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活性氧激活内质网诱导软骨细胞凋亡的研究
目的 探讨应力诱导的人软骨细胞凋亡过程中活性氧(ROS)与内质网应激(ERS)的作用关系.方法 分离培养人膝关节软骨细胞,应用细胞牵张力加载系统对各组软骨细胞分别加载0 h、6 h、12 h和24 h,在各受力组中加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为抑制剂组.RT-PCR和Western blot检测各组细胞中内质网应激标志因子Caspase-12的表达;DCFH-DA法检测细胞中ROS的含量;流式细胞术检测细胞凋亡率,SPSS 17.0统计软件处理实验数据,组间比较采用t检验.结果 RT-PCR和Western blot检测Caspase-12结果显示:2 h表达量开始增加;24 h达峰值;NAC抑制剂组,与受力组相比,表达明显降低(P<0.05);DCFH-DA检测ROS结果显示:受力2 h后含量明显增加,24 h达峰值;NAC抑制剂组,相较于受力组,明显降低(P<0.05);细胞凋亡率检测结果显示:受力2 h后凋亡率开始增加,24 h达峰值,而NAC抑制剂组,与受力组相比,显著下调(P<0.01).结论 应力诱导软骨细胞凋亡过程中,ROS可能作为上级信号激活内质网应激途径参与软骨细胞凋亡.
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周期性张应力作用下软骨细胞半胱氨酸蛋白酶12的表达规律
背景：过度力学刺激可引起细胞内质网应激，内质网应激在退行性疾病的发生发展过程中扮演重要角色，半胱氨酸蛋白酶12是内质网应激的特异性分子，内质网应激的强弱程度可由半胱氨酸蛋白酶12表达水平来体现。目的：观察周期性张应力作用下软骨细胞半胱氨酸蛋白酶12的表达规律。方法：以人软骨细胞为实验对象，对实验细胞成功分组后，运用细胞牵张力学加载系统，将加力组及其配对的相应Z-ATAD-FMK抑制剂组分别给予2，12，24，36，48 h的力学刺激条件，空白组(0 h)及其配对的Z-ATAD-FMK抑制剂组除不加力外培养条件和加力组完全相同。规定加力时间终止后，显微镜下观察细胞形态变化及生长状态，随即采用RT-PCR和Western blot检测各组半胱氨酸蛋白酶12基因和蛋白表达变化规律。结果与结论：①细胞形态学观察结果显示，从加力2 h开始，细胞出现凋亡，到24 h此现象明显，随着加力时间延长，细胞出现顺应力生长趋势，但细胞凋亡现象减弱。说明周期张应力可以使软骨细胞凋亡，内质网应激可能被激活，细胞体外受力模型建立成功；②半胱氨酸蛋白酶12基因与蛋白随时间延长表达趋势一致，加力24 h表达量达高峰，与空白和抑制剂组相比，差异均有显著性意义(P<0.05)；③以此得出，周期性张应力可引起软骨细胞内质网应激，并影响半胱氨酸蛋白酶12表达。
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二甲双胍对2型糖尿病大鼠海马ATF6和Caspase12表达的影响
目的 探讨二甲双胍对2型糖尿病大鼠海马活化转录因子6(Activating transcription factor-6,ATF6)和半胱氨酸蛋白酶12(Caspase12)表达的影响.方法 将随机血糖≥11.1 mmol/L的GK雄性大鼠分别予以生理盐水和二甲双胍(85 mg?kg-1?d-1)灌胃处理,连续给药8周,每组10只,选取Wistar雄性大鼠为正常组(n=10).测定大鼠在给药8周后体重、空腹血糖状况,观察海马CA1区组织HE染色细胞形态,免疫组织化学染色观察海马ATF6、Caspase12表达.结果 与正常组相比,模型组和二甲双胍组的体重均降低(P<0.05),但模型组和二甲双胍组体重差异无统计学意义(P>0.05).与正常组相比,模型组和二甲双胍组的空腹血糖显著升高(P<0.05),二甲双胍组较模型组空腹血糖显著降低(P<0.05).模型组和二甲双胍组海马CA1区正常神经细胞较对照减少(均P<0.05),尤以模型组更为明显.与正常组相比,模型组和二甲双胍组ATF6、Caspase12蛋白表达明显增多(均P<0.05),二甲双胍组较模型组ATF6、Caspase12蛋白表达明显减少(均P<0.05).结论 二甲双胍可减少2型糖尿病大鼠海马ATF6和Caspase12的表达,该作用可能与其脑保护作用有关.
