首页 > 文献资料
-
氰化氢复合中毒对大鼠血中氰离子和细胞色素氧化酶活力的影响
火灾烟雾中有毒气体的成分复杂,但在火灾现场能达到足够浓度引起急性中毒或致死效应的只有一氧化碳(CO)和氰化氢(HCN)气体[1],而其他主要引起感官和肺的刺激效应,或产生一些迟发性的中毒效应.现代装璜和家具中大量高分子聚合物的使用,燃烧烟雾中剧毒HCN气体的产生有了明显增加,使火灾烟雾的毒性也随之提高.本文以火灾烟雾中2种主要的致死性有毒气体HCN和CO为研究对象,测定二者单独或复合中毒时大鼠血中氰离子([CN-])和细胞色素氧化酶活力的变化.
-
细胞色素氧化酶P450研究新进展
细胞色素氧化酶P450(CYP450)是一类参与内源性和外源性化合物代谢的酶,主要存在于生物体的内质网内,属于混合功能氧化酶系统中的一种.这类酶有许多种同工酶,存在于细菌,真菌,植物及动物体内,已有35亿年的历史.
-
3-11 中草药防治镍毒性的研究
目的镍是常见的环境和工业污染物之一.我们就硫酸镍(NiSO4)对小鼠免疫毒性,心、肝肾功能,血液系统,精子畸变和畸变机制及扶正补血冲剂的防治作用.方法与结果NiSO4能(1)抑制小鼠免疫功能;(2)抑制大鼠心肌细胞膜钠钾泵活性,诱发心肌缺血,传导阻滞,大剂量出现心律失常;(3)抑制大鼠心肌线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素氧化酶(CCO)、细胞色素C和aa3的活性;(4)增强大鼠肝脂质过氧化作用,降低钙调素(CaM)和Ca-ATPase的活性,使肝功损伤;(5)抑制大鼠肾小管膜Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活性,致肾损伤,BUN、PAH和尿蛋白含量升高;(6)降低小鼠骨髓内幼红细胞内铁的含量,抑制骨髓有核细胞DNA、RNA的生成,异常红细胞增生,粒细胞减少;(7)抑制小鼠精子活力,损伤精原细胞染色体,致精子畸变.扶正补血冲剂(FBC)可纠正NiSO4引起的免疫功能低下,防治NiS04导致的心肌线粒体酶和钠钾泵损伤,使心肌供血充盈,心电恢复正常.亦可增强CaM和Ca2+-ATPase、SOD和GSH的活性,使ALT、AST、BUN、PAH恢复正常.FBC能修复骨髓有核细胞DNA RNA,升高幼红细胞内铁,使外周血象得以回升.PBC有抗突变作用,可降低镍引起的精子畸变率.FBC中富含Mg,对镍有桔抗作用,其药理活性与用药剂量呈正相关.结论扶正补血冲剂可防治镍毒性.
-
900MHz微波电磁辐射对原代培养的大鼠脑皮质神经元能量代谢的影响
目的研究900MHz微波电磁辐射对原代培养的大鼠脑皮质神经元能量代谢的影响.方法将大鼠脑皮质神经元暴露于900MHz的连续性微波电磁辐射(SAR=3.22mW/g、PD=9mW/cm2),每天暴露2h,连续4d或5d,及一次性12h暴露,以细胞色素氧化酶为观察指标,研究微波对神经元能量代谢的影响.结果微波电磁辐射可使神经元细胞色素氧化酶活性降低.结论神经元细胞色素氧化酶活性的改变并非"致热效应"所致;微波电磁辐射对神经元细胞色素氧化酶活性影响有蓄积毒性作用,其影响在一定程度上是可恢复的,并且与神经元接受微波辐射时细胞培养年龄关系不密切.
-
甲醛对原代培养大鼠皮质神经元能量代谢的影响
目的探讨甲醛对中枢神经系统毒作用的机制.方法本文对新生大鼠原代培养皮质神经元进行了剂量分别为1,2,4,8mg/L培养基的甲醛暴露实验,以在培养基中添加甲醛的方式染毒,每小时染毒一次,4小时后,用细胞化学方法,以细胞色素氧化酶(cytochromeoxidase,COX)活力为指标,观察甲醛对神经元能量代谢的影响.结果与对照组相比,各实验组神经元COX活力均明显降低(P<0.01),并呈剂量-效应关系(R值为-0.92,P<0.01).结论本文结果提示,过量甲醛暴露可降低神经元COX活力,导致能量代谢障碍,进而影响其正常的生理功能.
-
铅对原代培养大鼠神经元能量代谢及谷氨酸受体 2蛋白和mRNA表达的影响
目的探讨铅影响神经元细胞内钙稳态的机理.方法对新生大鼠原代培养海马神经元进行了pB2+剂量为500ug/L升培养基的铅暴露实验,观察铅对神经元能量代谢和谷氨酸受体2(GluR2)蛋白和mRNA表达的影响.结果细胞化学、免疫组织化学和原位杂交结果表明,染毒3天后,与对照相比,实验组神经元细胞色素氧化酶(CytO)活力、GluR2蛋白和mRNA的表达均明显降低(P＜0.01).结论铅可能通过影响共同转录因子,一方面使神经元CytO活力降低,导致能量代谢降低,生理功能受到影响,另一方面减少GluR2蛋白和mRNA表达,引起Ca2+大量内流,从而导致细胞内钙超载.
-
结核分枝杆菌通用检测方法的建立及应用
目的 建立一种快速检测结核分枝杆菌的方法,并探讨其临床应用价值.方法 以结核分枝杆菌细胞色素氧化酶(CYP141)基因为靶点设计多对引物和探针,用BLAST软件分析其特异性,优化PCR反应条件,用国家标准品(阴性参考品15份、阳性参考品15份、低检出量参考品4份及重复参考品10份)和124份经培养鉴定的临床样本(结核分枝杆菌阳件75份)验证方法的可靠性和临床应用价值.结果 国家阴性和阳性参考品的符合率均为100％,低检出量参考品为不高于1×102 cfu/ml;10份重复参考品均呈阳性,对临床样本检测的灵敏性和特异性分别为96.00％、97.96％,总符合率为96.77％,一致性好(Kappa值=0.933;x2=104.21,P＜ 0.001).结论 建立了结核分枝杆菌通用型核酸检测方法,适用于卫生检疫系统和临床实验室应用.
-
针刺对糖尿病合并脑缺血大鼠海马细胞色素氧化酶的影响
目的:探讨细胞色素氧化酶(COX)在糖尿病合并脑缺血发病机制中的作用及针刺对其的影响.方法:采用腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)建立糖尿病动物模型,注射后3 d用颈总动脉阻断法建立脑缺血模型.注射STZ 7 d后测定空腹血糖,高于15.5 mmol/L定为糖尿病模型,术后1个月经行为学测定确定糖尿病脑病模型.动物分为正常对照组(n=5)、糖尿病+假手术组(n=5)、糖尿病+脑缺血组(n=6)、糖尿病+脑缺血+针刺组(n=6),采用组织化学方法观察大鼠海马CA1区和CA3区COX活性反应物的分布,用图像分析仪对其光密度进行测定.结果:糖尿病脑缺血组的大鼠海马CA1和CA3区的COX光密度明显低于正常(P<0.001),而针刺组高于糖尿病脑缺血组(P<0.001).结论:糖尿病脑缺血可导致大鼠脑内海马CA1和CA3区的COX活性降低,针刺可以提高这两个区域的COX活性,从而提高细胞代谢的水平.
-
紫檀芪对脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区ATP酶、COX活性影响
目的:观察紫檀芪对脑缺血/再灌注损伤大鼠海马CA1区ATP酶、细胞色素氧化酶活性的影响.方法:采用大鼠大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,将27只SD雄性大鼠随机分为3组:假手术组、缺血/再灌注组、紫檀芪组,检测各组大鼠海马CA1区ATP酶、C0X活性的变化.结果:缺血/再灌注组海马CA1区ATP酶、COX活性均明显下降(P＜0.01)；紫檀芪组海马CA1区ATP酶、C0X活性高于脑缺血/再灌注组(P＜0.05).结论:紫檀芪对脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区能量代谢具有一定干预作用.
-
牛磺酸对大鼠在体缺血再灌注心肌线粒体呼吸酶系的影响
观察牛磺酸对大鼠缺血再灌注损伤心肌线粒体呼吸酶活力变化的影响及机理.结果表明 :牛磺酸保护组的琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素氧化酶(CCO)、SOD及GSH·Px活力均较缺血再灌注损伤非保护组有显著升高(P<0.01),而MDA含量则明显降低(P<0.01).提示牛磺酸对缺血再灌注损伤心肌线粒体SDH及CCO活力有很好的保护作用,其机理可能是通过提高对氧自由基清除及抑制脂质过氧化作用而实现.
-
呼吸链的电子漏路径和线粒体的超氧自由基代谢及其生物学意义
吸入机体的氧气90%以上在线粒体中被还原,呼吸链是执行这一功能的实体.呼吸链如同一条电子传递链,它的底物端有两个脱氢酶直接氧化三羧循环中的底物并将电子经泛醌传递给细胞色素链,细胞色素链的氧端是细胞色素氧化酶,它直接催化还原氧成水的反应.呼吸链电子传递还原氧的过程与ATP酶催化ADP+P→ATP的过程相偶联共同完成线粒体合成ATP的能量代谢,这是近半个世纪以来生物能力学研究的主题.近年来人们发现呼吸链传递电子并不像是一条绝缘很好的导线,而是在呼吸链的底物端(泛醌区)和氧端(细胞色素c)都有漏电现象.呼吸链漏出的电子没有参加合成ATP的能量代谢过程,而是参与了线粒体内生成超氧自由基和双氧水以及由此进一步产生其他活性氧自由基的自由基代谢过程.本文就这几年来我们对呼吸链电子漏现象的研究及其生物学意义做一些介绍.
-
骨髓增生异常综合征与线粒体细胞色素氧化酶基因突变初探
骨髓增生异常综合征(MDS)与线粒体基因突变的关系是近年来血液肿瘤发病机制研究的热点.本研究旨在分析MDS患者线粒体细胞色素氧化酶基因COI和COII是否存在不同于正常组织的突变,这些突变是否为"热点突变".18例MDS患者纳入本研究,患者年龄20-70岁.18例中RA 2例,RCMD 3例,RAEB 7例,AML(MDS转化)5例,MPD/MDS 1例.分别提取MDS患者骨髓单个核细胞和颊粘膜细胞的总DNA,用PCR方法扩增线粒体细胞色素氧化酶基因COI和COII的高度突变区,以获得528 bp(7181-7709)基因片段,产物经纯化后双向测序,将结果与DNA文库标准序列和患者自身正常组织对应序列比较,对突变结果进行分析.结果表明:所检测的18例患者线粒体细胞色素氧化酶基因COI和COII中高度突变区528 bp的片段中共发现3个单核苷酸序列突变,分别为7674T→C,7353 A→G和7702 Ins G.前2个突变存在于相同个体的颊黏膜细胞和骨髓细胞,导致编码的异亮氨酸改变为蛋氨酸,蛋氨酸改变为缬氨酸.7702 Ins G插入仅见于骨髓细胞,导致移码,这可能与MDS细胞突变有关.结论:本研究病例中没有发现文献报道的细胞色素氧化酶基因COI和COII"热点突变",但发现3个新突变,提示mtDNA突变在MDS发病中仍然是一个异质性很大的复杂现象,可能是疾病过程中的一个前期或伴随现象.
-
细胞色素氧化酶与琥珀酸脱氢酶双重染色在线粒体肌病诊断中的应用
细胞色素氧化酶（ cytochrome oxidase， COX）与琥珀酸脱氢酶（ succinate dehydrogenase， SDH）均为细胞有氧代谢的重要酶，二者均定位于线粒体内膜，是线粒体的标志酶。文献记载有Seligman、Moog、Butcher等多种方法显示组织切片的COX，我们选用Seligman的二氨基联苯胺法（ DAB）法检测COX［1］，并做一定的配方改良，阳性结果呈棕黄色；常用Nachlas法或Pearson法显示SDH，我们采用Nachlas硝基盐四唑法显示SDH［2］，阳性结果呈紫蓝色颗粒。我们将两种显示不同酶的方法在同一张切片上进行染色，对于临床诊断倾向线粒体肌病的病例有着非常重要的意义。阳性的染色结果色彩对比鲜明、定位准确，便于观察与诊断，值得推广应用。
-
一氧化碳中毒的视力损害
一氧化碳为窒息性气体,经呼吸道吸入后与血液中的血红蛋白结合成碳氧血红蛋白,能够降低血红蛋白的携氧能力,造成细胞缺氧;同时,较高浓度的一氧化碳还能抑制细胞色素氧化酶与铁的结合,抑制呼吸过程,使组织缺氧更加严重.目前,我们对一氧化碳中毒所致的中枢神经系统损害和心肌损害已经有了充分的认识,但对一氧化碳中毒所导致的视力损害尚缺乏认识.实际上,一氧化碳中毒的视力损害是普遍存在的,尤其重度一氧化碳中毒可有严重的视力损害,甚至引起失明.一氧化碳中毒对视力的损害可有以下几个方面的病理生理学机制.
-
成人型Ⅱ型糖原累积症一例
患者女，36岁，因胸闷心悸7月余，加重伴双下肢乏力、水肿10 d于2010年入院。7个月前于劳累后出现胸闷、心悸症状，自觉心跳加快，无胸痛，无头痛头晕，无黑矇晕厥，无大汗淋漓，持续数分钟，休息后可缓解，未予重视。后每于劳累后反复出现上述症状。2个月前上述症状加重，持续时间明显延长，家人诉其睡眠时口唇及指甲紫绀明显，仍未就诊。10 d前患者再次出现胸闷、心悸，伴夜间阵发性呼吸困难，双下肢乏力、中度凹陷性水肿，来我院就诊。入院查体：神志清楚，语音低微，双眼睑下垂，呼吸力弱，口唇及指端发绀，心肺腹查体未见明显异常；双上肢近端肌力5级，远端肌力5-级，双下肢近端肌力3级，远端肌力2级，骨盆带及双下肢肌肉轻度萎缩，四肢肌张力降低，腱反射消失，病理征阴性。辅助检查：血常规、C反应蛋白、红细胞沉降率、IgE、肾功能电解质、肌酸激酶（CK）、CK-MB、肌钙蛋白I、抗核抗体全套、抗sDNA、抗中性粒细胞抗体全套均无明显异常。头颅CT未见明显异常。胸部X线片：（1）两肺纹理增多增粗、模糊；（2）右上肺肺不张可能；炎症待排；（3）右侧胸膜反应。肌电图：（1）未见周围神经损害；（2）可疑肌源性损害；（3）重复电刺激见可疑递减现象。睡眠监测示：肺泡低通气综合征。超声心动图提示：中量心包积液。新斯的明试验阴性，乙酰胆碱受体抗体检测阴性。股四头肌肌肉病理活检：特殊染色及免疫组化：慢肌球蛋白重链（MHCs），肌球蛋白快速重链（MHCf），还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶-四氮唑还原酶染色（NADH-TR），三磷酸腺苷酶染色（ATPase pH9.4），细胞色素氧化酶染色（COX），细胞色素氧化酶/琥珀酸脱氢酶染色（COX/SDH），琥珀酸脱氢酶染色（SDH）均（-），肌肉分型好，Ⅰ、Ⅱ型纤维内均见嗜碱性物质沉积，PAS染色阳性，经过唾液淀粉酶消化后消失[PASD（-）]，未见明确坏死再生纤维[MHCd（-），MHCn0（-）]，未见明确破碎红细胞，细胞间脂滴油红O（+），考虑Ⅱ型糖原累积病可能性大（图1，2）。
-
人大肠癌转移相关基因片段的筛选和鉴定
目的:初步筛选和鉴定大肠癌转移相关基因,阐述大肠癌转移的分子机制.方法:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),在一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480间,已成功构建了人大肠癌转移促进基因和转移抑制基因的两个cDNA消减文库.从以上两个文库中随机挑取约200个菌液PCR片段,利用Differential screening(DS)方法筛选真正差异表达的cDNA片段,之后通过Northern blot对部分差异cDNA片段的DS筛选结果进行验证.后对筛选出的差异cDNA片段进行测序和同源检索,分析其性质并初步探讨其在大肠癌中转移中的可能机制.结果:约200个菌液PCR片段经过DS筛选后,共获得29个真正差异表达cDNA片段,利用Northern blot对其中4种cDNA片段的表达情况进行验证,结果与DS筛选一致.然后对29个差异cDNA片段进行测序和同源性分析,得到25个差异表达基因,10个为已知基因,其中5个基因在高转移细胞株SW620中差异表达,可能有促进转移的作用,包括热休克蛋白10(heat shock protein10,HSP10)、细胞色素氧化酶Ⅱ(cytochrome C oxidaseⅡ,COXⅡ)、有丝分裂调控蛋白dis3人同源物(mitotic control protein dis3 homolog,DIS3)、骨骼肌αl-肌动蛋白(skeletal muscle actin alpha1,ACTAl)及血浆淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA);另外5个基因的表达仅见于在SW480低转移细胞株,具有潜在的转移抑制作用,包括egl nine homolog 2(EGLN2)、真核翻译起始因子4A(eukaryotic translation initiation factor4A,EIF4A)、人细胞色素氧化酶Ⅲ的类似物(similar to cytochrome c oxidase Ⅲ,COXⅢ)、谷胱甘肽S转移酶3(glutathione S-transferase mu 3,GSTM3)及线粒体DNA(mitochondrion DNA,mtDNA).10个已知基因基本上是一些与细胞生长分化、代谢合成、转录、凋亡及信号转导等相关的基因.除DIS3和SAA外,其余基因与大肠癌转移的关系在本研究中首次被报道.此外,还筛选到15个未知基因片段,通过与人基因组序列进行比对,发现其中6个基因定位于5号染色体上,包括4个可能促进大肠癌转移的基因和2个抑制基因.目前这15个未知基因片段已经被GeneBank dbEST库收录,GeneBank登陆号为CD485499-CD485513.结论:DS技术是一种筛查表达文库的有效途径;细胞的生长分化、转录、凋亡、信号转导等变化可能在大肠癌转移过程中发挥重要作用;5号染色体上可能存在多个与大肠癌转移相关的新基因位点.
-
益心康含药血清对氧应激致大鼠心肌线粒体呼吸链酶损伤的保护作用
目的研究氧应激对大鼠心肌线粒体呼吸链酶活性的影响及中药复方益心康胶囊(H303)含药血清对损伤的保护作用.方法利用氧应激损伤体系(Fe2+/VitC)与大鼠心肌线粒体共同孵育30min,观察对线粒体呼吸链酶-琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素氧化酶(CCO)的影响.结果大鼠心肌线粒体氧应激后,可致SDH及CCO活性明显降低.H303含药血清可使损伤明显减轻,表现为明显增强上述两种酶的活性.结论H303含药血清对氧应激造成的线粒体呼吸链关键酶活性的降低具有保护作用.
-
细胞色素氧化酶mRNA在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达变化
目的 观察85%高浓度氧(高氧)暴露下早产新生大鼠肺组织的病理改变及线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基(COⅪ、COⅫ、COⅩⅢ)mRNA表达的动态变化,探讨其在早产大鼠高氧肺损伤发生、发展中的可能作用.方法 早产SD大鼠生后1 d随机分为空气组、高氧组.高氧组持续暴露于85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中.两组分别于暴露满1、4、7、10和14 d时,每组取动物8只,行肺组织病理学检查,半定量逆转录聚合酶链反应测定COⅪ、COⅫ和COⅩⅢ mRNA的表达.结果 (1)高氧暴露4 d即可见肺泡炎和肺发育滞后的改变.(2)与同时间点空气组相比,高氧暴露1 d和4 d时,COⅪmRNA的表达显著增强(P＜0.05和P＜0.01),其后开始下降,7d时两组差异无显著性(P＞0.05),10 d时较空气组显著降低(P＜0.01),14 d时复又增高,且明显高于空气组,差异有非常显著性(P＜0.01).COⅫ和COⅩⅢ mRNA在各时间点的表达差异无显著性.结论 85%高氧暴露诱导早产新生大鼠肺组织线粒体DNA编码COX亚基异常表达,这种变化可能参与了高氧肺损伤的发生.
-
含二氮嗪停搏液对缺血再灌注心肌能量代谢保护作用研究
目的观察线粒体内膜三磷酸腺苷敏感钾离子通道开放剂二氮嗪加入停搏液内对缺血再灌注大鼠心肌能量代谢的保护作用.方法 50只大鼠随机分为五组,每组10只,取离体心脏;A组取正常心肌,其余制备离体工作心脏灌注模型;B组停灌30 min,复灌60 min;其余三组分别灌注不同的停搏液,C组灌注停搏液,D组灌注含二氮嗪的停搏液,E组灌注含二氮嗪停搏液之前10 min给予格列苯脲,各组复灌30 min后进行工作模式心脏灌注,监测心率、左室收缩峰压和舒张末压.实验终了取心肌,提取线粒体,测定细胞色素氧化酶活性、线粒体H+-三磷酸腺苷酶活性;高效液相法测定心肌含量.结果缺血再灌注心肌线粒体细胞色素氧化酶活性和线粒体H+-三磷酸腺苷酶活性降低(P＜0.05);而二氮嗪处理组相应指标显著改善(P＜0.01).结论含二氮嗪停搏液能够改善缺血再灌注心肌功能,能量代谢恢复.
-
糖尿病大鼠细胞色素氧化酶Ⅱ基因及表达变化的意义
目的研究糖尿病大鼠胃组织线粒体DNA细胞色素氧化酶Ⅱ(COXⅡ)基因及蛋白表达的变化,以探索糖尿病胃肠道动力紊乱的发生机制.方法雄性Wistar大鼠70只,随机分为实验组(糖尿病模型大鼠,腹腔注射链脲菌素60mg/kg)和对照组(正常大鼠),检测浆膜下胃电图,Western blot法检测胃COXⅡ蛋白的表达变化,RT-PCR法检测胃平滑肌COXⅡ mRNA表达变化,紫外分光光度法测定胃组织细胞色素氧化酶活性.结果实验组大鼠出现胃电节律紊乱,其细胞色素氧化速率为(0.41±0.21)/min,明显低于对照组大鼠(0.78±0.37)/min,差异有统计学意义( P ＜0.01);实验组大鼠胃COXⅡ蛋白和COXⅡ mRNA的表达明显亦低于对照组( P ＜0.01).结论实验组大鼠胃节律紊乱时胃细胞色素C(cyt C)氧化酶活性下降以及线粒体COXⅡ基因和蛋白表达降低,可能为糖尿病胃肠功能紊乱发生的分子生物学基础.
