分解.而实验组肝细胞粘壁生长好,肝细胞、储脂细胞和胰岛细胞相间形成团状和索形.培养10 d对照组肝细胞核完全固缩,胞质破碎分解,糖原、葡萄糖-6-磷酸酶的表达消失;实验组肝细胞呈片状,胞质饱满,糖原、葡萄糖-6磷酸酶的表达良好.培养5 d后实验组白蛋白及尿素氮的合成明显高于对照组(P<0.05).结论:肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养明显延长肝细胞存活期.
-
大鼠骨髓间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增生的关系
目的:探索成体大鼠的骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养方法,观察采用不同的换液频度与细胞增生和生长的关系,为其应用提供实验依据.方法:从大鼠股骨获取骨髓,采用梯度离心的方法进行分离,在含10 mL/L胎牛血清的DMEM中常规培养,以MTT法检测不同的时间换液时细胞的生长曲线,并用碱性磷酸酶(AKP)检测的方法对分离的细胞进行鉴定.结果:采用梯度离心方法分离的骨髓间质干细胞的纯度较高,细胞活性佳,AKP染色为强阴性.首次换液后,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生,原代长满培养瓶底比每隔2-3 d换液一次平均提前2 d.结论采用梯度离心的方法分离可获得纯度较高的骨髓间质干细胞,是简单易行的分离方法,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生和形成形态均一的细胞集落.
-
胰高糖素样肽GLP-1(7-36)NH2对β细胞内游离钙和胰岛素分泌的影响
GLP-1(7-36)NH2是“肠-胰岛轴”中重要的调节胰岛素释放的激素,我们采用新生大鼠胰岛细胞单层培养的方法,探讨了GLP-1(7-36)NH2对胰岛素分泌的作用,并以Fluo-3为探针,用粘附式细胞仪,研究了它对胰岛β细胞内游离Ca2+的作用。 一、材料与方法 1.胰岛细胞培养:出生2~3d的Wistar大鼠,无菌取出胰腺,Hanks液漂洗,剪碎,加入0.2%胰蛋白酶和2g/L V型胶原酶(Sigma公司产品),置38℃水浴中反复振荡消化5~8min,用冰冷的Hanks液终止消化,及时分离消化物,离心收集细胞,加入含15%小牛血清的RPMI-1640培养基[1]。调整细胞浓度,接种于75mm3细胞培养瓶,置37℃、5% CO2和95%空气的培养箱中培养16h后,转入24孔培养板中,同时取一定量的细胞悬液接种于改良的Petri皿中(细胞浓度均为1×109个/L,记为0 d),培养48h后,用新配制的碘乙酸2.5mg/L处理3~5h,再换无碘乙酸培养液继续培养,每两天换培养液一次,培养7d后,选生长良好的细胞用于实验[1]。
-
胃液对BIU-87细胞系细胞凋亡的影响
为探讨胃代膀胱术抑制膀胱肿瘤复发的机制,我们采用体外实验方法,观察胃液对膀胱癌细胞系BIU-87细胞凋亡的影响,报告如下。 材料与方法细胞培养及处理:将BIU-87细胞系置于37 ℃、5% CO2、含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养,待细胞生长旺盛、进入指数增殖期时,收获培养瓶中的细胞,调配成2.5×105个/ml细胞悬液,接种至预先置有玻片的24孔培养板和T-75培养瓶,实验各组分别加入胃液(终浓度7.6 μmol/ml)、稀盐酸(终浓度7.6 μmo l/ml)、阿霉素(终浓度2 μg/ml)和无药培养液,继续置于37 ℃、5%CO2条件下培养,24 h后收集细胞进行检测。
-
自行设计角膜培养瓶保存角膜的实验研究
器官培养法保存角膜是角膜供体材料保存的主要方法之一,已在欧美国家许多眼库广泛应用[1-3].传统的保存方法是利用缝线连接角膜片和硅胶瓶盖,使角膜片悬垂在100 ml输液玻璃瓶中[4](图1).此法存在操作复杂、易污染及保存期间不能动态观察角膜质量等缺点.本研究采用新设计的角膜培养瓶,对角膜进行培养保存,取得了良好的效果.
-
人口腔粘膜上皮角朊细胞的体外培养
人口腔粘膜上皮角朊细胞的原代培养有许多困难,其中主要是上皮细胞接种成活率、产量和成纤维细胞污染的问题。我们比较酶消化法和组织块法建立口腔粘膜上皮角朊细胞体外培养模型,并用免疫组织化学法进行培养细胞的定性研究。 1.材料:培养物来源于5个月~10岁唇裂患者修复术中的口内粘膜。切取唇内侧粘膜组织修复剩余物若干,每块约0.5 cm×0.5 cm大小。 2.方法:①酶消化法:用D-Hanks液冲洗粘膜块,剪切至0.2 cm×0.2 cm大小。配制0.3 kg/LⅠ型胶原酶和0.4% Dispase消化液的混合液(1∶1)5 ml,将粘膜块放入其中,密闭放入4℃冰箱内12~20 h。将表皮从基底撕脱,放入5 ml 0.25%胰蛋白酶液中吹打5 min,终止消化。低速离心5 min,去上清,加入5 ml含15% 胎牛血清的基础培养液中,制成细胞悬液并调整细胞数目在5×108/L,接种于25 ml培养瓶中。②组织块法:将肉眼可见的粘膜下组织尽量去除。剪切至0.1 cm×0.1 cm大小,用探针将小组织块以0.5 cm的间距放于25 ml培养瓶内用多聚赖氨酸处理过的小盖片。轻轻翻转,放入37℃温箱2~4 h,加入2 ml含15%胎牛血清的基础培养液,轻轻翻转培养瓶,使培养液浸没组织块,静置培养,每周换液2次。
-
转化生长因子β对白细胞介素1β诱导髁突软骨细胞凋亡的调控作用
关节软骨进行性破坏是骨关节炎(osteoarthoritis,OA)的主要病理改变之一.近来发现OA关节软骨有异常的软骨细胞凋亡,这可能与OA关节软骨的破坏有关.我们就TGF-β在人重组白细胞介素-1β(rhIL-1β)诱导髁突软骨细胞凋亡中的作用进行了研究.1.材料和方法:(1)rhIL-1β诱导软骨细胞凋亡:将髁突软骨细胞接种于培养瓶中,密度为3×104/ml,培养至对数生长期,实验组分别加入含有rhIL-1β(1、10、20 ng/ml)及二甲基亚砜(DMS0,15μl/ml)的DMEM培养液,处理8、16、24 h后收集细胞.分别用流式细胞仪、透射电镜、DNA电泳检测细胞凋亡.对照组不加rhIL-1β.
-
低剂量辐射诱导蛋白对紫外线、电离辐射细胞损伤的保护作用
本研究通过直接提取低剂量辐射(LDR)诱导蛋白并观察其对紫外线、电离辐射所造成细胞损伤的保护作用。 一、实验方法 昆明小鼠随机分成非照射组和照射组,分别在20℃~24℃条件下接受0 cGy及10 cGy的γ射线照射,照射后2 h颈椎脱臼致死,无菌条件下取出脾脏,制成单细胞悬液,加蒸馏水以溶解红细胞,离心后按每6×107脾细胞2 ml比例加入含PMSF 4℃0.01 mol/L PBS,在冰浴下超声破碎脾脏细胞,破碎液在高速冷冻离心机上离心,上清液即为小鼠脾脏细胞蛋白提取液及含有LDR诱导蛋白的提取液,4℃冷藏待用。 取小鼠新鲜脾脏,制成RPMI 1640单细胞悬液,培养瓶培养细胞,各培养瓶装含10%小牛血清之RPMI 1640培养基2 ml,脾细胞悬液0.2 ml(脾细胞2×106个),接受UV(照射2 min,实测紫外线辐照强度为460 μW/cm2)或电离辐射损害(4 Gy)后分3组培养,分别加0.01 mol/L PBS、小鼠脾脏细胞蛋白提取液及含有LDR诱导蛋白的提取液0.1 ml,加3H-TdR20 μl,培养6 h、细胞收获、制膜后测放射线强度。
-
简易且能避免污染的细胞培养方法
培养细胞常规方法需用二氧化碳温箱,且为保持箱内二氧化碳气5%~10%的浓度,需持续输入二氧化碳气体.为此,箱内的培养瓶盖不能拧紧,以便二氧化碳气体自由进出.这种方法缺点:①成本较高:一个二氧化碳温箱的价值就近万元,另外需大量的二氧化碳气,费用也高;②较易污染:二氧化碳气需自由进出培养瓶,无形中增加了外界的细菌或真菌感染细胞的机会.兹将我们培养细胞的方法做一简介.该方法的特点:①只需购置数百元的普通隔水式恒温箱,不需要昂贵的二氧化碳温箱;②配液方法特殊,可节省大量的二氧化碳气体;③培养瓶口要塞严或将瓶盖拧紧,减少了细胞受到感染的机会.
-
脐带血间质干细胞生物学特性研究
本文旨在探讨从人脐带静脉血是否可分离出基质干细胞,如果可以,确定它们的特性,方法是采用不支持造血干细胞生长的培养基培养脐血单个核细胞,对其生物学特性进行研究.1 资料与方法1.1 12份脐血采至厦门市中山医院,每份30~60 ml.1.2 基质细胞的分离与培养经新生儿父母同意,于厦门市中山医院采集正常足月新生儿脐带血12份,用L-DMEM培养液悬浮制备好的细胞,接种于25 cm2培养瓶中培养.细胞达到70%汇合时进行传代.
-
低氧对血管内皮细胞肾上腺髓质素基因转录的影响
为研究低氧条件对肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)基因表达的影响,本文观察了低氧引起血管内皮细胞ADM基因转录的变化,并探讨ADM在缺血缺氧性疾病机制中的作用.1 材料和方法(1)HUVEC细胞的培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC(美国芝加哥大学Pritzker医学院Gewertz BL教授惠赠),用含20%小牛血清的M199培养基置于37℃,5%CO2培养箱内贴壁生长,待长满培养瓶培养面后用PBS冲洗2次,加入0.25%胰蛋白酶消化、传代.
-
不同培养方法对人脐带间充质干细胞的影响
背景:脐带干细胞培养主要来源于足月儿,常用培养方法包括组织贴块法、胰酶消化法,但是对于不同培养方法对脐带间充质干细胞的分离结果尚存在较大的争议。目的:观察不同培养方法对脐带间充质干细胞的影响。方法:取30例足月妊娠剖宫产健康胎儿脐带,采用组织贴壁法和胶原酶-胰酶消化法进行培养,制备细胞悬液,获得人脐带间充质干细胞进行分离培养,在流式细胞仪上测定细胞生长情况。结果与结论:①细胞融合情况:脐带经过组织贴壁法原代培养5d后,细胞开始从脐带组织分离,呈现梭形,培养10 d后细胞融合达到80%,脐带经胶原酶-胰酶消化法培养5 d后,可见少量形态各异的贴壁细胞分布,纤维样细胞培养2周后培养融合才达到80%;②细胞生长情况:两种不同培养方法分离出的脐带间充质干细胞生长情况差异无显著性意义(P>0.05);③细胞鉴定结果:两种培养方法培养的细胞CD13,CD29,CD44及CD105标志物表达均为阳性。④结果说明:人脐带间充质干细胞采用组织贴壁原代培养法培养成功率高,优于胶原酶-胰酶消化法培养。
-
狂犬病毒.CTN-1株在Vero细胞上的适感染量
我们对狂犬病毒CTN-1株在Vero细胞上的适感染量进行了试验[3],现将结果报道如下。 将已知病毒数量的狂犬病毒CTN-1株与精确计数的Ve-ro细胞充分混匀,放37℃温室吸附0.5h后,用细胞生长液稀至0.01MOI、O.1MOI、1.0MOI、10.0MOI四种病毒感染量。不同感染量的细胞悬液分别放入3立转瓶,置37℃恒温室旋转培养。72h待细胞长成片后浸泡6h洗换,置33℃恒温室继续旋转培养7d、11d、14d连续收2~3次,分别进行毒力滴定。再将不同MOI的收获液分别合并,用30万相对分子质量滤板超滤浓缩30~40倍,加入终浓度为0.025%β丙内酯灭活,经柱层析纯化制得4批疫苗,待检效力。 0.01、O.1、1.0MOI三种感染量的细胞培养瓶细胞生长卅以上都是100%,10.0MOI的细胞培养瓶细胞生长卅以上占50%,后者与前三者比较差异有显著意义
-
半透连通式细胞隔离联合培养瓶的研制
在体情况下,细胞并非孤立地去完成其功能,而是受邻近组织细胞分泌的细胞因子的调控及细胞间的相互作用和神经调节机制的影响.因此,单一一种细胞的培养加干预下所得出的结果,不能完全反映细胞在体情况.许多以往的实验结果也证实这一点,有些甚至得出相反的结果.
-
多细胞相互作用培养的简易方法
在基因治疗研究中为研究转染外源基因的细胞对机体其他细胞的影响,目前生物学研究中常将不同种类的细胞在一起联合培养(co-culture),以模拟基因治疗在体内的作用环境[1],传统的方法是使用TRANSWELL培养瓶,利用生物半透膜将不同细胞隔开分别培养[2],该方法具有培养瓶价格过于昂贵、半透膜之间存在一定浓度差不利于细胞间相互作用[3]、TRANSWELL培养瓶结构复杂、瓶口相对较小,细胞收集困难等缺点.笔者在实验中利用一些细胞贴壁的特性将其中一种细胞先爬在载玻片上,再与培养在培养皿中的另一种细胞混合培养,有效地克服了以上缺点.现以NIH3T3细胞与转入pEGFP-C3-PENK真核载体的COS-7细胞为例共同培养加以说明.
-
产前诊断中羊水细胞培养方法的研究
目的:探讨产前诊断中羊水细胞培养方法及不同羊水量对培养结果的影响.方法:155例羊水标本,以不同羊水量分为两组,分别以平皿盖玻片法和培养瓶法进行培养,比较两种培养方及不同羊水量的培养结果.结果:平皿盖玻片联合培养瓶法培养一次成功并获满意核型151倒,成功率97.4%;两种培养方法比较,两组中均以平皿盖玻片法成功率高于培养瓶法;平皿盖玻片法6~8 mL与15~20 mL羊水的培养成功率无显著差异.结论:羊水细胞培养中,平皿盖玻片法优于培养规法,前者具有成功率高、收获时间早、容易区分真假嵌合型的优点,更适用于羊水量少、孕周偏大者;产前诊断中推荐以培养瓶法联合平皿盖玻片法行羊水细胞培养.