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细胞外基质在肝脏纤维化诊断中的应用
0 引言细胞外基质组成成分有胶原蛋白、结构糖蛋白、蛋白多糖及弹性蛋白.他们对细胞和组织的形态结构,新陈代谢及生长分化有重要作用.肝纤维化是慢性肝病共有的病理改变.肝脏星形细胞被激活转化为肌纤维母细胞,是肝纤维化发生的中心环节.其实质是细胞外基质的合成超过降解,在肝内过度沉积[1-3 ].鉴于肝脏穿刺组织病理检查的局限性、穿刺的禁忌证、并发症及难于随访,人们一直致力于寻找血清学指标来监测肝纤维化的发展过程和判断抗纤维化药物的疗效.理想的血清学标志物应反映纤维生成与降解的动态过程,反映肝纤维化程度.近年来,许多血清学标志物已应用于临床[4-6],一些尚在研究中,本文就此作一概述.
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调肝理脾方抗酒精性肝纤维化大鼠的免疫组化及图像分析研究
肝纤维化的形成主要是细胞外基质(ECM)的过度产生和沉积所致,肝脏星形细胞(HSC)的活化和增殖是多数 ECM的细胞来源,抑制HSC的活化和增殖是治疗的关键.通过应用免疫组织化学染色的方法,观察了调肝理脾方对实验性酒精性肝纤维化大鼠肝脏HSC形态及功能的影响,并通过图像分析及统计学处理,验证了药物抗酒精性肝纤维化的作用机理和作用效果.结果提示调肝理脾方是通过抑制HSC的活化和增殖,从而起到抑制ECM合成的作用.这也是调肝理脾方预防和治疗酒精性肝纤维化的机理所在.
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维生素A和β-胡萝卜素对大鼠肝纤维化的影响
目的:研究β-胡萝卜素对四氯化碳诱导的实验性大鼠肝纤维化的影响及其机制.方法:SD大鼠随机分为4组.正常对照组:给橄榄油溶液1 ml/kg bw,9 w;四氯化碳对照组:给50% CCl4橄榄油溶液1 ml/kg bw,每周两次皮下注射持续9 w;维生素A和β-胡萝卜素组:注射50% CCl4橄榄油溶液3 w后,分别给以维生素A0.1 g/kg bw,每周两次皮下注射,β胡萝卜素150mg/kg bw,每周两次灌胃,持续6 w,之后观察肝脏组织病理及超微结构;羟脯氨酸含量和Ⅰ型胶原RNA的表达水平.结果:1.普通病理切片显示,各治疗组中无明显肝细胞损害,纤维化程度计分明显低于四氯化碳对照组(P＜0.05);超微结构显示维生素A组的星形细胞中的脂滴数量明显多于正常对照和四氯化碳对照组;而β-胡萝卜素治疗组中脂滴数量多于四氯化碳对照组;治疗组间质中的胶原纤维亦明显减少;2.治疗组羟脯氨酸含量亦明显低于四氯化碳对照组(P＜0.05);3.治疗组中的Ⅰ型a2胶原的RNA表达水平亦低于四氯化碳对照组.结论:维生素A 0.1 g/kgbw每周两次皮下注射,持续6 w和β-胡萝卜素150 mg/kg bw,每周两次灌胃,持续6 w能降低由四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的程度,其作用途径可能与抑制肝脏星形细胞中的脂滴丢失有关.
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[18F]FDG-RGD多肽在肝纤维化诊断中的应用价值
目的 采用[18F]FDG直接一步法标记合成[18F]FDG-RGD,探讨其在肝纤维化动物模型中潜在的诊断价值.方法 采用TRACERlab FXFN平台,在酸性条件下将酸化的勺[18F]FDG与RGD加热直接反应,然后采用固相柱进行分离目的示踪剂[18F]FDG-RGD.应用硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)构建大鼠肝纤维化模型,对照组(n=4)和肝纤维化组大鼠(n=4)经尾静脉注射[18F]FDG-RGD,采用Discovery Elite PET/CT的VIP模型进行动态扫描,用SharpIR+VUE Point HD及OSEM迭代重建法对采集图像进行重建,通过勾画感兴趣方法(region of interest,ROI)处理图像,获取大鼠肝脏与心脏的放射性计数比值(liver/heart,L/H),比较对照组与肝纤维化动物模型肝脏摄取[18F]FDG-RGD的差异.结果 10次连续合成效率达到20％、放射化学纯度98％,整个合成过程大约30min.注射[18F]FDG-RGD后30min,对照组与肝纤维化组L/H分别为0.73±0.15、1.35±0.08,肝纤维化组明显高于对照组(P=0.018).结论 [18F]FDG直接标记RGD多肽方法简单、方便可行,[18F]FDG-RGD有助于肝纤维化的18诊断.
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肝纤维化发生的机制
各种致病因子作用于肝组织后,可直接导致肝细胞不同程度的损害,引起肝细胞的损伤、再生及肝纤维化等,终导致肝功能不全,晚期则发展为肝功能衰竭.关于肝纤维化机制及对其防治的研究,近年来已成为国内外生物学、医学研究的热点之一.本文综述了肝纤维化发生的机制,并对其作用机制进行探讨.
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β胡萝卜素对实验性大鼠肝纤维化的影响
目的研究β胡萝卜素对四氯化碳(CCl4)诱导的实验性大鼠肝纤维化的影响,并探讨其作用机制.方法①在CCl4诱导实验性大鼠肝纤维化3周后,同时给予β胡萝卜素25000 U/kg体重,每周2次灌胃,同时设正常及CCl4对照组.②观察肝脏组织学及超微结构改变,检测大鼠肝组织羟脯氨酸含量(生化法)、α2Ⅰ型胶原RNA(点杂交法)和转化生长因子β1(TGFβ1,免疫组化法)的表达.结果β胡萝卜素防治组中,肝纤维化程度计分显著低于CCl4组(P＜0.05),肝星形细胞中的脂滴数量少于正常对照组,但多于CCl4对照组;β胡萝卜素防治组中,肝组织羟脯氨酸含量显著低于CCl4组(P＜0.05);肝脏α2(I)型前胶原RNA和TGβ1表达显著低于CCl4组(P＜0.05).结论上述剂量的β胡萝卜素,能显著降低由CCl4诱导的大鼠肝纤维化的程度,其作用机制可能与抑制TGFβ1在肝组织中的表达和减少肝脏星形细胞中视黄醇脂滴的丢失有关.
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抗肝纤维化重组TGF-β1疫苗的研究进展
肝纤维化(hepatic fibrosis)是指肝内的纤维结缔组织异常增生,其实质是胶原和其他细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的合成与降解失衡,而转化生长因子β1(transforming growth facter beta 1,TGF-β1)是调控肝纤维化发生、发展的核心物质.近来,在肝纤维化的治疗上提出重组TGF-β1疫苗,引起广泛关注.本文围绕近年来对TGF-β1在肝纤维化形成中的作用机制的认识,对采用重组TGF-β1疫苗防治肝纤维化的相关探索性研究进行综述.
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大鼠肝脏星形细胞的分离培养及鉴定
目的建立大鼠肝星形细胞(hepatic stellate cells,HSC)的体外分离及培养方法,为进行肝纤维化的实验研究提供技术支持.方法选用SD大鼠经消化酶灌注肝脏后,用调整密度后的淋巴细胞分离液分离HSC.通过观察其自发荧光及显著其特征性结构的脂肪染色、细胞免疫化学染色等方法鉴定.结果分离得到HSC,细胞得率为1～1.5×107/只,存活率为98%.结论成功分离及培养HSC,且方法经济、简便、稳定.
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一种改进的分离纯化人肝脏星形细胞的方法
目的改进传统的分离纯化人肝脏星形细胞(HSCs)的方法.方法在传统的分离人HSCs方法的基础上,省略链霉蛋白酶消化,仅用Ⅳ型胶原酶消化,采用低速离心去除肝脏实质细胞,将获得的肝脏非实质细胞进行两次换液及传1代培养,观察培养过程中细胞形态及蛋白标志物的改变.结果经传1代培养24 h后,所分离得到的人HSCs纯度接近100%.结论所改进的分离人HSCs的方法具有操作简便,收获细胞纯度高的特点.
