吃药,你喝对水了吗?

六类药不要碰热水用白开水送服药物是个常识,大多数人喜欢用50～60摄氏度以上的热水服药.殊不知,部分药品遇热后会发生物理或化学反应,从而影响疗效.1.助消化类如胃蛋白酶合剂、胰蛋白酶、多酶片、酵母片等,均含有助消化的酶类.酶是一种活性蛋白质,遇热后会凝固变性.《中华人民共和国药典临床用药须知》指出“胃蛋白酶遇热不稳定,70摄氏度以上即失效.

胰蛋白酶法提取鱼腥草多糖工艺的优化

目的:正交试验筛选胰蛋白酶提取鱼腥草多糖的佳工艺.方法:对胰蛋白酶添加量、温度、时间等因素采用L9(34)正交试验法,寻求佳提取工艺.结果:佳提取工艺为温度45℃,pH=7,酶加入比例2％,提取时间2.5 h.结论:正交试验法可用于鱼腥草多糖胰蛋白酶提取工艺的优选.

196 菊花中具有抗炎作用的三萜类对胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制活性

大鼠腹膜间皮细胞的原代培养与鉴定

目的:建立简便有效的大鼠腹膜间皮细胞(PMC)的体外培养方法.方法:用0.25%胰蛋白酶-0.16%EDTANa2消化大鼠腹膜组织,细胞悬液经100目筛网滤过后进行培养.用形态学、免疫组化(SP法)鉴定细胞.结果:分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状.电镜下可见丰富的微绒毛和内质网.免疫组化鉴定显示波形蛋白抗原阳性,第8因子、CD45抗原阴性,证实培养的细胞的确是PMC.结论:大鼠腹膜间皮细胞培养成功,该模型可为进一步研究腹腔粘连的防治提供实验基础.

具有蛋白酶抑制剂活性成分中药的筛选

蛋白酶抑制剂(proteinase inhibitor,PI)泛指具有抑制胰蛋白酶活性作用的一类物质,广泛存在于动、植物和微生物中.蛋白酶抑制剂在体内能与相应蛋白酶的活性部位和变构部位结合,抑制酶的催化活性或阻止酶原转化为有活性的酶,使体内蛋白酶抑制剂.蛋白水解酶形成一定的动态平衡,在生物的生理体系以及一系列的生理病理过程中起着关键性的调控作用,是生物体内免疫系统的重要组成部分[1].

胰酶化痰法检测五项肺肿瘤标志物探讨

探讨检测胰酶悬液消化痰液中的五项肺肿瘤标志物在肺癌诊断中的应用.使用胰酶悬液对肺癌、肺部良性病变患者痰标本消化,检测五项肿瘤标志物.结果表明:用pH8的6%胰酶消化痰液,并不影响五项肿瘤标志物测定;肺癌组患者血清和痰液CEA、CA125、CA15-3、CA211和NSE含量高于良性病变组,两组比较有显著性差异(P<0.05);痰液CEA、CA125含量明显高于血清,两组比较有显著性差异(P<0.05).检测痰液CEA、CA125、CA15-3、CA211及NSE含量对诊断肺癌具有一定的临床应用价值,若结合其他诊断方法,将有助于对尚未确诊肺癌患者的进一步诊断.

成年小鼠肺成纤维细胞分离纯化及原代培养

成年小鼠肺成纤维细胞的原代培养是获得肺组织后在体外进行的培养,能反映体内的生长特性,对研究细胞的生长分化及其生理病理变化的机制具有极其重要的价值,具有细胞系所无法比拟的优点.本文主要探讨合理的成年小鼠肺成纤维细胞的分离纯化培养方法及其生长曲线特点.1材料与方法1.1试剂:高糖DMEM(Gibco公司),胎牛血清(杭州天杭公司),胰蛋白酶(Sigma公司),波形蛋白vimentin、α-平滑肌肌动蛋白α-SMA抗体和免疫组化SABC试剂盒(武汉博士德公司).1.2实验动物:清洁级雄性成年昆明小鼠(25±5)g[华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2008-0005].

致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA 克隆与序列分析

应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从吸血24h的致倦库蚊广州株蚊虫总RNA中反转录合成后期胰蛋白酶cDNA第1链.采用自动DNA分析仪进行序列分析,并与其他胰蛋白酶进行同源性比较.结果表明:致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA部分序列分别长216bp、229bp和270bp,命名为Ctry1、Ctry2和Ctrt3.Ctry1和Ctry2均可编码50个氨基酸(1～150bp),氨基酸组成完全相同.Ctry1、Ctry2与致倦库蚊美国株后期胰蛋白酶前体物氨基酸同源性达86%.催化中心位点高度保守(Ser-5),具胰蛋白酶特异位点(G1y-24,Gly-32).而Ctry3可编码76个氨基酸(1～228bp).Ctry3编码的氨基酸与果蝇胰蛋白酶前体物的同源性为68%.催化中心位点高度保守(Ser-5),具胰酶特异位点(Gly-24,Gly-32).以上表明已克隆出致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA.

胰蛋白酶对原头蚴体外培养的作用

目的 观察原头蚴在含不同浓度胰蛋白酶培养液中的存活、生长及其发育情况,为研究细粒棘球绦虫原头蚴发育提供基础资料.方法 采集自然感染细粒棘球蚴的绵羊肝脏,在无菌条件下收集包囊内的原头蚴.将收集到的原头蚴分为6组,其中1～5组为实验组,第6组为空白对照组.在1～5组培养液内分别加入浓度为0.00％、0.25％、0.50％、1.00％和2.00％的胰蛋白酶,并加入0.70％的牛磺酸鹅脱氧胆盐(TCDC),置37℃培养箱中培养.每隔2～3 d观察一次,并取原头蚴经伊红染色后,置于显微镜下计数并计算存活率.另取适量标本于解剖镜下观察虫体活力.结果 在无胰蛋白酶条件下原头蚴平均存活率为98.52％,虫体活力好;在1.00％胰蛋白酶条件下原头蚴平均存活率为92.47％,虫体活力差,部分虫体中颗粒外溢.结论 原头蚴在不同浓度胰蛋白酶作用下,其活力有不同程度的改变,以≤0.50％的胰蛋白酶对原头蚴发育的刺激作用较强,原头蚴对0.50％～1.00％胰蛋白酶的耐受性低.

大鼠肾小球内皮细胞分离培养和鉴定

一、材料和方法1.材料和试剂:(1)材料:SD大鼠1～2月龄,体重50～100 g,雌雄各半,由东南大学医学院实验动物中心提供.Mini MACS免疫磁珠细胞分选仪、磁性分离柱LS 购自Miltenyi Biotec公司.(2)试剂:Ⅳ型胶原酶、内皮细胞生长因子、胰蛋白酶及转铁蛋白均购自Sigma公司,DMEM培养基购自Gibco公司,异硫氰酸荧光素标记的抗CD34-FITC、抗波形蛋白及抗角蛋白均购自Santa Cruz公司,抗FITC免疫磁珠购自Miltenyi Biotec公司.

白蛋白对重症急性胰腺炎大鼠胰蛋白酶脏器损伤的保护性研究

目的 探讨白蛋白对重症急性胰腺炎(SAP)SD大鼠远隔脏器的保护作用及可能机制.方法 105只SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、常规治疗组及白蛋白组.常规治疗组:于建立SAP模型成功30 min后,通过大鼠阴茎背静脉注入乌司他丁1万U/kg,经皮下给药注入奥曲肽25 μg/kg;白蛋白组:于建立SAP模型成功30 min后,在常规治疗组用药的基础上,通过大鼠阴茎背静脉注入5％的人血白蛋白10 ml/kg;假手术组及模型组:于同时间,在同部位,以同方式注入等量生理盐水.于治疗后3h、6h、12 h,采用全自动生化分析仪检测四组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cre)值,运用流式细胞仪检测外周血中脱落的血管内皮细胞(VEC),应用病理学评分对肝、肺、肾脏组织进行病理学评估.结果 与假手术组相比,模型组、常规治疗组、白蛋白组各时间点血清ALT、AST、BUN、Cre、VEC均明显升高,治疗后3h、6h、12 h,白蛋白组血清ALT、AST、BUN、Cre、VEC均低于常规治疗组,两组比较差异均具有统计学意义(均P ＜0.05).与假手术组相比,模型组、常规治疗组、白蛋白组大鼠肝、肺、肾组织病理学评分显著升高,经治疗12 h后白蛋白组肝、肺、肾组织病理学评分均明显低于常规治疗组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 白蛋白能够通过中和SAP时已经入血的胰蛋白酶,降低胰酶对血管内皮细胞的损伤,进而发挥对远隔脏器的保护作用.

胰蛋白酶致大鼠COPD动物模型中动脉血气与SOD及MDA变化的相关性研究

目的 探讨研究胰蛋白酶致大鼠COPD动物模型时动脉血气变化的研究.方法 Wistar大鼠30只随机分为3组.10只为对照组(A组)、10只为模型组(E组)和10只为棉籽油组(C组).一次性大鼠气管内注入猪胰蛋白酶(PPE)构建大鼠肺气肿模型,饲养30 d后处死解剖大鼠,测量大鼠肺组织SOD活力、脂质过氧化物(MDA)含量和测定动脉血气分析,并用统计学方法分析它们之间与动脉血气间的相互关系.结果 E、C组大鼠氧化应激水平均明显大于A组(P＜0.05);E、C组肺组织SOD活力和MDA含量较A组显著升高(均P＜0.05).A组氧分压(PaO2)、动脉血氧饱和度(SaO2)、二氧化碳分压(PaCO2)基本正常;E、C组PaO2、SaO2明显降低,而PaCO2明显升高.肺组织SOD与PaO2呈正相关,肺组织MDA与PaO2呈负相关;肺组织SOD、MDA均与PaCO2不相关.结论 用猪胰蛋白酶制作大鼠COPD模型成功,其氧化应激与动脉血气之间有着密切的相关性,值得在动物COPD实验造模中推广使用.

加贝酯与头孢匹胺钠存在配伍禁忌

我科于2008年8月收治1例胆总管结石行ERCP术病人.在遵医嘱给药过程中,发现一组配伍禁忌,现报道如下.1.临床资料:加贝酯为白色或类白色的疏松块状物或粉末,0.1 g/瓶,由常州金远药业制造有限公司生产.加贝酯是一种非肽类蛋白酶的抑制剂.可抑制胰蛋白酶、激肽释放酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶等蛋白酶的活性,从而制止这些酶所造成的病理变化.

乌司他丁对高龄肺肿瘤手术患者炎性相关细胞因子的影响

乌司他丁(ulinastatin,UTI)是从尿液中分离纯化的一种糖蛋白,能抑制胰蛋白酶、磷脂酶A2、透明质酸酶、弹性蛋白酶等多种水解酶的活性[1],并能抑制细胞因子和炎症介质的释放,对多个系统的脏器功能具有保护作用[2-4];它具有明显的抗炎性递质作用,用于心脏手术可以抑制体外循环引起的炎性细胞因子释放[5,6],但其对肺肿瘤切除术患者细胞因子释放的影响尚无定论.

家猪体外胰蛋白酶消化关节软骨的7.0T磁共振T2弛豫时间图与量化分析

目的 应用超高场7.0T磁共振T2加权成像技术、弛豫时间图和量化分析的方法评价体外胰蛋白酶消化与未消化家猪髌骨软骨T2弛豫时间的改变.方法 选择10头家猪,各取左、右侧髌骨.左侧髌骨10个为实验组,右侧髌骨10个为对照组,分别浸泡于含有胰蛋白酶的PBS溶液及PBS中,4 h后取出.利用7.0T磁共振机,分别采用多回波SE序列进行扫描,获得离体家猪髌骨关节软骨的T2加权图像.用自行编制的软件重构T2弛豫时间图,人工标注感兴趣区,分层定量测定关节软骨的T2值.结果 经酶诱导消化的离体家猪髌骨关节软骨T2W成像清晰,呈分层状表现,对比度好,无异常伪影.对照组与实验组关节软骨T2WI关节软骨未见局部信号异常改变.与对照组比较,实验组软骨全层、表层、中间层T2值差异有统计学意义(P＜0.05),而两者的深层与钙化层差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经胰蛋白酶诱导消化可引起退变软骨T2弛豫时间改变,在软骨的表层及中间层变化明显,提示T2弛豫时间是较敏感、特异的检测指标,可进一步应用于关节软骨退变的早期诊断.

蛋白酶体与冠状动脉粥样硬化性心脏病的研究进展

蛋白酶体(proteasome)由多亚基组成,分布在细胞核和细胞质内,主要由核心颗粒和调节颗粒两部分构成.核心颗粒是蛋白酶体的核心,具有糜蛋白酶样、胰蛋白酶样及胱天蛋白酶样活性,是哺乳动物细胞中主要的中性蛋白水解酶体系.通过泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS),蛋白酶体能精确并有选择性地降解细胞内目的靶蛋白.蛋白酶体的功能不仅限于蛋白质的降解,也参与重要的生物学过程,如炎症、增殖和凋亡,这些机制与动脉粥样硬化的整个病理生理进程均有密切联系.本文将着眼于冠状动脉系统的蛋白酶体,了解其功能的变化在冠状动脉粥样硬化、心肌缺血再灌注损伤以及经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后血管再狭窄的作用.

血清降钙素原在重症急性胰腺炎诊断中的应用

急性胰腺炎是胰蛋白酶的自身消化作用引起的急性炎症疾病，而重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）发病机制复杂，过程曲折，治疗复杂，还可引起血压下降、血管病变，也会引起肺部并发症、肾功能衰竭等，病死率达70％~85％，需要ICU的生命支持。SAP一旦诊断明确，及时的介入治疗可降低SAP并发症的发生率，缩短缓解及治愈时间。因此，对SAP应进行及时诊断。

两种蛋白酶对于质谱法测定糖化血红蛋白结果的比较研究

目的 探讨两种常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)在质谱法测定糖化血红蛋白(HbAIC)中的差异性研究.方法 病例对照研究.收集2012年2至4月北京朝阳医院门诊和住院患者剩余血液合计200 ml,患者来源中男90例,女70例,年龄20 ～ 60岁,平均年龄(44 ±16)岁.依据国际临床化学协会(IFCC)推荐的基于质谱法的HbAIC参考测量方法处理收集的血液样本(样本编号为:201201、201202、201203),分别应用两种常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)酶解样本中的血红蛋白,使用固相萃取的方法进行质谱前处理,设定适实验条件后,应用液相色谱串联质谱测定样本中HbAIC的含量.使用Sequest软件对制备的实验样本进行血红蛋白变异体的筛查,所有由液相色谱串联质谱获得的质谱结果都需使用Sequest软件针对人类国际蛋白指数(IPI)数据库搜索RAW文件,检索结果与血红蛋白变异体网站上公布的4种常见的血红蛋白变异体(HbS、HbC、HbD、HbE)进行比对.采用SPSS13.0统计软件和Excel 2003对测量结果进行相关性分析,组间比较采用独立样本t检验.结果 经液相色谱串联质谱检测结果可知,在检测HbAIC浓度时,分别用Glu-C和Lys-C酶解血液样本201201、201202、201203,其中经Lys-C酶解的样本HbAIc检测结果分别为(34.70±2.80)、(51.76±1.60)、(73.39±1.11) mmol/mol,经GIu-C酶解的样本糖化血红蛋白检测结果分别为(33.12±1.48)、(54.54±2.50)、(75.40±3.60) mmol/mol,组间比较差异无统计学意义,两种方法测定结果绘制相关曲线,R2均＞0.995.经Sequest进行人类数据库检索,未筛查出4种常见的血红蛋白变异体的存在.结论 在质谱法检测HbAIc时,应用上述两种常用的蛋白水解酶酶解血液样本时,可以得到较为一致的结果,两种方法检测结果相关性良好.

类胰蛋白酶在过敏性疾病诊断中的应用

目的评价类胰蛋白酶(tryptase)测定在过敏性疾病诊断中的应用.方法应用Unicap100测定变态反应科门诊不同疾病组35例患者血清类胰蛋白酶水平,以30名健康志愿者作为对照,并与血清总IgE进行相关性分析. 结果 35例患者中,18例慢性荨麻疹缓解期患者,平均类胰蛋白酶水平(4.74±2.54) μg/L ;10例既往有明确过敏性休克病史者(4.86±2.55)μg/L ;7例严重全身过敏反应急性发作期(17.4±7.87)μg/L ;30名健康志愿者(4.36±1.67)μg/L ;严重全身过敏反应急性发作期组明显高于其他各组(P< 0.01),余各组之间差异无统计学意义;血清类胰蛋白酶水平与总IgE之间没有明确的相关性.结论血清类胰蛋白酶水平在严重全身过敏反应急性期升高,有辅助诊断的意义,但并非适用于所有过敏性疾病的诊断.

蛋白酶激活受体2激动剂对食管癌EC109细胞侵袭转移的促进作用

目的:探讨人食管癌细胞株EC109蛋白酶激活受体-2(PAR-2)的表达,以及内源性PAR-2激动剂胰蛋白酶和PAR-2激动肽SLIGKV对该细胞侵袭转移的影响及其可能的分子机制.方法:采用RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测EC109细胞中PAR-2 mRNA及蛋白的表达情况;胰蛋白酶和SLIGKV对细胞施加干预后,MTT法检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,RT-PCR法检测PAR-2、MMP-2/MMP-9 mRNA表达的变化,明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9明胶酶活性的变化.结果:食管癌细胞EC109在胰蛋白酶和SLIGKV刺激后,PAR-2 mRNA表达较对照组显著上调(0.781±0.045、0.653±0.029 vs0.491±0.032,均P<0.01);胰蛋白酶在1-10nmol/L、SLIGKV在1-50 μmol/L时可促进细胞增殖(P<0.01或0.05),呈剂量依赖性;Transwell 小室实验中胰蛋白酶组及SLIGKV组的细胞侵袭和迁移能力显著高于对照组及反肽组(72.5±9.2、59.4±8.7 vs 31.6±6.6、36.2±9.8,均P<0.01):胰蛋白酶及PAR-2激动肽作用后细胞MMP-9 mRNA的表达量明显高于对照组及反激动肽组(0.719±0.034、0.466±0.042 vs 0.341±0.032、0.370±0.021,均P<0.01),细胞水解明胶的能力也明显高于对照组及反激动肽组(75.6±6.1、60.4±4.6 vs 44.9±4.2、39.3±5.2,均P<0.01).而对MMP-2的mRNA表达和水解明胶的能力无明显影响(P>0.05).结论:食管癌EC109细胞表达PAR-2受体,且内源性PAR-2激动剂胰蛋白酶和PAR-2激动肽SLIGKV可能通过激活PAR-2受体上调MMP-9表达,进而促进食管癌细胞侵袭转移.