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祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞Desmin及CD2AP蛋白的影响
目的 探讨祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞结蛋白(Desm in)和CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)的作用.方法 一次性尾静脉注射阿霉素制备肾病模型.3周后造模成功,随机分为空白对照组(A组,12只),模型对照组(B组,8只),祛风通络方小、中、大剂量组(C组、D、E每组8只)和阳性对照组(F组,8中).从第4周起,A组和B组给生理盐水,C～E组分别给祛风通络方1.0、2.1、4.2 g/mL,F组给泼尼松25 mg/kg.各组均灌胃给药,10 mL/kg,1次/天,连续28天.期间进行24 h尿蛋白定量、血清生化指标检测,实验结束时电镜观察超微结构、Real-time PCR法及Western blot法检测足细胞骨架蛋白Desmin mRNA、裂孔隔膜蛋白CD2AP mRNA及其蛋白表达.结果 (1)与B组比较,C、D、E、F组24 h尿蛋白定量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)与B组比较,C、D、E组ALB均有所升高,差异有统计学意义(P ＜0.05);TC含量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);F组TG反而有明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)电镜观察发现,D、E、F组与B组比较,足细胞形态均有不同程度改善,特别是足突结构、足突数目改善明显,其D、E组改善更明显.(4)阿霉素肾病大鼠中Desmin mRNA、CD2AP mRNA及蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).干预后,与B组比较,C、D、E、F组Desmin mRNA和CD2AP mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).(5)与A组比较,B组Desmin、CD2AP蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与B组比较,C、D、E、F组CD2AP蛋白表达明显降低,D、E、F组Desmin蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);各剂量组间比较,C、D、E组Desmin及CD2AP蛋白表达逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与F组比较,C、D组CD2AP蛋白表达明显高,E组CD2AP蛋白表达明显低,差异有统计学意义(P＜0.05);C、D、E组Desmin蛋白表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 祛风通络方对阿霉素肾病大鼠的治疗作用伴随着改变足细胞骨架蛋白Desmin及裂孔隔膜蛋白CD2AP基因表达的改变而实现.
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人胚心静脉窦和传导系统的早期发育
目的 探讨早期人胚心静脉窦及传导系的发生发育机制. 方法 用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)和抗结蛋白(DES)抗体对29例C10～C16期人胚心连续切片行免疫组织化学染色. 结果 人胚发育C12～C13期,系统静脉汇集形成的静脉窦出现于心包腔尾端原始横膈间充质中,静脉窦壁间充质细胞逐渐分化为α-SCA阳性的静脉窦心肌细胞.C14期,心包腔的扩张使静脉窦进入心包腔内,参与了右心房的形成.DES阳性传导系心肌的分化始于C10期心房室管右侧壁,随发育逐渐向室间沟心肌扩展,发育为房室传导系的希氏束、左右束支及心室腔面的小梁心肌.在心房,DES表达首先出现于C11期心房背侧壁,在C13期,可见静脉窦左背侧壁α-SCA、α-SMA、DES阳性心肌带与左心房底部、房室管背侧壁相延续,这条心肌带可能参与了人胚心静脉窦至房室管传导系的发育.C14～C16期,DES强阳性染色从窦房结经左、右静脉瓣及心房的背、腹侧壁延伸至房室管右侧壁,可能是原始的心房传导通路. 结论 心包腔尾端原始横膈间充质是人胚静脉窦心肌发生区,原始横膈间充质细胞逐渐分化为心肌细胞,添加到人胚心管静脉端,形成心静脉窦心肌.人胚心传导系心肌的分化始于房室管,随心管发育逐渐向动、静脉端扩展,在C16期,已分化为形态清晰可辨的DES阳性胚胎心传导系.
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α-SCA、α-SMA和结蛋白与小鼠胚胎心肌发育成熟的关系
目的观察α-横纹肌肌节肌动蛋白(α-SCA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和中间丝结蛋白在小鼠心脏发育过程中的时空表达特征,以探讨这些蛋白质表达与胚胎及生后小鼠心脏成熟的关系.方法用抗α-SCA、抗α-SMA及抗结蛋白单克隆抗体对胚胎及生后小鼠心脏连续切片进行染色.结果胎龄9 d,心室和流出道α-SCA、α-SMA表达较强,而结蛋白表达较弱.在心房,α-SCA、α-SMA的表达限于背侧壁和腹侧壁,静脉窦仅见少许α-SCA弱阳性细胞.心房和静脉窦则无结蛋白表达.α-SCA、α-SMA和结蛋白的表达于胎龄12 d达高峰.较高水平的α-SCA表达将持续到生后.心脏各部α-SMA和结蛋白表达于胎龄12 d后逐渐下降,但在右心室表达持续时间较长.出生后,结蛋白表达主要集中于明带Z线和闰盘.结论α-SMA和结蛋白在小鼠胚胎心脏表达的时空差异性表明小鼠胚胎心脏不同部位发育成熟的时间有差异,右心室成熟较慢.α-SMA表达可能与早期胚胎心脏的缓慢蠕动收缩有关.肌节的发育成熟需要较高的结蛋白表达.
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大鼠肝大部切除后再生时贮脂细胞的动态变化
目的研究大鼠肝大部切除后再生时贮脂细胞的动态变化. 方法用结蛋白免疫组织化学法显示肝贮脂细胞并计量,以图像分析仪测灰度值. 结果正常肝小叶内贮脂细胞呈网架状分布,肝大部切除后再生时贮脂细胞数量递减,至第5d时为正常肝的1/3. 结论肝大部切除后再生时贮脂细胞动态变化明显不同于肝中毒等损伤后的增殖变化.
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组织芯片技术在检测正常组织和肿瘤组织抗原表达中的应用
组织芯片(tissue chip) [1]技术具有高产出(high-throughput),实验误差小和省时、省力、节约经费的优点,并能应用于科研、教学、生物试剂测试、质量监控及标准化等领域[2 ,3]. 我们采用了组织芯片这项技术并选用了5种常用抗体(AE1/3、波形蛋白、CD45、结蛋白和 S- 100蛋白)对54例正常组织及60例肿瘤标本进行了抗原表达的检测,以了解该技术在这方面的使用价值.
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细胞角蛋白染色在肿瘤诊断中的应用
所有哺乳类动物细胞质都含有复杂的细胞骨架蛋白包括Ⅰ微丝、微管以及中间丝,中间微丝有6种类型:细胞角蛋白Ⅰ及Ⅱ型、结蛋白、波形蛋白、胶质纤维酸性蛋白(GFAP),及神经纤维组成,细胞角蛋白是为复杂的中间丝,Moll等将细胞角蛋白分成20种.细胞角蛋白又可根据等电点的不同分为酸性及碱性,一般而言,相对分子质量小的细胞角蛋白总是与大的细胞角蛋白配对;而酸性细胞角蛋白总是与碱性细胞角蛋白配对,细胞分化的不同阶段及不同类型上皮细胞表达不同的细胞角蛋白.上皮组织恶变后,其表达的细胞角蛋白与正常组织基本相同,因此,细胞角蛋白的表达被广泛应用于肿瘤的诊断,本文将主要探讨不同肿瘤的角蛋白的表达[1].
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TRPC6对TGF-β1诱导体外足细胞损伤的作用
目的 探讨瞬时受体电位C6(transient receptor potential cation channel 6, TRPC6)对TGF-β1干预下足细胞nephrin、desmin、caspase 9蛋白表达及细胞凋亡的影响.方法 体外培养小鼠肾足细胞分为4组:正常对照组、TGF-β1干预组、TGF-β1+PGPU6/GFP/Neo-TRPC6-mus-581组(TRPC6低表达组)和TGF-β1+PGPU6/GFP/Neo-NC组(空载体组),干预48 h后用Western blot和real-time PCR 检测nephrin、desmin、caspase 9蛋白和mRNA表达水平,用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,DAPI染色观察凋亡细胞核形态学变化.结果 转染48 h时足细胞表达绿色荧光蛋白较24 h时明显增强,TRPC6低表达组TRPC6蛋白水平较正常对照组明显下降(P<0.05),空载体组TRPC6蛋白表达水平无明显变化;TGF-β1干预48 h后desmin、caspase 9蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01),nephrin蛋白和mRNA表达水平明显下降(P<0.05),敲低TRPC6表达上述变化不明显;TGF-β1干预组足细胞凋亡率为(14.0±2.1)%,TRPC6低表达组凋亡率为(10.90±0.56)%(P<0.05),空载体组细胞凋亡率无明显差异;TGF-β1干预后足细胞凋亡增多并出现典型凋亡细胞核形态学改变.结论 TGF-β1能诱导足细胞凋亡、减少nephrin表达、增加desmin和caspase 9表达,其机制可能与上调TRPC6表达密切相关,敲低TRPC6表达能逆转上述变化,对足细胞具有保护作用.
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促红细胞生成素对缺氧/复氧心肌骨架蛋白的作用
目的 从大体和细胞的角度,观察促红细胞生成素(EPO)对缺氧/复氧心肌细胞骨架蛋白:肌动蛋白(α-actinin protein)、微管蛋白(tubulin protein)和结蛋白(desmin protein)的影响,并初步探讨EPO对缺氧/复氧心肌骨架蛋白作用机制.方法 经夹闭气管8 min建立窒息性大鼠心脏骤停-心肺复苏动物模型.24只Sprague-Dawley大鼠随机(随机数字法)分为3组:健康对照(N)组、全心缺血/再灌注(I/R)组和EPO组.I/R组于窒息致心搏骤停后8 min,予胸外按压和机械通气进行复苏,恢复自主循环(ROSC),监测复苏后心功能状态.EPO组CPR后于ROSC后3 min注射EPO 5000 U/kg).确定模型成功后观察120 min,取心室肌,SABC免疫组化法观察微管蛋白、结蛋白和肌动蛋白变化.分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧模型.培养心肌细胞随机分为4组:①正常(C)组;②缺氧/复氧(H/R)组(缺氧10 h/复氧4h);③EPO组(缺氧10 h/复氧4h后予EPO 10 U/mL干预),免疫荧光法观察各组细胞微管蛋白、肌动蛋白结构及其荧光强度变化.结果 动物实验中,N组、I/R组和EPO组结蛋白、微管蛋白和肌动蛋白的免疫组化平均光密度值(OD)组间比较差异均无统计学意义.细胞研究实验中,H/R组心肌细胞肌动蛋白、微管蛋白荧光染色结构明显破坏,网状结构模糊不清,平均荧光强度值较C组明显减弱,但与EPO组比较差异均无统计学意义.结论 缺氧/复氧对心肌损伤作用具有时效性,EPO对缺氧/复氧损伤的心肌骨架蛋白无保护作用.
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电针对兔腰肌急性钝挫伤后组织修复与碱性成纤维细胞生长因子/细胞外信号调节激酶信号通路的影响
目的：观察电针对兔腰肌急性钝挫伤后碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、结蛋白(Desmin)以及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响，探讨电针对兔腰肌损伤后组织再生修复影响的可能机制。方法40只雄性新西兰大耳兔随机分为空白组、模型组、电针委中组、电针局部组，每组10只。采用钝挫伤方法造成兔腰肌损伤模型并对各组动物进行外表观察评分。造模后电针治疗2周，HE染色观察腰肌组织形态改变，免疫组化染色观察腰肌bFGF的表达，Western blotting法检测腰肌Desmin与ERK1/2蛋白表达。结果模型组、电针委中组与电针局部组外表观察评分均明显高于空白组(P<0.01)。组织形态学评分由高到低依次为模型组、电针局部组、电针委中组、空白组(P<0.05)，腰肌bFGF的表达依次为电针局部组、电针委中组、模型组、空白组，Desmin的表达为电针局部组=电针委中组、空白组=模型组(P<0.05)，ERK1/2的表达为电针局部组=电针委中组、模型组、空白组(P<0.05)。结论电针可能通过上调bFGF/ERK信号通路的表达，促进兔腰肌急性钝挫伤后的组织修复。
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力竭游泳运动对大鼠心肌细胞中间纤维和超微结构的影响
目的:探讨力竭游泳运动对大鼠心肌细胞中间纤维和超微结构的影响,以期为运动对心肌的生理和病理变化研究提供形态学依据.方法:SD大鼠进行1次力竭游泳,分别在力竭游泳运动后即刻(Oh)、3h、24h、48 h和100h,取左心室肌进行石蜡切片样本处理和常规透射电镜样本处理,石蜡切片分别进行结蛋白和波形蛋白的免疫组织化学染色(Envision法),观察和计算其平均光密度和阳性面积,电镜标本观察肌细胞内超微结构的改变.结果:1次力竭游泳后从即刻到24h,心肌结蛋白和波形蛋白持续降低至低点,超微结构也出现损伤性改变;运动后48h,心肌结蛋白和波形蛋白开始增加,超微结构的损伤也开始改善.结论:力竭游泳运动可以引起大鼠心肌中间纤维和超微结构的形态变化,运动后大鼠心肌细胞的中间纤维和超微结构出现逐渐恢复的过程.
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骨髓间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠的治疗作用及黏着斑激酶的影响
目的：观察骨髓间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠的治疗作用及黏着斑激酶（FAK）的影响。方法建立阿霉素肾病大鼠模型，分别以干细胞与波尼松对照治疗，测定24 h尿蛋白，电镜观察肾组织结构，实时荧光定量PCR检测Nephrin、Desmin、FAK表达水平的变化，Western blot检测肾组织FAK蛋白及磷酸化，免疫组织化学方法检测Nephrin表达水平。结果（1）模型组大鼠均出现大量蛋白尿及足细胞足突广泛融合，骨髓间充质干细胞治疗组较模型组有改善。（2）与正常组比较，模型组Nephrin表达减少（P＜0.05），Desmin mRNA表达增多（P＜0.05），FAK mRNA表达升高（P＜0.01）；与模型组比较，各治疗组Nephrin表达水平增多（P＜0.05），Desmin mRNA表达水平减少（P＜0.05），FAK mRNA表达减少（P＜0.01）。（3）模型、各治疗组 Nephrin 蛋白表达水平低于正常组（P＜0.05），各治疗组 Nehprin蛋白表达水平较模型组有所增高（P＜0.05）。（4）模型组FAK总蛋白及磷酸化蛋白增高（P＜0.01），各治疗组FAK总蛋白及磷酸化蛋白较模型组降低，P＜0.05。结论骨髓间充质干细胞移植能抑制FAK活化，减轻蛋白尿，增加阿霉素肾病大鼠肾组织Nephrin表达水平，同时降低Desmin mRNA表达水平，对肾小球损伤起保护作用。
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高血压大鼠心脏细胞骨架蛋白α-微管蛋白和结蛋白
目的探讨高血压大鼠心血管重构时,心肌细胞骨架蛋白α-微管蛋白(tubulin)和结蛋白(desmin)的变化.方法建立腹主动脉缩窄高血压大鼠模型,术后2周、4周用尾动脉测压法观察大鼠血压和心率的变化,术后11周用免疫组织化学和形态计量学方法,观察心血管形态改变、细胞骨架蛋白α-微管蛋白、结蛋白在心脏原位蛋白表达的变化.结果与假手术组比较,高血压大鼠2周和4周血压显著升高[(144.7±4.9比110.0±4.0)mm Hg,P<0.01; (151.4±14.9比114.4±5.5)mm Hg,P<0.01)、心血管重构,细胞骨架蛋白在心脏过表达和聚集、分布异常,而且阳性表达面积和阳性表达面积百分数增大,α-微管蛋白[(102 927.8±20 561.9比18 304.4±9 661.0)μm 2,P<0.01]、结蛋白[(153 271.7±15 193.7 比 48 686.1±14 693.3)μm 2,P<0.01].结论细胞骨架蛋白α-微管蛋白、结蛋白表达上调,参与了高血压心血管重构时心肌细胞骨架重构.
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永生大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定
目的:建立永生性大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系.方法:采用改良胶原酶原位灌注法消化肝脏,经Nycodenz密度梯度离心分离、鉴定成年Sprague-Dawley大鼠的HSC.然后通过细胞克隆建立HSC系(HSC-PQ)并传代培养.结合细胞动力学、光镜、透射电镜及免疫细胞化学技术检测HSC-PQ系的倍增时间、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及结蛋白表达、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成等表型特征.结果:分离获得的HSC约为2X107细胞/只大鼠,细胞成活率＞95%,纯度＞90%,培养2 wk后几乎所有HSC均已活化.在此基础上经细胞克隆所得的HSC-PQ系表型类似成纤维细胞,倍增时间约75 h,可表达结蛋白、α-SMA以及除Ⅳ型胶原外的多种ECM成分(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等),且传代过程中增生、ECM表达等特性均保持稳定.该细胞系已在体外培养32代(1 a以上),提示其具有永生性.结论:已成功建立永生性大鼠HSC系,该细胞系的基本特征与活化的原代HSC相似.
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胰腺星状细胞在胰腺癌组织中的激活及其可能作用
目的探讨胰腺星状细胞在胰腺癌组织中的表达及其可能作用.方法应用免疫组化观察24例胰腺癌、3例慢性胰腺炎胰腺组织a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)和结蛋白(desmin)表达.结果24例胰腺癌、3例慢性胰腺炎胰腺组织a-平滑肌肌动蛋白均为阳性表达,且胰腺癌胰腺组织阳性染色均强于慢性胰腺炎胰腺组织.24例胰腺癌胰腺组织结蛋白阳性表达率为83.3%,而在3例慢性胰腺炎胰腺组织为0.结论胰腺星状细胞可能在胰腺癌的发生、发展中起一定作用.
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结蛋白与心脏疾病
心肌细胞结构和功能的完整有赖于由微丝,微管和中间丝组成的分布广泛的细胞骨架蛋白,结蛋白是心肌中主要的中间丝蛋白,对于维持心肌细胞结构和功能有重要的作用.结蛋白缺失破坏会导致心肌收缩力降低,导致各种心脏疾病的发生.本文就心脏疾病中结蛋白的变化及其对心功能的影响做一综述.
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心房颤动患者心房细胞结构的改变
目的 探讨心房颤动(房颤)发生后相关细胞结构和超微结构变化及其临床意义.方法 收集53例心脏外科手术患者,根据心律分为窦性心律组(窦律组,26例)和房颤组(27例).术前行超声心动图检查.手术中取右心耳组织,行石蜡包埋切片,HE染色后测定细胞直径,Masson染色测定胶原容积分数.用免疫组织化学方法检测结蛋白、N-钙黏素的分布变化.电镜观察超微结构变化.结果 与窦律组比较,房颤组心房细胞直径增加,与心房大小成正相关,心房纤维化明显,心肌出现不同程度的肌溶解现象,电镜观察发现细胞器、细胞连接异常.免疫组织化学检测显示房颤组中N-钙黏素分布不均一,结蛋白分布异常.结论 房颤后心房细胞结构改变是房颤复发和心房抑顿的结构基础.
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丹参酮ⅡA诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究
目的 探讨丹参酮ⅡA对骨髓间充质干细胞(BMSC)定向分化为心肌样细胞的影响.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养BMSC,第2代细胞应用终浓度为500 ng/ml丹参酮ⅡA定向诱导(诱导组),将不添加任何诱导剂的BMSC设为对照组.应用免疫细胞化学技术检测结蛋白、α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA-actin)和心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况.免疫荧光双标染色技术检测α-SCA-actin和cTnT的表达.透射电镜观察2组超微结构的改变.结果 免疫细胞化学染色结果显示,与对照组比较,诱导组BMSC中结蛋白(50279.6±2575.2) vs(1325.6±196.1)、α-SCA-actin(44 738.3±1963.3) vs (1446.3±202.4)、cTnT(27 658.8±2382.2) vs (1369.1±214.2)明显升高(P＜0.01).免疫荧光双标染色法检测诱导组α-SCA-actin阳性为红色,cTnT阳性为绿色,两者重叠部位为黄色,呈现共表达.透射电镜结果显示,诱导组细胞可见平行排列的肌丝并富含线粒体、糖原和核糖体以及丰富的粗面内质网.结论 经丹参酮ⅡA诱导的BMSC具有向心肌细胞分化的表型.
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老年人升主动脉夹层五例临床与病理分析
目的探讨老年人升主动脉夹层的临床表现与病理特点及其相互关系,并对该病的病因及发病机制进行简略探讨.方法分析5例老年人升主动脉夹层病例尸检切片,对其临床表现、病理特点、组织化学及免疫组织化学检测状况进行分析.结果老年人升主动脉夹层临床表现复杂多样.病理特点为夹层壁内平滑肌细胞明显退行性变,弹力纤维减少或断裂,胶原纤维增生等改变.结论升主动脉夹层是一种严重威胁老年人生命的急性血管疾病.诊断该病时要根据临床特点并配合MRI等辅助检查综合考虑.
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结蛋白相关心肌病转基因小鼠闰盘重塑
目的探讨结蛋白相关心肌病(DRC)闰盘相关蛋白表达和分布的变化.方法以1个月DRC转基因小鼠为模型,采用Western印迹和免疫标记共聚焦显微镜观察闰盘相关蛋白在心室中的表达和分布.结果与野生型结蛋白转基因小鼠和非转基因小鼠相比,突变型结蛋白小鼠pan-cadherin、α-catenin、β-catenin总蛋白升高(P<0.05)α-catenin和β-catenin以胞浆部分显著(P<0.05)pan-cadherin膜蛋白部分和胞浆部分升高(<0.05)而细胞骨架蛋白(TIF)部分降低;Cx43总蛋白和TIF则明显降低(P<0.05)存在着再分布.野生型结蛋白小鼠与非转基因小鼠比较,各蛋白均无显著变化.免疫标记证实这一结果.结论 DRC早期已发生闰盘重塑,闰盘蛋白表达和分布改变可能促进心律失常和心功能衰竭的发生.
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结蛋白和抗肌营养不良蛋白在老年腹股沟疝患者腹内斜肌中的表达及意义
目的 探索结蛋白和抗肌营养不良蛋白在腹内斜肌中的表达与老年腹股沟疝(inguinal hernia,IH)发病的关系.方法 选择40例老年IH患者为研究组,20例无IH的老年阑尾炎患者为对照组,术中取同一解剖部位的腹内斜肌活组织,应用HE染色和免疫组织化学及显微镜图象分析的方法,观察HE染色下肌组织的形态及免疫组化下检测肌细胞内结蛋白和抗肌营养不良蛋白的含量.结果 (1)HE染色图像分析表明:两组肌肉组织的形态学改变经分级后比较(P<0.05),有统计学意义;(2)免疫组织化学和图像分析方法表明:老年IH患者中结蛋白的含量与对照组比较明显减少(P<0.05);老年IH患者中抗肌营养不良蛋白的含量与对照组比较明显减少(P<0.05).结论 老年IH腹内斜肌的肌组织有明显的退行性改变,其肌细胞内结蛋白和抗肌营养不良蛋白表达减少,可能是老年IH发病的机理之一.
