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高糖对肾组织干细胞基本特征的影响
目的：评估高糖对肾组织干细胞（KSC）基本特征的影响。方法分离肾乳头处KSC，比较其在高糖（30 mmol/L）和正糖（5.6 mmo l/L）培养基的微环境下细胞形态、增殖能力、相关表型标记物的改变。结果细胞增殖检测结果提示从第4天开始高糖组细胞生长较正糖组缓慢；免疫荧光结果提示KCS经高糖处理后，纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的合成增加；qRT-PCR检测结果显示KSC经高糖干预后，纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原mRNA 表达增高，间质标记物α-SMA、Vimentin基因表达进一步升高，促纤维化因子TGF-β、CTGF、PAI-1 mRNA表达均升高。结论 KSC在高糖的微环境中细胞增殖能力下降，促纤维化基因表达增高。
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肾组织干细胞治疗急性肾衰竭的可行性
背景:研究表明,肾组织干细胞主要存在于肾乳头部位,其具有类似于间充质干细胞的特性,目前尚不能肯定其是否参与了肾小管上皮细胞损伤的修复.目的:探讨肾组织干细胞治疗急性肾衰竭的效果及可行性.方法:纳入40只SD大鼠,10只用于肾组织干细胞培养,其余30只随机分为3组,实验组和对照组制备急性肾衰竭动物模型,正常组不做任何处理.模型制备后6h,实验组尾静脉注入肾组织干细胞,对照组注入相同剂量的生理盐水,正常组不做任何处理.移植后10d检测肾功能,获取肾组织标本进行组织学观察.结果与结论:①对照组的尿素氮、肌酐水平均显著高于正常组和实验组(P＜0.05);实验组与正常组之间差异无显著性意义(P＞0.05);②正常组皮质和外髓质小管未出现异常改变,无炎性浸润;对照组外髓质小管萎缩,炎症细胞浸润,上皮细胞肿胀;实验组有轻微炎症细胞浸润和细胞肿胀等病变,但较对照组明显较轻;③结果表明,肾组织干细胞移植能有效改善急性肾衰竭大鼠的肾功能,促进上皮细胞再生,达到良好的组织修复效果.
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肾组织干细胞向肾小管上皮细胞的诱导分化
目的：探讨肾组织干细胞向肾小管上皮细胞的诱导分化。方法分离肾乳头肾组织干细胞，对照组加入正常干细胞培养基，诱导组应用含activin A、BMP-7、维甲酸3种细胞因子的诱导培养基与肾上皮细胞培养基交替诱导，同时与缺氧损伤的肾小管上皮细胞共培养，通过细胞流式、免疫荧光、qRT-PCR的方法评估诱导效率。结果细胞流式结果提示，对照组肾组织干细胞CK-18阳性率为6.5%，诱导组CK-18阳性率为44.2%；免疫荧光结果提示，诱导组成熟上皮细胞标记CK-18、E-cadherin、ZO-1部分阳性表达；qRT-PCR结果提示，诱导组成熟上皮细胞标记E-cadherin、AQP-1基因表达水平较对照组显著升高（P<0.01）。结论肾组织干细胞在体外可以诱导分化为肾小管上皮细胞。
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大鼠肾组织干细胞的分离培养与鉴定
目的 分离培养及稳定扩增大鼠肾组织干细胞(kidney stem cell,KSC),并鉴定其生物学特征及干细胞特性.方法 从4周龄雄性SD大鼠双肾肾乳头处分离培养KSC,倒置显微镜下观察细胞形态特征,通过流式细胞、免疫荧光技术鉴定KSC的表型特征,通过成骨、成脂诱导分化鉴定其分化能力,并通过实时定量荧光PCR(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)比较KSC与大鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cell,RTEC)基因表达的差异.结果 KSC呈纺锤形或树枝状生长;免疫荧光结果显示KSC可表达平滑肌肌动蛋白(alpha-sooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙粘蛋白(N-Cadherin)、神经巢蛋白(Nestin)、CD133,不表达钙粘蛋白-E (E-Cadherin)、细胞角蛋白(cytokeratin-18,CK-18)、紧密连接蛋白(zona occludens protein-1,ZO-1);细胞流式结果显示,CD29、CD90、CD73表达比率分别为99.0％、95.8％和99.9％,CD45阳性率为3.4％;干细胞标记CD133和Nestin阳性率分别为33.2％和70.2％,双阳性率为31.4％;成脂诱导后油红O染色呈红色,成骨诱导后早期成骨细胞分化标志茜素红染色呈橙红色;qRT-PCR结果显示,与RTEC相比,原始胚胎干细胞标记物Nanog、Oct4/pou5f1、Sox2/sry-box-2的mRNA表达量在KSC中增高(P＜0.01),间质标记物α-SMA、Vimentin mRNA表达量在KSC中增高(P＜0.01),而成熟的上皮细胞标记物E-Cadherin、CK18mRNA表达量在KSC中降低(P＜0.01).结论 肾乳头部位可以分离培养并稳定扩增出具有间充质干细胞特性的KSC.
