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葡萄糖调节蛋白78通过调节上皮-间叶转化促进乳腺癌MCF-7的侵袭转移
目的：探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对乳腺癌细胞 MCF-7侵袭转移能力的影响和可能的分子机制。方法 pEGFP-N1-GRP78质粒转染至MCF-7细胞，通过筛选克隆获得GRP78高表达MCF-7细胞株（MCF-7-GRP78），同时将pEGFP-N1空载体转染细胞（MCF-7-空）作对照组，未处理细胞（MCF-7）作为空白对照。荧光显微镜观察绿色荧光，确定转染效果。通过细胞划痕实验检测三组细胞的迁徙能力，Western blot法检测三组细胞中GRP78、E-钙黏素、N-钙黏素的表达情况。结果（1）荧光显微镜观察细胞转染效果均很好。Western blot结果显示，与MCF-7细胞相比， MCF-7-GRP78细胞中GRP78含量明显增加（P＜0.05），而MCF-7-空细胞中GRP78的表达含量与之比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）细胞划痕实验显示，与MCF-7细胞相比，MCF-7-GRP78细胞的愈合能力明显增强，而MCF-7-空细胞与之差别不大。（3）Western blot结果显示：与MCF-7细胞相比，MCF-7-GRP78中N-钙黏素表达量升高（P＜0.05），E-钙黏素表达量下降（P＜0.05），而MCF-7-空细胞中E-钙黏素、N-钙黏素的表达含量与之差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 GRP78是一个促癌基因，GRP78可能通过上皮-间叶转化促进乳腺癌细胞的侵袭转移。
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心房颤动患者心房细胞结构的改变
目的 探讨心房颤动(房颤)发生后相关细胞结构和超微结构变化及其临床意义.方法 收集53例心脏外科手术患者,根据心律分为窦性心律组(窦律组,26例)和房颤组(27例).术前行超声心动图检查.手术中取右心耳组织,行石蜡包埋切片,HE染色后测定细胞直径,Masson染色测定胶原容积分数.用免疫组织化学方法检测结蛋白、N-钙黏素的分布变化.电镜观察超微结构变化.结果 与窦律组比较,房颤组心房细胞直径增加,与心房大小成正相关,心房纤维化明显,心肌出现不同程度的肌溶解现象,电镜观察发现细胞器、细胞连接异常.免疫组织化学检测显示房颤组中N-钙黏素分布不均一,结蛋白分布异常.结论 房颤后心房细胞结构改变是房颤复发和心房抑顿的结构基础.
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转录因子Twist在胰腺癌中的表达及在上皮间质转化中的作用
目的 探讨Twist介导的上皮间质转化在胰腺癌进展中的作用.方法 采用免疫组织化学法检测42例胰腺癌组织中Twist、N-cadherin及Vimentin蛋白的表达,26例癌旁组织作为对照.结果 胰腺癌组织中Twist、N-cadherin及Vimentin蛋白的阳性表达率分别为76.2％、59.5％和57.1％.Twist、N-cadherin 及Vimentin在26例癌组织及配对癌旁组织中的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(均P＜0.001);Twist、N-cadherin及Vimentin的表达均与肿瘤分化程度、TNM分期、神经浸润及淋巴结转移明显相关(P＜0.05).经Spearman等级相关性分析,Twist与N-cadherin及Vimentin在胰腺癌组织中的表达均呈正相关(r =0.506,P=0.001;r=0.417,P=0.006);N-cadherin及Vimentin在胰腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.462,P=0.002).结论 Twist可能通过诱导胰腺上皮细胞发生上皮间质转化促进胰腺癌侵袭转移.
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下调SOX9对肾细胞癌细胞侵袭能力影响研究
目的 SOX9是一个重要的转录因子,参与了多种肿瘤细胞的侵袭和转移过程,但是其在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)中的作用尚不清楚.本研究探讨SOX9在RCC侵袭中的作用及其相关机制.方法 通过免疫组织化学方法(Immunohistochemistry,IHC)检测人正常肾组织和RCC组织(n正常=12,n RCC=26)中SOX9蛋白表达;使用小干扰RNA(siRNA)沉默RCC细胞系7860中的SOX9;通过Transwell小室实验检测阴性对照(negative control,NC)和SOX9敲低(knockdown,KD)的7860细胞系的侵袭能力,并通过蛋白质印迹法检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchy-mal transition,EMT)上皮性标志物(E-cadherin)和间质性标志物(N-cadherin和vimentin)蛋白表达水平.结果 SOX9蛋白在人正常肾组织中相对表达水平为3.25±0.22,低于RCC组织的表达水平5.69±0.38,差异有统计学意义,t=4.246,P<0.001;Transwell结果显示,下调SOX9可以抑制RCC 7860细胞的侵袭能力,其中NC组、KD1组和KD2组侵袭细胞数分别为46.67±4.41、25.21±2.89和23.38±3.46,差异均有统计学意义(NC组与KD1组比较:t=4.111,P=0.0147;NC组与KD2组比较:t=4.221,P=0.0135);7860细胞系中下调SOX9可引起E-cadherin表达上调,N-cadherin和vimentin表达下调.结论 SOX9参与了RCC的侵袭过程,可作为RCC靶向治疗的潜在靶点.
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N-钙黏素融合蛋白抑制P19分化伴随的细胞凋亡
目的:讨论N-钙黏素融合蛋白N-cad-Fc对P19细胞分化过程中伴随的细胞凋亡的影响.方法:分子生物学技术制作N-钙黏素融合蛋白N-cad-Fc.视黄酸(retinoic acid,RA)诱导P19细胞分化,培养于明胶(gelatin)包被培养板上的P19细胞为对照组,普通光学显微镜观察其神经分化情况,TURNEL法和DNA片段化分析法检测细胞凋亡情况,alamarBheTM染色法检测细胞存活情况.结果:培养于N-cad-Fc包被培养板上的P19细胞经RA诱导分化后细胞形态与明胶包被培养板上P19细胞分化形态一致,但分化过程中伴随的凋亡现象被明显抑制,分化诱导后细胞的存活率大大提高.结论:使用N-cad-Fc融合蛋白培养技术可以在不影响细胞分化状态的前提下降低分化过程中细胞的死亡率,为开发低死亡率的高效细胞分化诱导方法创造了条件.
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胰腺癌中CIP2A与p-Akt、N-cadherin、MMP-9的表达及其临床意义
目的:探讨胰腺癌组织中蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(CIP2A)、p-Akt、N-cadherin及MMP-9蛋白的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学法检测42例胰腺癌及癌旁组织中CIP2A、p-Akt、N-cadherin和MMP-9的表达情况,分析其与临床病理因素的关系.结果:CIP2A在胰腺癌及癌旁组织中的表达率分别为71.4％、7.7％,差异有统计学意义(P＜0.05); p-Akt在胰腺癌及癌旁组织中的表达率分别为66.7％、11.5％,差异有统计学意义(P＜0.05).N-cadherin在胰腺癌及癌旁组织中的表达率分别为59.5％、7.7％,差异有统计学意义(P＜0.05).MMP-9在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达率分别为61.9％、15.4％,差异有统计学意义(P＜0.05).CIP2A、p-Akt在胰腺癌组织中的表达与分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(均P＜0.05),N-cadherin、MMP-9在胰腺癌组织中的表达与分化程度、TNM分期、神经浸润、淋巴结转移明显相关(P＜0.05).胰腺癌组织中,CIP2A和p-Akt、N-cadherin和MMP-9的表达均呈正相关(均P＜0.05);p-Akt与N-cadherin及MMP-9的表达均呈正相关(P＜0.05); N-cadherin与MMP-9的表达呈正相关(P＜0.05).结论:CIP2A参与了胰腺癌恶性进展,可能通过PI3K/Akt信号通路诱导上皮间质转化,促进胰腺癌增殖、侵袭和转移.CIP2A有望成为治疗胰腺癌的一个靶向治疗基因.
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星形细胞肿瘤中TSLC1、N-钙黏素和Ki-67的表达及其临床价值
目的 探讨肺癌肿瘤阻抑基因1(TSLC1)、N-钙黏素(N-cd)和Ki-67在星形细胞肿瘤中的表达变化及其在星形细胞肿瘤发生发展中的作用和对患者预后的影响.方法应用免疫组化SP法检测71例星形细胞肿瘤中TSLC1、N-cd和Ki-67的表达.结果Ⅲ、Ⅳ级星形细胞肿瘤与Ⅰ、Ⅱ级相比,TSLC1和N-cd的平均光密度值小(P<0.01),Ki-67平均光密度值随肿瘤病理分级的增加而增高(P<0.05).TSLC1与N-cd的表达呈正相关(rs=0.601,P<0.01),与Ki-67的表达呈负相关(rs=-0.460,P<0.05).71例中TSLC1阳性表达患者较阴性表达患者的中位生存期长(P<0.01),Ki-67阴性表达患者比阳性表达患者中位生存期长(P<0.05).结论对星形细胞肿瘤患者进行TSLC1、N-cd和Ki-67的检测可评估肿瘤的恶性程度并判断患者预后.
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上皮-间充质转化相关分子与三阴性乳腺癌不良预后的相关性
目的 检测三阴性乳腺癌(TNBC)患者的上皮-间充质转化(EMT)标记分子(波形蛋白、平滑肌肌动蛋白、骨粘连蛋白、N-钙黏素以及E-钙黏素缺失)和EMT诱导分子锌指E-盒结合同源异形盒-1 (ZEB1)的表达,探讨它们的表达与TNBC的临床病理特征之间的联系.方法 对173例TNBC乳腺癌样本上述EMT相关分子免疫组织化学检测,并将这些分子的表达与疾病的临床病理特征进行相关分析.结果 波形蛋白在基底样TNBC (87/154,56.5％)中的表达多于非基底样TNBC(3/17,17.6％).ZEB1的表达只与平滑肌肌动蛋白的表达有相关性(P =0.002).生存分析显示波形蛋白(P=O.515)、平滑肌肌动蛋白(P=0.739)、骨粘连蛋白(P =0.094)、N-钙黏素(P=0.509)和E-钙黏素(P=0.925)与患者的预后没有明显相关,而ZEB1可作为不良无病生存期的独立预后因素(P=0.007).结论 EMT相关分子可作为TNBC分化型亚组的独特标记.
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结肠癌组织Biglycan的表达与上皮间质转化的相关性
目的:探讨结肠癌组织中双糖链蛋白聚糖(Biglycan)的表达与上皮间质转化(EMT)的关系.方法:收集8对结肠癌同患者的癌及癌旁组织,采用免疫组织化学、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测组织中Biglycan、上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间质标记物N-钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,分析结肠癌组织中Biglycan与细胞EMT的相关性.结果:与癌旁组织相比,结肠癌组织中Biglycan的表达显著上调(P＜0.05);E-cadherin的表达显著降低(P＜0.05);间质标记物N-cadherin、vimentin表达显著升高(P＜0.05).结论:Biglycan在结肠癌组织的表达上调可能是通过启动EMT的发生来实现,并促进肿瘤的侵袭转移.
