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CEA、AFP、TPA及HBsAg联检在肝癌诊断中的意义
肝细胞癌(HCC)是常见的肿瘤之一, 甲胎蛋白(AFP)是HCC重要的肿瘤标志物,但其特异性仍有一定局限性[1].癌胚抗原(CEA)、组织多肽抗原(TPA)均可高浓度地存在于多种肿瘤病人的血清中[2,3],乙肝病毒(HBV)是肝细胞癌的重要致癌因子, 它们对HCC的诊断、病情监测均有一定的价值.我们对HCC病人进行了CEA、AFP、TPA及乙肝表面抗原(HBsAg)的联合检测, 分析它们的临床意义,现报道如下.
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严重急性呼吸综合征冠状病毒多肽抗原筛选的研究
严重急性呼吸综合征(SARS)可从SARS病人分泌物中分离出SARS冠状病毒(SARS-CoV).目前检测SARS-CoV方法有三类[1]:分子生物学检测、免疫学检测(抗体检测)和细胞分离培养.本研究用克隆表达的SARS-CoV的各种蛋白,以重组抗原片段检测病人血清中对应抗体,并通过试验筛选出SARS-CoV表面有效性多肽抗原,进行临床研究.
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简单快速扩增获取γδT细胞的方法
近年来的研究发现, γδT细胞在机体的抗感染、抗肿瘤及免疫调节等方面具有重要作用.过去用流式细胞仪或磁性细胞分离技术来分离γδT细胞,不仅需要大量的外周血,而且所需仪器设备昂贵,操作复杂.我们用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)刺激外周血淋巴细胞进行快速扩增,结果短期内可获得大量的γδT细胞,现介绍如下.
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组织多肽抗原的检测及临床价值
本院自1998年4月在国内引进首台德国Byk-Sangtec公司S300全自动开放式免疫发光分析仪( Immunoluminometric assay,LIA),对数10种(Tumor Marker,TM)的临床价值,尤其是对组织多肽抗原(TPA)的临床价值进行了探讨,现报道如下.
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血清TPS与CEA联合检测在肺癌诊断中的价值
肺癌作为肺部恶性肿瘤,发病率呈明显上升,占男性恶性肿瘤第四位,女性恶性肿瘤第五位[1].肺癌的早期发现、早期诊断及早期治疗对提高患者存活率至关重要.为探讨血清组织多肽抗原(TPS)及癌胚抗原(CEA)联合检测对肺癌诊断的临床价值,本文对78例肺癌及肺良性疾病患者进行了上述项目的检测.现报告如下.
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六种肿瘤标志物在早中期食管癌诊断中的价值
食管癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤,但因其早期发生隐匿,待患者自觉有吞咽困难等临床症状时,往往已发展到中晚期,因此探讨食管癌的尽早期诊断相关方法,具有极其重要的临床价值.目前世界上尚无满意的检测方法,就肿瘤标志物方面,国内外主要报导Ft(铁蛋白)、CEA(癌胚抗原)、CA19-9(糖抗原19-9),SA(唾液酸)、S-100(酸性钙结合蛋白)及P53(抑癌基因)等[1,2]在食管癌诊治中的价值,为了进一步探讨不同肿瘤标志物对食管癌,尤其是早中期食管癌诊断的意义,采用德国Byk-Sangtec公司S300全自动免疫发光分析仪(LIA),对糖抗原(CA72-4、CA125、CA19-9)、组织多肽抗原(TPA)、CEA、和Ft六种肿瘤标志物的临床价值进行了探讨,现报道如下.
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类风湿因子阳性血清对酶免法丙肝抗体检测结果影响分析
第二代、第三代丙肝抗体酶免疫试验(抗-HCV EIA)诊断试剂的出现,提高了HCV抗体的检出率.由于现用的试剂盒所用包被抗原为合成多肽抗原和基因工程抗原(包括HCV病毒结构区核心抗原和非结构区抗原),增加了试验的敏感性和特异性.类风湿因子(RF)阳性血清对现用试剂盒是否有干扰,是否造成假阳性结果,为此我们进行了初步检测,结果如下.
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肿瘤标记物联检在肺癌诊断中的价值
我们通过肺癌患者血清肿瘤相关标记物肿癌多肽抗原(tumor polypeptide antigen,TPA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、CA15-3、CEA的检测,以明确它人在肺癌临床诊断中的意义.
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血清CA153,CEA,TPA联检在乳腺癌临床应用中的意义
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,呈逐年增长趋势.早期诊断、治疗是提高生存率的关键,CA153被认为是诊断乳腺癌较灵敏的肿瘤标志物之一,但单项检测CA153往往有一定的局限性.且CA153在乳腺癌的早期敏感性低.而组织多肽抗原(TPA)是存在于胎盘和大部分恶性肿瘤细胞膜和细胞质中的一种单链多肽,在恶性肿瘤患者血清中的检出率可达70%以上,TPA与CEA同时检测可有利于恶性与非恶性乳腺病的鉴别诊断.我们对TPA、CA153及CEA进行联检,探讨其在乳腺癌中的诊断及疗效评价价值,现将结果报告如下.
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多肽抗原检测淋球菌抗体ELISA法的建立及应用
目的建立多肽抗原检测淋球菌抗体的ELISA方法.方法用固相合成肽方法合成2个淋球菌多肽抗原,建立测定淋球菌抗体的酶免疫测定,并对89份正常人血清和47份淋病患者血清进行检测.结果批内测定变异系数为7.1%;批间测定变异系数为10.7%.与金标记的试剂盒平行检测临床标本符合性良好. 结论该方法操作简单,试剂稳定,已制备成试剂盒在国内应用,反映良好.
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肺癌、贲门癌及食管癌外周血的免疫调节因子及相关抗原自身抗体表达研究
目的:肺癌、贲门癌、食管癌是胸部主要肿瘤,具有高发病率和死亡率的特点,早期发现和治疗肺癌、贲门癌及食管癌意义重大,本研究旨在探讨免疫调节分子及肿瘤相关抗体在肿瘤发病中的作用及相互影响,为发现肿瘤早期诊断的标志物提供理论依据。方法本研究中,选择7个分子(含3个免疫调节因子)及4个肿瘤相关抗原。使用生物信息学数据库对蛋白质结构和性质进行综合分析,并通过生物信息学软件对7个分子的多肽抗原片段进行设计。采用 ELISA 法对食管癌患者检测外周血及非小细胞肺癌患者多肽抗原的抗体水平,选择健康体检者为对照组,采用对照组超过250例健康体检者的混合血作为质控样本。使用SPSS18.0数据处理软件对相关数据进行统计学分析,卡方检验,(P <0.05)具有统计学意义。结果与健康体检者水平相比,肺腺癌及肺鳞癌外周血 anti-CD25IgG 水平存在统计学意义(P <0.05),对照组男女健康体检者 anti-CD25IgG 水平明显低于肺癌患者。anti-CD25IgG 检测中,ESCC 及 NSCLC 患者阳性率较对照组明显偏高。实验结果表明,诊断早期 ESCC 和 NSCLC,anti-CD25IgG 水平有助于提高其诊断性。抗体检测:肺癌、贲门癌及食管癌患者 anti-P16IgG 在检测中,其水平是明显高于对照组的,但其临床诊断意义不明显。结论在肺癌、贲门癌及食管癌患者外周血中,anti-CD25IgG 及anti-FOXP3IgG 能为临床诊断提供依据;肺癌、贲门癌及食管癌与anti-P16IgG 水平的改变具有相关性,但其阳性率不明显,其临床诊断价值有待深入研究。
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汉滩病毒核蛋白羧基端多肽原核表达载体的构建及表达
本文为建立分型检测方法,探讨了汉滩病毒(Hantaan virus, HTNV)核蛋白羧基端多肽的抗原性.首先,分别构建编码HTNV核蛋白及其羧基端多肽的原核表达载体pRSET A-S、pRSET A-S-C;然后,将其转化入表达菌BL21(DE3)pLySs诱导表达,采用SDS-PAGE、Western-blot进行鉴定.我们成功构建了pRSET A-S及pRSET A-S-C原核表达载体.SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达,呈不溶状态,Western-blot显现目的蛋白具有良好的抗原性.为大量制备分型用核蛋白多肽抗原创造了条件.
关键词: 汉滩病毒(Hantaan virus HTNV) 原核表达 多肽抗原 核蛋白 -
β2糖蛋白1多肽抗体的制备与应用
目的 利用人工合成β2糖蛋白1(β2GP1)多肽制备针对人源、鼠源β2GP1的多克隆抗体,并鉴定抗体的特异性及致病性.方法 应用Fmoc法化学合成β2GP1 N端第35 ~51位氨基酸的多肽,将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联,免疫新西兰大白兔制备抗血清,蛋白G纯化得到抗β2GP1多肽抗体,利用ELISA和Western blot法鉴定其效价和特异性.体外实验使用抗β2GP1多肽抗体/β2GP1复合物刺激C3 H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞一定时间,收集细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR、Western blot法分别检测细胞组织因子(TF) mRNA和蛋白表达;Western blot法检测细胞p38、磷酸化p38、核因子κB p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65表达情况;体内实验采用C3H/HeN小鼠腹腔注射抗β2GP1多肽抗体建立实验性抗磷脂综合征(EAPS)模型,检测小鼠外周血抗β2GP1抗体滴度及部分凝血活酶时间(APTT).结果 化学合成β2GP1多肽的纯度为94%,达到免疫用抗原标准.偶联KLH后免疫新西兰大白兔,其抗血清效价大于1∶32 000.Western blot结果显示抗β2GP1多肽抗体可特异性识别人源和鼠源β2GP1条带,双抗夹心ELISA检测表明该多肽抗体可与β2GP1隐蔽表位特异性结合.体外实验显示抗β2GP1多肽抗体/β2GP1复合物能够增强小鼠腹腔巨噬细胞p38、NF-κB p65磷酸化,诱导细胞TF mRNA及蛋白表达.体内实验成功建立EAPS小鼠模型,小鼠外周血抗β2GP1抗体滴度大于1∶3200,APTT明显缩短.结论 所制备的抗β2GP1多肽抗体可识别人源和鼠源β2GP1分子,能与β2GP1隐蔽抗原特异性结合且具有致病效应.
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RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用
目的: 制备RAI16蛋白的合成肽多克隆抗体, 并进行初步鉴定和应用, 为研究RAI16蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具.方法: 应用Fmoc法化学合成RAI16蛋白N端第44~55位氨基酸的多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的RAI16蛋白的多肽与KLH交联; 皮下注射抗原免疫新西兰纯种大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫组化、 Western blot等初步鉴定和应用.结果: 化学合成RAI16蛋白N端第44~55位氨基酸的多肽, 纯化后多肽纯度为96% , 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价为1∶ 125 000.该多肽抗体可特异识别人脾脏组织中相对分子质量(Mr)约为55 000的RAI16蛋白.结论: 所制备的多克隆抗体能与天然RAI16蛋白发生特异性反应, 可应用于ELISA、免疫组化、免疫沉淀和Western blot等实验, 为确定RAI16蛋白的组织分布和亚细胞定位、研究RAI16蛋白的功能及作用机制提供了重要的实验工具.
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兔抗人CXCR3-B分子N端多肽多克隆抗体的制备与初步应用
目的: 获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽的多克隆抗体, 并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用.方法: 应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的CXCR3-B分子的多肽与KLH交联;皮下注射抗原免疫日本大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、免疫组化等初步鉴定和应用.结果: 分别化学合成CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽, 纯化后多肽纯度分别为98%、 88.54%及80%, 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价分别为1∶ 32 000(0.1 mg/L), 1∶ 4 000(3 mg/L)和1∶ 1 000(10 mg/L).3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中相对分子质量(Mr)约为50的CXCR3-B分子, 相应抗原定位于3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中的血管内皮细胞.结论: 所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和免疫组化等实验, 为确定CXCR3-B分子的组织及细胞分布和定位、寻找CXCR3-B相互作用的分子提供了有力的工具.
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快速测定淋球菌抗体ELISA方法的建立及试剂盒研制
目的 创建一种快速、实用的抗淋球菌抗体检测方法.方法 用固相合成方法合成了2个淋球菌多肽抗原,建立了快速测定淋球菌抗体的ELISA方法,与胶体金免疫的试剂盒对比检测正常人与病人血清标本.结果 快速酶免检测法的批内变异系数为8.3%;批间变异系数为12.9%.多肽抗原包被在酶标板上至少可稳定九个月.与胶体金免疫试剂对比检测血清标本符合率达97.7%.结论 新建方法操作简单、快速、试剂稳定,为临床与研究工作提供了一个新的手段.
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汉滩病毒核蛋白羧基端多肽真核表达载体的构建及其表达产物的鉴定
目的探讨汉滩病毒(HTNV)核蛋白羧基端多肽的抗原性,为建立分型检测方法奠定基础.方法设计并合成S基因编码区及其3端825 bp片段引物,用PCR方法从PBV220-S22原核质粒中扩增出目的片段,应用TA克隆将其插入pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中,并通过脂质体转染至Vero细胞中进行瞬时表达,表达产物用间接免疫荧光法进行鉴定.结果成功构建了pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-C真核表达载体,间接免疫荧光法可检测到真核表达质粒转染的Vero细胞表达的核蛋白羧基端多肽.结论 pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-C真核表达载体有较高的转染效率,能在宿主细胞中表达,为制备分型用核蛋白多肽抗原打下了基础.
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测定血清CA724、CA242及CEA诊断胃癌
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,经过多年的努力,胃癌的合理外科治疗取得了进一步进展[1],但其诊断仍主要依靠钡餐及胃镜等.血清肿瘤标志物(TM)检查诊断消化道肿瘤在国外已广泛使用,日本已将组织多肽抗原(TPA)、CAl99、CA724作为胃癌有诊断价值的标志物[2].