首页 > 文献资料
-
神经生长分化相关miR-124a与miR-9在癫痫发生中表达动态改变的研究
目的 探讨神经生长分化相关miR-124a和miR-9在癫痫发生各时间点上表达水平的动态变化.方法 将56只Sprague-Dawley大鼠随机分为2组:正常对照组(n=6)、实验组氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态(SE)致痫大鼠组(n=50).观察SE发作时的动物行为学改变,并行长程视频监测,观察慢性期自发性癫痫的发作情况.选取SE后l、7、14和28 d为主要研究时间点(每组6只),适时处死动物、获取组织标本.同时处死、获取正常对照组(n=6)大鼠的组织标本.提取各时点上大鼠海马脑组织中总RNA,应用荧光定量qPCR检测大鼠海马脑组织中miR-124a和miR-9表达,明确其在上述各研究时点上的表达水平,统计学分析miR-124a和miR-9在各研究时点上的表达差异和动态变化.结果 实验组(n=50)大鼠中有40只进入SE.与正常对照组比较,miR-124a的表达水平在SE后l d变化不明显(P>0.05),但在其后7、14、28 d呈现显著下降趋势,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),该趋势随时间点延长愈加明显.与正常对照组比较,miR-9的表达水平在SE后1、7、14和28d呈现显著升高趋势(P<0.05),miR-9的表达上调在SE后7d存在波动,但其总体呈上升趋势,并随时间点延长愈加显著.结论 神经生长分化相关miR-124a和miR-9在SE后大鼠海马癫痫发生中呈现表达下调或上调的动态变化,推测miR-124a和miR-9表达动态改变与癫痫发生机制有关,可能参与了 SE后海马神经再生和重塑.
-
重组腺相关病毒2型转导人外周血单核细胞来源树突状细胞的研究
树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前发现的功能强的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC),能捕获、加工和提呈抗原,参与淋巴细胞的生长分化,并产生原发性CTL反应的细胞,在激活T细胞介导的免疫反应中起关键性作用[1].
-
成年小鼠肺成纤维细胞分离纯化及原代培养
成年小鼠肺成纤维细胞的原代培养是获得肺组织后在体外进行的培养,能反映体内的生长特性,对研究细胞的生长分化及其生理病理变化的机制具有极其重要的价值,具有细胞系所无法比拟的优点.本文主要探讨合理的成年小鼠肺成纤维细胞的分离纯化培养方法及其生长曲线特点.1材料与方法1.1试剂:高糖DMEM(Gibco公司),胎牛血清(杭州天杭公司),胰蛋白酶(Sigma公司),波形蛋白vimentin、α-平滑肌肌动蛋白α-SMA抗体和免疫组化SABC试剂盒(武汉博士德公司).1.2实验动物:清洁级雄性成年昆明小鼠(25±5)g[华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2008-0005].
-
神经细胞凋亡的分子调控和死亡信号的传导途径
在生物机体的正常发生发育和生长分化过程中,其细胞分裂、生长分化和细胞死亡的精密配合起着重要的作用.脊椎动物神经系统在个体发生中即使没有遇到外在损害,其神经细胞在竞争靶源有限的神经营养因子(神经细胞诱向因子neuronotrophic factors, NTFs)过程中,在特定部位和时间也会按自身的程序主动死亡,即Lockshin和Williams称之为编程性细胞死亡(programmed cell death, PCD).
-
NF-κB 激活的 GSNOR 基因转录可抑制 NGF 诱导的 PC12分化
NO 广泛参与神经系统神经元细胞周期、生长分化及突触形成等过程。S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(S-nitrosoglutathione re-ductase,GSNOR)作为神经元中蛋白亚硝基化的主要调控因子对学习和记忆功能有重要影响,然而其在神经元的分化及突触形成过程中的作用机制尚不清楚。
-
消化系统恶性肿瘤miRNA研究的新进展
microRNA(miRNA)是一类存在于真核生物中长度约22 bp的非编码小RNA分子.miRNA通过与靶基因mRNA的3'端非编码区(3'UTR)结合,在转录后水平调控基因表达,来参与机体不同时期不同组织生长发育的重要过程.已知有一些miRNA基因定位在染色体脆性位点,还有部分miRNA基因存在于一些与肿瘤相关的基因组序列中,而且人们发现在肿瘤组织中多种miRNA的表达谱发生变化,进一步的研究证实miRNA与肿瘤细胞的生长分化迁移、肿瘤血管的生成及肿瘤耐药机制的形成等诸多方面都有着千丝万缕的联系.
-
细胞外基质在肝脏纤维化诊断中的应用
0 引言细胞外基质组成成分有胶原蛋白、结构糖蛋白、蛋白多糖及弹性蛋白.他们对细胞和组织的形态结构,新陈代谢及生长分化有重要作用.肝纤维化是慢性肝病共有的病理改变.肝脏星形细胞被激活转化为肌纤维母细胞,是肝纤维化发生的中心环节.其实质是细胞外基质的合成超过降解,在肝内过度沉积[1-3 ].鉴于肝脏穿刺组织病理检查的局限性、穿刺的禁忌证、并发症及难于随访,人们一直致力于寻找血清学指标来监测肝纤维化的发展过程和判断抗纤维化药物的疗效.理想的血清学标志物应反映纤维生成与降解的动态过程,反映肝纤维化程度.近年来,许多血清学标志物已应用于临床[4-6],一些尚在研究中,本文就此作一概述.
-
乙型和丙型肝炎病毒与肝细胞相互作用的分子生物学基础
编者按乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染肝细胞之后,首先要借助肝细胞中的一些成分完成其复制和表达的生活周期,主要是肝细胞中的一些调节蛋白与这2种肝炎病毒调节基因序列之间的结合,并对于肝炎病毒的复制和表达过程进行调节,肝细胞中一些特有的调节蛋白在肝炎病毒的生活周期中具有十分重要的调节作用,这也是肝炎病毒相对嗜肝细胞特性的分子生物学基础.同样,肝炎病毒的蛋白,或者通过与肝细胞蛋白之间的直接结合,或者通过与DNA的结合以及肝细胞的信号转导途径影响肝细胞的基因表达类型和基因表达水平,或者改变肝细胞基因表达谱的时空规律,影响肝细胞的细胞周期、细胞凋亡、生长分化、信号转导、恶性转化等过程.这是HBV和HCV感染肝细胞之后引起慢性肝脏疾病的重要的分子生物学基础,一直是人们关注的焦点.
-
人大肠癌转移相关基因片段的筛选和鉴定
目的:初步筛选和鉴定大肠癌转移相关基因,阐述大肠癌转移的分子机制.方法:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),在一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480间,已成功构建了人大肠癌转移促进基因和转移抑制基因的两个cDNA消减文库.从以上两个文库中随机挑取约200个菌液PCR片段,利用Differential screening(DS)方法筛选真正差异表达的cDNA片段,之后通过Northern blot对部分差异cDNA片段的DS筛选结果进行验证.后对筛选出的差异cDNA片段进行测序和同源检索,分析其性质并初步探讨其在大肠癌中转移中的可能机制.结果:约200个菌液PCR片段经过DS筛选后,共获得29个真正差异表达cDNA片段,利用Northern blot对其中4种cDNA片段的表达情况进行验证,结果与DS筛选一致.然后对29个差异cDNA片段进行测序和同源性分析,得到25个差异表达基因,10个为已知基因,其中5个基因在高转移细胞株SW620中差异表达,可能有促进转移的作用,包括热休克蛋白10(heat shock protein10,HSP10)、细胞色素氧化酶Ⅱ(cytochrome C oxidaseⅡ,COXⅡ)、有丝分裂调控蛋白dis3人同源物(mitotic control protein dis3 homolog,DIS3)、骨骼肌αl-肌动蛋白(skeletal muscle actin alpha1,ACTAl)及血浆淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA);另外5个基因的表达仅见于在SW480低转移细胞株,具有潜在的转移抑制作用,包括egl nine homolog 2(EGLN2)、真核翻译起始因子4A(eukaryotic translation initiation factor4A,EIF4A)、人细胞色素氧化酶Ⅲ的类似物(similar to cytochrome c oxidase Ⅲ,COXⅢ)、谷胱甘肽S转移酶3(glutathione S-transferase mu 3,GSTM3)及线粒体DNA(mitochondrion DNA,mtDNA).10个已知基因基本上是一些与细胞生长分化、代谢合成、转录、凋亡及信号转导等相关的基因.除DIS3和SAA外,其余基因与大肠癌转移的关系在本研究中首次被报道.此外,还筛选到15个未知基因片段,通过与人基因组序列进行比对,发现其中6个基因定位于5号染色体上,包括4个可能促进大肠癌转移的基因和2个抑制基因.目前这15个未知基因片段已经被GeneBank dbEST库收录,GeneBank登陆号为CD485499-CD485513.结论:DS技术是一种筛查表达文库的有效途径;细胞的生长分化、转录、凋亡、信号转导等变化可能在大肠癌转移过程中发挥重要作用;5号染色体上可能存在多个与大肠癌转移相关的新基因位点.
-
转survivin基因树突状细胞抗慢性粒细胞白血病的免疫效应
树突状细胞(DC)是目前为止发现的机体内功能强的专职抗原呈递细胞(APC),它参与淋巴细胞的生长分化,在激活T细胞介导的免疫反应中起关键性作用.survivin (SVV)基因是一个抗凋亡基因,它在人类大多数肿瘤组织中表达,而在正常成人组织中不表达,故可认为是肿瘤组织较为特异的基因.为开展DC瘤苗的抗白血病免疫治疗,我们拟以重组腺病毒介导SVV基因修饰DC,观察诱导产生的特异性抗白血病免疫效应.
-
microRNAs与肿瘤代谢研究进展
一、引言1993年Lee等[1]在线虫中首次发现microRNA (miRNA)-lin-4.2000年Reinhart等[2]再次在线虫中发现第二个miRNA即let-7.2004年Calin等[3]研究发现miR-15和miR-16与慢性B细胞淋巴瘤发生相关,首次揭示miRNA与癌症发生相关.随后掀起了一股miRNA研究热潮,通过检索Pubmed发现近年来miRNA相关文献迅速增加.现在已经证实miRNA的生物学功能非常广泛,它不仅参与细胞发育、组织生长分化、细胞代谢等多个方面,而且它的异常表达和调控参与人类很多疾病的发生.目前发现miRNA与肿瘤的发生发展有着千丝万缕的关系,约50%的miRNA.基因位于肿瘤相关基因组区域或其脆性位点,且不同肿瘤的miRNA表达谱有明显的差异[4].根据miRNA在肿瘤发生发展中的不同作用,可将其分为致癌miRNA (oncomirs)和抑癌miRNA(tumor suppressor miRNAs)两种类型[4].
-
miR-34a对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响
骨肉瘤是儿童和青少年中常见的骨原发性恶性肿瘤,具有侵袭性强,预见性差,致死和致残率高的特点[1?2]。放射是目前骨肉瘤治疗的主要手段之一,可以有效治疗转移性骨痛和复发、不宜手术或拒绝手术者。然而放射抵抗是放射的主要瓶颈,如何提高放射敏感性是骨肉瘤治疗面临的主要问题。 microRNAs ( miRNAs )是一类内源性非编码单链 RNA分子,对细胞的生长分化、增殖凋亡和肿瘤发生具有重要调控作用[3]。相关研究表明miRNAs还可通过抑制目标基因相关信号转导通路的活化,提高细胞凋亡率,降低肿瘤放射抵抗,有潜力成为靶向提高骨肉瘤放射敏感性的新靶点。
-
雌激素与流体剪切力对成骨细胞DNA合成的影响
骨质疏松是中老年人骨代谢的主要特征,雌激素缺乏是原发性骨质疏松症的主要原因之一.已有研究表明,雌激素能促进成骨细胞的生长分化,从而影响机体骨代谢.活体细胞对外力的反应是由于外力导致组织间液流动发生改变,从而被细胞感知.本项研究选择流体剪切力作为细胞加力方式,观察雌激素与流体剪切力对体外培养的成骨细胞增殖与 DNA 合成的影响,探讨雌激素与机械力对成骨细胞的影响.
-
T-钙黏蛋白与某些皮肤病的研究进展
钙黏素是Ca依赖性跨膜的细胞间黏附分子,通过在细胞膜表面表达钙粘素配体介导同型细胞间及细胞与基质间的黏附,参与桥粒的构成,维持组织结构的完整,在细胞识别信号转导,细胞的连接和生长分化、组织发育、器官形成等过程中发挥重要的作用.
-
细胞核标记物5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷的研究及应用进展
细胞移植疗法是现代医学发展为迅速的领域之一,采用干细胞治疗技术修复退变的椎间盘,是治疗早中期椎间盘退变的理想方法[1]。为了解细胞移植后在体内的存活、迁徙、分布和转归等情况,需要依赖合适的示踪技术将细胞加以标记,以进行识别和监测。细胞核标记法是常用的示踪方法之一,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine, EdU)是新一代细胞核标记物,近年来广泛应用于检测DNA复制、细胞增殖以及细胞标记。与传统的免疫荧光染色检测方法相比,EdU检测方法更为简单、快速、准确,且对细胞生长分化影响小[2,3],具有良好的应用前景和发展空间。
-
家族性息肉病诊治现状
随着人类健康意识的增强,肠镜的普及内镜下治疗术的发展,临床上消化道息肉病的检出和治疗也在消化道疾病的诊治史上谱写出新的篇章.但临床医师对于一些特殊息肉病的认识尚不完整,现就家族性息肉病的临床诊治现状做一综述,以求达到特殊类型息肉病的广泛认识和提高,终能达到将疾病控制在初级阶段,减少肠癌的发生.一、临床特点家族性息肉病是一种罕见的常染色体显性遗传性疾病,由第5号常染色体长臂上APC基因突变,使第5号染色体2区1带(5021)上的肿瘤抑制基因缺失,出现细胞生长分化的进行性失控所致.临床特征是息肉多发生在大肠远端,主要是结、直肠黏膜上布满腺瘤样息肉,在结肠内可有100个以上腺瘤样息肉.发病年龄为20 ~ 30岁,未经治疗15年左右发生恶变,恶变率极高,可达100%.癌变平均年龄在39岁,比一般的大肠癌发病年龄提前15~20年.除癌变病灶外同时伴发肠外癌症,如软组织癌、骨癌、胃癌、小肠癌等,还可伴有面部黑斑及视网膜色素斑.
-
微小RNA表达在糖尿病视网膜病变中的作用研究进展
微小RNA(microRNA)是一类进化中高度保守基因编码的内源性小分子RNA ,长度小于30个碱基。它可通过与靶基因的3'端结合,或直接与靶基因结合,或通过碱基互补配对抑制mRNA,在转录后水平调控目的基因的表达。 microRNA 调节靶基因mRNA主要通过降解或直接结合抑制其翻译。数据显示,人类基因组编码的microRNA估计有1100多种,它们可调节哺乳动物约60%的蛋白质编码[1]。自1993年microRNA 被首次从线虫发现,关于它的研究日益广泛深入,被证明在细胞的生长分化、增殖凋亡、生物的发育及物质代谢等方面均发挥作用。microRNA作为一个生物学标志物,是可以衡量的客观指标,可以反映特定疾病状态的发生和发展,并可以被有效测量。它在糖尿病诱导的视网膜病变动物模型中能够被有效监测,更准确地反映疾病病理状态的变化,这对于糖尿病视网膜病变的诊断、治疗及判断预后具有重要的意义。现就其在糖尿病视网膜病变发生发展中的作用进行综述。
-
先天性额鼻突发育畸形的诊断与治疗
人的颌面部是由胚胎期的额鼻突和第一腮弓生长、分化出来的两个上颌突、下颌突、一个额鼻突、两个侧鼻突、球状突和一个中鼻突共10个面突联合而成.出生后继续发育至成年,形成左右对称,上中下三部比例协调的容貌.额鼻突生长分化出颜面中部的中三分之一的器官,也就是中鼻突、球状突、侧鼻突生长分化的器官.近年来我们收治了以鼻唇为中心的4例畸形患者,经治疗收到了满意的效果.
-
骨髓间充质干细胞在膀胱脱细胞基质上的生长及分化
背景:传统方法多采用平滑肌细胞和移行上皮细胞构建组织工程膀胱,并进行支架材料的双面种植,但由于平滑肌细胞取材培养困难,且体外传代有限,双面种植较为困难.目的:实验拟验证以骨髓间充质干细胞及膀胱脱细胞基质构建组织工程膀胱的可行性.设计:基础实验研究.单位:中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心.材料:实验于2006-03/2007-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成.实验室级别为卫生部部属医院开放实验室.1月龄SD大鼠,雌雄不限,体质量80~100g,由中山大学实验动物中心提供.新鲜猪膀胱取自南方医科大学动物实验中心.方法:采用全骨髓培养连续贴壁法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,并应用流式细胞仪检测其表面抗原.采用去污剂洗涤法制备猪膀胱脱细胞基质,并测定其纯度及特性.将第3代骨髓间充质干细胞接种到膀胱脱细胞基质上,以添加25 ng/L血管内皮生长因子(VEGF165)的培养液进行体外、体内复合培养,检测其相容性.体内实验以细胞单独培养为对照,体外实验以未植入细胞的材料为对照,并模拟合适的微环境诱导骨髓间充质干细胞生长分化,分别在4,8周后取出动物体内的复合材料行组织切片检查,并进行免疫组织化学角蛋白染色,检测上皮细胞再生情况.主要观察指标:骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质的生物相容性.结果:①采用全骨髓法成功培养出骨髓间充质干细胞,行流式细胞仪检测细胞表面抗原显示,传代第3代细胞CD29阳性细胞为99.43%.②制备的膀胱脱细胞基质具有良好的生物特性,镜下见均质状态的基质和细丝状的胶原纤维.体内外相容性实验表明骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的相容性,细胞生长状态良好.③4周后组织切片检查可见组织中较多炎症细胞浸润,胶原及弹性纤维排列紧密,免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、不连续的单层上皮生长,8周后可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应,胶原及弹性纤维排列紧密,免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、连续的多层上皮生长.结论:骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的生物相容性,并且在体内与周围组织有良好的生物相容性,可以作为构建组织工程膀胱的材料.
-
维甲酸对人角膜基质细胞增殖和移行的影响
目的:探讨维甲酸对角膜基质创伤愈合的可能的作用.方法:利用细胞计数法、MTT法观察维甲酸对培养的人角膜基质细胞增殖的影响;利用缺损闭合实验观察维甲酸对培养的人角膜基质细胞移行的影响.结果:MTT法和细胞计数法显示,维甲酸抑制体外培养的人角膜基质细胞增殖,抑制作用呈剂量、时间依赖性(F检验,P<0.05),抑制率在11.4%~39.2%.细胞计数法还显示,O.5%苔芬兰染色示各组活细胞率均在90%以上,未见细胞毒性.缺损闭合实验表明,10-6M维甲酸组缺损平均愈合天数明显长于对照组.结论:维甲酸抑制培养的人角膜基质细胞增殖、移行.这些结论为进一步理解控制角膜基质细胞生长分化的机理,为研究控制角膜创伤愈合瘢痕奠定了初步的理论基础.