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HAb18G/CD147拮抗肽抗肝癌转移作用的体外实验
目的:筛选获得HAbl8G/CDl47高亲和性拮抗肽中具有体外抗肝癌细胞转移作用的拮抗肽.方法:对于采用HAbl8G/CDl47纯抗原筛选噬菌体随机12肽库所获得的9条高亲和性的12肽(AP-l-AP-9).分别采用:MTT法测定AP-l-Ap-9的对肝癌细胞(HHCC)的直接毒性;明胶酶谱法分析APl-AP-9对基质金属蛋白酶(MMP s)产生及其激活过程的影响;重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭抑制实验测定AP-l-9对肝癌细胞(HHCC)侵袭力的的影响;观察AP-1-AP-9对HHCC与细胞外基质蛋白(Matrigel,FN,LN,CollogenⅣ)、HHCC与间质细胞(成纤维细胞fb)黏附能力;以及APl-9对HHCC运动能力的影响.结果:拮抗肽AP-1-AP-9对HHCC无明显细胞毒性作用;Ap-1,6,9对HHCC刺激fb细胞产生MMP-2其激活过程具有明显的抑制作用;AP-1,3,6,7,8,9对HHCC侵袭力有明显的抑制作用(P<0.05),抑制率分别为78.22%,90.1%,62.83%,56.44%,68.32%和81.19%;9条拮抗肽对HHCC与细胞外基质蛋白Matrigel,FN无明显的抑制作用,但AP-3,9对HHCC与CollogenⅣ,LN的黏附有抑制作用;AP-1,6,9对HHCC与fb细胞之间的黏附有抑制作用;AP-6可抑制HHCC的运动能力,抑制率54%,但统计学上差异无显著性(P>0.05).结论:HAbl8G/CDl47拮抗肽(AP-l-AP-9)对肝癌的侵袭转移相关的多个环节有明显的抑制作用,为研究开发新的抗肿瘤转移多肽药物开辟了新途径.
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利用小鼠感染模型筛选与鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白抗原
目的:利用小鼠感染模型筛选与鉴定幽门螺杆菌SS1株的外膜蛋白抗原.方法:提取SS1株的外膜蛋白进行双向电泳,用幽门螺杆菌感染的小鼠血清作免疫印迹实验,将阳性反应蛋白点进行质谱鉴定分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索.结果:获得32种抗原相关蛋白.通过与已有报道的幽门螺杆菌感染人抗原比较分析,发现大部分典型的保护性抗原在本实验中都可以检测到.结论:幽门螺杆菌感染的小鼠模型适用于人用保护性幽门螺杆菌抗原的筛选;而且此研究中得到的相关抗原蛋白对于寻找与鉴定幽门螺杆菌未知保护性抗原也有参考价值.
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基因组学、蛋白质组学、抗原组学与疫苗的发展
疫苗免疫是机体抵御微生物和寄生虫感染的有效措施,然而还有许多病原体缺乏有效的疫苗,疫苗研究任重而道远.随着许多病原体基因组测序的完成,利用基因组学筛选疫苗抗原显示了强大的优势.同时由于近年来比较基因组学、蛋白质组学、抗原组学等的发展,病原体毒力相关蛋白、分泌性蛋白和膜表面结合蛋白基因可以被分离出来,从而可以更加准确地分析候选抗原,极大地提高了疫苗抗原分析的效率.总之,利用基因组和蛋白质组进行疫苗抗原筛选是疫苗研究的革命,将极大地推动疫苗的研究和开发.
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噬菌体基因工程抗体的制备与修饰
20世纪90年代兴起的噬菌体抗体库技术代表了当今基因工程抗体制备的前沿技术,PCR快速扩增可变区基因、噬菌体表面呈现技术(phage surface display)和大肠杆菌分泌有结合功能的免疫球蛋白分子片段的成功是该技术得以发展的三大基石[1-3].1989年,Ward首次克隆了VH基因库[1];同年,Huse[3]首次构建了Fab抗体库,并用标记抗原筛选特异性抗体获得成功,此举开创了用噬菌体抗体库筛选单克隆抗体的先河.
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Rh阴性献血档案的建立及其意义
在中国汉族人中,由于Rh阴性个体比例较少,只占0.2%~0.5%[1],因而临床Rh阴性患者用血极其困难,为了保证临床用血的需要,我科从1984年6月~2000年5月,对献血者进行了Rh抗原筛选,其中筛选出Rh(D)阴性者13人.1 材料与方法1.1 资料将来我院献血的8 000名汉族献血员全部做D抗原筛选.
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铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究
目的 构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)XN-1的全基因组文库,筛选铜绿假单胞菌新的疫苗候选抗原.方法 提取我国分离的临床PA XN-1菌株全基因组,Sau3A Ⅰ酶切成随机片段后经连接至BamH Ⅰ酶切后的pMal-c5x载体,转化至X-blue获得随机重组子.随机重组子经IPTG诱导后使用溶菌酶裂解,收集含有融合的麦芽糖结合蛋白(MBP)的随机重组子的裂解上清,制成含有PA全基因组的蛋白随机文库.通过ELISA方法分别检测单个随机文库蛋白的免疫反应性.将经典的PA强反应抗原PcrV做为参照,分别计算单个随机抗原的相对反应强度并进行比较.提取反应较强的重组子的质粒,测定DNA序列后进行翻译和比对,得到整个强反应性抗原的氨基酸信息.结果 成功构建PA XN-1的全基因组文库,筛选到强反应性抗原13个,其中4个抗原的反应强度超过PcrV,分别为Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase D、Phosphoenolpyruvate-protein phosphotransferase(PtsP)、Phosphate-starvation-inducible E和Very short patch repair endonuclease.结论 基于高效表达系统的PA全基因组文库构建成功,可用于PA及其它病原的疫苗候选抗原的筛选研究.