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器官培养法保存人角膜
器官培养是欧洲眼库保存角膜的主要方法,它可以保存角膜活性达数周,并且可以降低感染率,临床应用效果良好.本文就器官培养保存角膜的方法、临床应用效果及保存角膜的生理、病理变化作一综述.
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两种新型无血清培养基器官培养保存兔角膜内皮细胞活性的实验研究
目的 研究两种新型培养基-内皮细胞培养基(ECM)和无动物成分培养基(ACF)在无血清器官培养法保存角膜内皮细胞活性方面的效果。方法 将64枚兔角膜平均分为4份,分别密闭保存于ECM+ 2％胎牛血清(FBS)、ECM和ACF等4种不同的培养基中4周,再以葡聚糖T500脱水2d。伊格尔低基础培养基(MEM)作对照组。检测保存前后角膜内皮细胞密度、角膜厚度、内皮层中肌动蛋白微丝(F-actin)的表达和透射电镜下内皮细胞超微结构的变化。结果 保存结束后,ECM+ 2％ FBS组的兔角膜内皮细胞密度高(2123±240)个/mm2,ECM和ACF组结果与其接近,内皮细胞死亡率也较低,对照组内皮细胞密度低( 1732±144)个/mm2,3个实验组与对照组间差异有统计学意义(F=23.180,P=0.000)。免疫组织化学染色显示F-actin在兔角膜内皮层成功表达。WB半定量检测表明F-actin蛋白在各组角膜内皮层的表达趋势与内皮细胞密度计数结果一致,3个实验组与对照组间差异有统计学意义(F= 159.876,P=0.000)。3个实验组内皮细胞的超微结构与正常角膜区别较小。结论 在器官培养法保存过程中,无血清的ECM和ACF培养基可以较传统MEM培养基更好地保持角膜内皮细胞的活性和屏障功能,在无血清器官培养保存角膜方面具有应用前景。
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自行设计角膜培养瓶保存角膜的实验研究
器官培养法保存角膜是角膜供体材料保存的主要方法之一,已在欧美国家许多眼库广泛应用[1-3].传统的保存方法是利用缝线连接角膜片和硅胶瓶盖,使角膜片悬垂在100 ml输液玻璃瓶中[4](图1).此法存在操作复杂、易污染及保存期间不能动态观察角膜质量等缺点.本研究采用新设计的角膜培养瓶,对角膜进行培养保存,取得了良好的效果.
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性分化异常细胞遗传学分析(附40例报告)
近年来，由于细胞遗传学、h-r抗原检查法、组织器官培养法、γ探针分子 水平检测等方法的改进，使诊断及预测性分化异常患者有无性腺癌变有了可能。性分化异 常并 不少见，若将性别判定错误，不仅是个人问题，也是一个社会问题，因此早期正确 诊断，以便采取必要措施，本文作者检测性分化异常患者40例，现分析如下。 1 检测方法 常规外周血淋巴细胞培养、制片、胰酶G显带，每例计数3 0个分裂相，分析3个核型。如为嵌合型，则计数增加至60～100个分裂相，分析6～10个核型 。 2 结 果 40例受检患者中，Turner氏综合征12例；混合型性腺发育不全 伴 精原细胞癌1例；男性假两性畸形21例，其中包括睾丸女性化综合征2例，核型46，XY性腺 发育不全症2例；女性假两性畸形5例；46，XX男性综合征1例。
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无动物成分器官培养法保存角膜内皮细胞活性的实验研究
目的 探讨无动物成分(ACF)器官培养保存角膜内皮细胞活性方面的效果.方法 将Wistar大鼠角膜16只密闭保存于ACF中4周,葡聚糖T500脱水2 d,作为ACF组.以常规含2%胎牛血清(FBS)的MEM基础培养基组作为对照组.保存结束,计数角膜内皮细胞密度(ECD),免疫组织化学染色法和RT-PCR法检测大鼠角膜内皮层中胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)的表达水平,以评估内皮细胞活性和细胞间紧密连接的屏障功能.结果 保存结束后,对照组大鼠角膜的ECD值仅为(1875±162)个/mm2,ACF组则高达(2143±169)个/mm2,两组间比较差异显著(P=0.006).角膜冰冻切片显示ZO-1在保存后大鼠内皮层成功表达.RT-PCR检测表明ZO-1mRNA在ACF组的表达水平高于对照组.结论 ACF器官培养法保存角膜可以更好地保持内皮细胞的活性和紧密连接的屏障功能,在无血清器官培养保存角膜方面具有良好的应用前景.
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无血清器官培养法保存大鼠角膜内皮细胞的活性
目的:研究两种新型培养基-内皮细胞培养基(endothelial cell medium,ECM)和无动物成分培养基(animal compound free medium,ACF)在无血清器官培养法保存角膜内皮细胞活性方面的应用效果.方法:将大鼠角膜密闭保存于ECM和ACF培养基中4wk,再经葡聚糖T500脱水2d.以含低浓度牛血清的MEM基础培养基作为对照.计数保存前后角膜内皮细胞密度,检测保存结束大鼠角膜内皮层中胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)的表达水平,评估内皮细胞层的屏障功能.结果:保存结束后,MEM+20mL/L FBS对照组大鼠的角膜内皮细胞密度值低,ECM+20mL/L FBS组则高达2 250±202个/mm2,ECM和ACF组结果与ECM+20mL/L FBS组接近,细胞死亡率也较低,组间差异有统计学意义(F=28.965,P=0.000).冰冻切片显示ZO-1在保存后大鼠角膜内皮层成功表达.RT-PCR检测表明ZO-1mRNA在各组的表达趋势与内皮细胞密度结果一致(F=592.751,P=0.000).结论:无血清ECM和ACF培养基可以很好地保持器官培养法保存角膜内皮细胞的活性和紧密连接的屏障功能.
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羟乙基淀粉130／0．4对器官培养法保存兔角膜的脱水作用
目的：研究羟乙基淀粉的新剂型HES 130/0．4对器官培养保存角膜的持续脱水效果。
方法：20对配对兔角膜，一半于含10％ HES 130/0．4的ACF培养液中保存28 d作为实验组，不再单独脱水；另一半于ACF培养液中保存28 d后再葡聚糖T500脱水48 h作为对照组。内皮细胞活性和植片质量评估指标包括：内皮细胞计数、角膜厚度和含水量、角膜透明度和后弹力层皱褶程度、内皮层中肌动蛋白微丝（ filament actin，F-actin）的表达，及透射电镜下内皮细胞超微结构的变化。
结果：保存结束时，实验组植片明显较薄，角膜透明度和皱褶程度也优于对照组，内皮细胞密度为2371±159个m/m 2。对照组继续脱水后，角膜厚度、含水量和透明度与实验组间差别变小，内皮细胞密度却降至2138±182个/mm2。免疫印迹法证实F-actin在两组内皮层都有表达，实验组的F-actin表达水平更高。电镜下实验组的细胞超微结构改变较小。
结论：HES 130/0．4的细胞毒性小，可成为器官保存液中的持续添加组分，不仅避免角膜过度水肿，还简化了保存程序，减轻了感染风险，有希望成为新型角膜脱水剂。
