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生物医学检测的PCR技术及其应用
聚合酶链反应或多聚酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)检测技术,又称体外基因扩增技术,早由美国Cetus公司的Kary Mullis及其同事于1985年发现并研究成功.它是通过聚合酶促寡核苷酸引物的延长,反复循环,使目的DNA成指数扩增,是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法,也是体外酶促合成特异DNA片段的新方法.经过PCR过程,可在数小时内使几个拷贝的DNA序列扩增107-109倍.它已广泛应用于基因分离、基因克隆、核酸序列分析和测序,应用于研究基因表达和调控、基因多态性分析以及探讨基因与疾病等生物医学体外检测的各个领域.
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采用康宁 HYPERFlask?细胞培养瓶快速扩增人体脂肪干细胞
人脂肪干细胞(hASCs)是一种丰富、易得的多能成体干细胞[1]。尽管我们可获取大量吸脂术后的脂肪,但是细胞治疗所需的大量未分化存活细胞仍需要通过高效的体外扩增方法才能得到。例如,在一项旨在改善肌肉萎缩症,并以小鼠为模型的治疗实验中,我们在每月一次注射106个细胞时得到了阳性结果[2]。如果我们将其应用于人体,一个体重60 kg的人每月大约需要3×109个干细胞。我们试验了多种体外扩增方案,采用康宁 HYPERFlask?细胞培养瓶,我们能够生产大量用于研究的间充质干细胞,并开发出面向未来的细胞治疗手段。
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糖尿病:诊断与治疗的新进展
糖尿病从20世纪后期开始迅猛流行,这种状况与社会行为学、遗传学等诸多因素的综合影响相关,已经成为公共健康卫生重要的挑战之一.1型糖尿病的发病率增长缓慢,仅占美国糖尿病人口的不足5%,而2型糖尿病才是糖尿病大军快速扩增的主力.无论是从美国还是全球来看,2型糖尿病都占了糖尿病人群的绝大多数,例如美国有2800万人患有2型糖尿病,糖尿病前期人群则超过8000万,而全球估计有超过3.5亿人患有2型糖尿病.
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扬长避短的新一代长效胰岛素类似物——地特胰岛素
引言目前在全世界范围内,2型糖尿病大军都在快速扩增.我国2型糖尿病患者人数已逾4千万,形势非常严峻.对于2型糖尿病的治疗来说,医生通常都是先选择生活方式干预和口服降糖药.
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简单快速扩增获取γδT细胞的方法
近年来的研究发现, γδT细胞在机体的抗感染、抗肿瘤及免疫调节等方面具有重要作用.过去用流式细胞仪或磁性细胞分离技术来分离γδT细胞,不仅需要大量的外周血,而且所需仪器设备昂贵,操作复杂.我们用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)刺激外周血淋巴细胞进行快速扩增,结果短期内可获得大量的γδT细胞,现介绍如下.
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临床基因诊断实验室的管理
一技术背景在基因诊断技术发展史中核酸分子杂交发展早,于1961年开始研究.经典的方法是Southern印迹法,主要用于DNA的检测;随后又发展出了Northern印迹法(检测RNA)和斑点杂交法等.它是直接对样品中靶序列的测定.杂交法灵敏度不够,据报道敏感的核酸探针仅能检出103~104拷贝的靶分子,而多数临床标本中靶分子量远低于此限.1980年代中期,以PCR技术为主的体外核酸扩增技术的发展,使低拷贝临床标本的检测成为可能.PCR能使样品中靶序列的拷贝数特异性地快速扩增105~107倍,将检测阈值降至1~10拷贝数,大大提高了杂交检测的灵敏度.
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PCR技术在放射生物学中的应用
1 PCR仪的主要特点PCR技术具有高效、灵敏,特异性强,应用范围广等特点.DNA序列的快速扩增使在DNA水平上进行大量的种群研究成为可能.单链扩增对几十或几百个个体进行快速测序而不经过以前所需的繁琐的克隆步骤.一旦得到了一组具代表性的庄到数据,可用更方便且简单的分析方法.来获得等位基因的序刿数据.对分析来说,传统分子技术所需的组织样品用量相对较多,尤其是许多无脊椎动物,它们对于进行分子检测所用的一般操作方法来讲太小.因此,对于小生物、共生生物或那些在培养基中不易生长的生物个体的直接分析是困难的.
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噬菌体基因工程抗体的制备与修饰
20世纪90年代兴起的噬菌体抗体库技术代表了当今基因工程抗体制备的前沿技术,PCR快速扩增可变区基因、噬菌体表面呈现技术(phage surface display)和大肠杆菌分泌有结合功能的免疫球蛋白分子片段的成功是该技术得以发展的三大基石[1-3].1989年,Ward首次克隆了VH基因库[1];同年,Huse[3]首次构建了Fab抗体库,并用标记抗原筛选特异性抗体获得成功,此举开创了用噬菌体抗体库筛选单克隆抗体的先河.
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模板制备方法对聚合酶链反应检测沙眼衣原体结果的影响
沙眼衣原体(Ct)是性传播疾病重要的病原体之一,感染后可以不出现症状或无特异的临床症状,因此需要实验室检出病原体方能明确诊断.聚合酶链反应(PCR)、连接酶链反应(LCR)等核酸扩增方法可快速扩增靶DNA,为检测泌尿生殖道沙眼衣原体提供了一种敏感、特异的方法[1].但是,在各种临床标本中,经常存在核酸扩增反应的抑制物,可导致核酸扩增失败而出现假阴性结果[2].因此,标本处理方法能否有效去除核酸扩增反应抑制物,是影响咒R测定准确性的关键因素之一.