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同胞兄弟同患Klinefelter综合征
先证者男,33岁,结婚4年不育就诊.体格检查:体型瘦长,身高1.81 m,姿态似女性,四肢细长,肩部较窄,骨盆类似女性,皮下脂肪多,肌肉不发达,皮肤细腻.男性第二性征发育差,平日少语,声音细高,喉结不明显,胡须及体毛稀疏,乳房轻度发育,阴毛呈女性分布,睾丸小而硬,性欲低下,精液分析无精子.细胞遗传学检查:外周血常规培养,G显带,计数30个分裂相,分析5个核型,核型为47,XXY,诊断为克氏综合征.
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加强结核病实验室诊断和耐药性检测新技术的研究和应用
结核病实验室诊断和耐药性检测技术研究一直是国内外同道关注的焦点内容[1].但是现行的结核病细菌学涂片检查敏感性低,常规培养需4~8周,快速仪器培养法也需2~6周,远不能满足临床快速诊断的需求.
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人骨肉瘤细胞系OS-732与血管生成的相关作用
一、材料与方法 1.细胞株和细胞培养:人骨肉瘤细胞株OS-732, 购自北京积水潭医院骨科实验室,常规培养于含10%新生小牛血清的RPMI-1640培养液中。 2.鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)制备及瘤细胞接种:选取孵育至9 d的胚蛋,参考付生法[1]的方法制备CAM,选择近胚头1 cm处的两条前卵黄静脉间的相对无血管区接种对数生长期OS-732细胞,每只5×106/100 μl,共接种10只。另10只设为空白对照组。于接种第2天至接种第9天在解剖显微镜下逐日观察接种区5 mm范围内血管数目及形态学变化。
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运用DNA测序技术提高不常见菌的鉴定水平
临床微生物室的一项重要任务是对感染性疾病进行病原学诊断,同时为临床提供正确的药敏结果.及时、准确的病原学诊断能够帮助临床选择合适的抗感染药物,降低病死率,缩短住院时间.但是目前常规病原学检测手段远不能满足临床需求,主要受限于以下因素:(1)常规培养和药敏试验至少需要48 h,对于分枝杆菌、厌氧菌等,需要更长时间;(2)广谱抗菌药物的使用极大地降低了培养的阳性率;(3)许多苛养菌和不常见菌,体外常规培养困难;(4)基于生化谱型的自动化鉴定系统或其他表型方法对于特殊或不典型谱型的菌或数据库无法覆盖的菌,常常无法准确鉴定到种.
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苦参碱对L-02人肝细胞系液氮下冻存复苏后功能的影响
目的:了解苦参碱(matrine)对L-02人肝细胞系超低温冻存复苏后功能的影响,探索一种合适肝细胞保存的方法.方法:常规培养的L-02人细胞系用胰酶消化后,将收集的L-02人细胞系分别以六种不同的冻存液(二甲基亚砜、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+0.2 mg/L苦参碱、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+2 mg/L苦参碱、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+6 mg/L苦参碱、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+10 mg/L苦参碱)在液氮中冷冻保存1 mo.1 mo后快速复苏L-02人肝细胞系,做存活率、形态学及功能检测.结果:含有不同浓度的苦参碱冻存液保存的L-02人肝细胞系其活率、形态学及功能表现均有所不同,其中单用二甲基亚砜(DMSO)的冻存液效果差;二甲基亚砜+低分子右旋糖苷(Detrax-40)+6 mg/L苦参碱冻存液效果佳.二甲基亚砜+低分子右旋糖苷(Detrax-40)+6 mg/L苦参碱冻存液组复苏后L-02人肝细胞系存活率为(89.6±3.4%),细胞形态与未冻存组相似,其尿素及白蛋白分泌量与其他冻存液组有显著差异(P<0.05).结论:二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+6 mg/L苦参碱联合冻存液显著提高了L-02人肝细胞系的冻存质量.
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干扰素-α对人肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用
目的:研究人干扰素-α对人肝癌细胞系BEL-7402细胞增殖及侵袭的抑制作用.方法:常规培养的BEL-7402细胞加入人干扰素-α(1×106U/L)共同孵育24 h后,以MTT法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响;Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化;明胶酶谱法检测肝癌细胞基质金属蛋白酶的变化.免疫组化法检测肿瘤细胞增殖核抗原的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡.结果:人干扰素-α可以明显抑制体外BEL-7402细胞的增殖(抑制率为20.2%);干扰素-α作用后在Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显减少(抑制率为23.9%);肝癌细胞基质金属蛋白酶的分泌没有明显变化.干扰素-α组肿瘤细胞增殖核抗原的表达明显下降,凋亡细胞数明显增加.结论:低剂量的干扰素-α可以直接抑制肝癌细胞株BEL-7402的增殖,对BEL-7402细胞的侵袭有明显的抑制作用;可以抑制肿瘤细胞增殖核抗原的表达并诱导细胞凋亡.
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大鼠骨髓间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增生的关系
目的:探索成体大鼠的骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养方法,观察采用不同的换液频度与细胞增生和生长的关系,为其应用提供实验依据.方法:从大鼠股骨获取骨髓,采用梯度离心的方法进行分离,在含10 mL/L胎牛血清的DMEM中常规培养,以MTT法检测不同的时间换液时细胞的生长曲线,并用碱性磷酸酶(AKP)检测的方法对分离的细胞进行鉴定.结果:采用梯度离心方法分离的骨髓间质干细胞的纯度较高,细胞活性佳,AKP染色为强阴性.首次换液后,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生,原代长满培养瓶底比每隔2-3 d换液一次平均提前2 d.结论采用梯度离心的方法分离可获得纯度较高的骨髓间质干细胞,是简单易行的分离方法,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生和形成形态均一的细胞集落.
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非典型病原体的实验室检测技术及其临床应用前景
非典型病原体包括肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌等,在社区获得性肺炎(community-acquired pneumonias,CAP)中占有重要的地位,其病原学诊断对于临床非典型肺炎患者的治疗和预后至关重要.目前,非典型病原体的检测存在许多局限性:(1)从非典型肺炎患者获得合格的检测标本较困难;(2)常规培养检测非典型病原体的临床微生物室还不常见;(3)目前非典型病原体检测技术的敏感度和特异度不够理想.尽管如此,分子生物学等检测技术已越来越多地应用于非典型病原体的病原学诊断,这给临床诊断和治疗带来了希望.
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尼古丁诱导人气道成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化
吸烟是COPD的主要致病因素,气道重塑是COPD患者出现持续气流受限的主要病理基础.尼古丁占烟草生物碱总量的95%以上,尼古丁对COPD发病,特别是对气道重塑有着重要影响.我们以原代培养的人气道上皮下成纤维细胞为研究对象,观察尼古丁对成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的影响,以探讨尼古丁在COPD气道重塑中的作用.材料与方法癌周正常肺组织取自广州医学院第一附属医院胸外科2010年1-6月手术治疗的40~60岁肺癌患者,进行细胞原代培养及鉴定[1],分离正常支气管组织后用酶消化法及差速贴壁法获得支气管成纤维细胞,用含有100 U/L青霉素、100 mg/L链霉素和10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,置于95%空气、5% CO2和37℃孵育箱中常规培养及传代.
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定期进行常规环境卫生学监测的辩证思考与探索
目的 对医院空气、环境物体表面等进行采样和微生物培养是沿袭多年的做法,随着国外对此做法的叫停,我国对于常规的环境卫生学监测一直也存在争议.为此,SIFIC论坛组织专家对“定期进行常规空气物表的环境卫生学监测有无必要”进行了探讨.分别从规范标准、环境卫生监测与医院感染的关系、监测结果对临床工作有无意义等方面论证其必要性.本文对正反双方的观点进行了整理,阐述了常规环境卫生学监测的利弊及其沿革,对于这一做法的发展方向需要更多的循证研究加以思考和探索.
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t(1;21)伴不孕一例
患者女,30岁,因婚后8年不孕就诊。查体:身高171 cm,体重61 kg,表型、智力正常,妇科检查正常。实验室检查:肝功能、肾功能、电解质正常。甲状腺功能正常。血清内分泌激素:促卵泡生成激素(FSH):12.6 mIU/ml(正常值:1.4~116.3 mIU/ml),促黄体生成素(LH):40.6 mIU/ml(正常值:0.7~76.3 mIU/ml),孕酮(progesterone):32.4 nmol/L(正常值:7.5~98.3 nmol/L),雌二醇(E2):102.1 pg/ml(正常值:19~528 pg/ml),睾酮(testosterone):12.4 ng/dl(正常值:14~827 ng/dl)。细胞遗传学检查:取外周血常规培养,染色体制备,G显带分析,患者核型为:46,XX,t(1;21)(p34;q22)46,XX,t(1;21)(1qter→1P34∷21q22→21pter;21qter→21q22∷1p34→1qter)。患者系第2胎足月顺产,其母生育2胎,第一胎为男性,已正常生育。其父母、兄长表型均正常,父母非近亲婚配,家族史无特殊。其丈夫、父母、兄长核型均正常。
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支气管肺泡灌洗法在肺部厌氧菌感染诊断上的应用
肺部感染常有厌氧菌和需氧菌混合感染,但常规取材法做厌氧菌培养检出率低.我们采用纤支镜导管支气管肺泡灌洗法(FBCBAL)[1,2],对55例常规培养无致病菌生长的肺部感染患者,进行厌氧和需氧菌培养,提高了检出率,现报道如下.
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耐多药结核分支杆菌临床分离株吡嗪酰胺耐药基因pncA的检测
本文对95株耐多药结核分支杆菌(MTB)临床分离株应用BACTEC-460培养系统进行结核分支杆菌常规培养和药敏检测,聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SS-CP)检测其pncA基因,旨在了解耐多药结核分支杆菌PZA耐药基因pncA的突变情况,探讨其与耐吡嗪酰胺(PZA)之间的关系.从而探讨建立新的、快速、有效的结核分支杆菌药敏检测方法,以弥补常规药敏试验的不足.
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耐多药结核分支杆菌临床分离株吡嗪酰胺耐药基因pncA的检测
本文对95株耐多药结核分支杆菌(MTB)临床分离株应用BACTEC-460培养系统进行结核分支杆菌常规培养和药敏检测,聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SS-CP)检测其pncA基因,旨在了解耐多药结核分支杆菌PZA耐药基因pncA的突变情况,探讨其与耐吡嗪酰胺(PZA)之间的关系.从而探讨建立新的、快速、有效的结核分支杆菌药敏检测方法,以弥补常规药敏试验的不足.
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O1群霍乱弧菌胶体金法快速检测
目的 了解胶体金法检测O1群霍乱弧菌的特异性、灵敏度和实用性.方法 取患者粪便标本,先用碱性蛋白胨水35℃增菌6 h,然后用胶体金法进行检测,同时作霍乱弧菌常规培养,培养出细菌后用血清凝集法作为鉴别诊断O1群霍乱弧菌的金标准,用统计学方法对胶体金法诊断试验的评价指标进行计算..结果 700份样本中,常规法培养出O1霍乱弧菌105株,胶体金法试验阳性108株,经χ2检验,差异无统计学意义(χ2=0.24,P>0.05),表明胶体金法检测O1群霍乱弧菌与常规培养法检测结果之间的差异无统计学意义.胶体金法检测O1群霍乱弧菌诊塑试验的灵敏度为93.33%,特异性为98.32%,阳性预测值为90.74%,阴性预测值为97.18%,假阴性率为1.68%,假阳性率为6.67%.结论 胶体金法检测O1群霍乱弧菌特异性高(98.32%),灵敏度好,与常规培养法的一致性也较高,在快速检测O1群霍乱弧菌中有一定应用价值.
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染色体核型异常5例
1病例报告例1女,1天,患儿出生后发现具有21三体面容.父母身体健康,无近亲结婚及遗传史.外周血常规培养,制备染色体标本,G显带分析,染色体核型为47,XX,+der(21).父母拒绝做染色体检查.例2男,6个月,因智力低下就诊.查体:患儿具有典型的21三体面容.父母身体健康,母亲年龄39岁.外周血常规培养,制备染色体标本,G显带分析,染色体核型为46,XY,-21,+rob(21;21).父母拒绝做染色体检查.例3女,28岁,结婚3年不孕来我院检查.夫妇表型智力正常,身体健康.无有毒物及药物接触史.外周血常规培养,制备染色体标本,G显带分析,染色体核型为46,XX,15ps+.丈夫染色体核型正常.
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一种快速诊断泌尿系感染L型细菌的改良细胞壁染色法
目前在泌尿系感染中,尤其是在反复再发的泌尿系感染患者的中段尿标本中,有时常规培养无细菌生长但可分离出L型细菌.作为临床微生物检验中的金方法L型细菌培养时间比较长,而且需要特殊培养基和气体环境,给快速诊断带来困难.本方法旨在通过形态学观察进行快速诊断,提高诊断速度,为临床治疗争取时间.
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加做红细胞裂解培养能提高细菌L型检出率
近年来我们对败血症患者作红细胞免疫与血沉时,发现部分血沉快的患者血片中红细胞上有L型粘附,同时也常遇到临床疑为败血症,血增菌培养长不出细菌,甚至高渗增菌也培养不出,考虑到患者血液中可能有抗菌物质,抗体等影响细菌生长.为此我们对败血症与不明原因发热的患者在进行常规培养及细菌L型培养的同时加作红细胞稀释裂解后作L型培养,以了解后一种方法是否能提高检出率.
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基于核糖体RNA的分子生物学技术在肠道菌群分析中的应用
构成肠道微生态环境的菌群包括十几个菌属中的400~500个菌种的细菌.传统的肠道菌群分析方法,包括选择性培养计数、显微镜细菌形态观察、纯种细菌分离和生理生化鉴定等.但所需时间长、费用高、操作烦琐、敏感度低,且需要预先知晓该细菌的营养及生长要求.此外,有相当一部分细菌无法用常规培养检出,且基于表型的细菌分类及鉴定并不是总能得到明确的结果.随着分子生物学技术的发展及对核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)研究的深入,国内外学者已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗的从分子水平来检测细菌的新方法,使一些原本无法培养的细菌能被检测,现拟就有关方面的基础及应用研究进展做一综述.
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人胃腺癌分化相关基因的克隆与鉴定
差异显示技术可用于研究多种组织中mRNA的表达差异.荧光差异显示技术(FDD)是在放射性差异显示技术基础上发展起来的一种新的识别基因差异表达的方法,我们使用此方法用来筛选与胃癌分化过程中相关表达的基因.材料与方法一、细胞系人胃腺癌MKN-28(高分化)细胞,MKN-45(低分化)细胞,购自日本Riken Cell Bank(RCB),RPMI 1640,10%FBS常规培养.