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脂肪酶活力检测方法分析
检测脂肪酶活力有很多方法,也采取了大量的底物,一般都是利用不同的目标决定佳的底物和方法。本文紧密围绕脂肪酶活力检测这一内容,认真分析了所采取的各种方法,以期获得科学的检测脂肪酶活力的方法。
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酶法水解牛胎盘下脚料的工艺研究
牛胎盘中含有大量的蛋白质和氨基酸,是丰富的蛋白质资源。蛋白质酶解是改善蛋白质特性,便于其吸收的有效途径。本文以牛胎盘下脚料为原料,采用复合酶水解,研究了影响水解的主要因素。通过正交试验确定了酶解的佳条件。结果表明:适的酶解条件为:温度60℃,pH值为7.0,酶底物比为0.4%,料水比为1∶5,水解时间为3 h。
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全自动生化分析仪弹性速率测定法解析
先进的全自动生化分析仪,在酶的测定上,引入了一种新的分析法:弹性速率法,可以直接测定高活力的各种酶,使得仪器测定酶的可报告上限大大延伸.本文分析论述了酶的测定方法及弹性速率法.
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初探全自动生化分析仪交叉污染的原因及解决对策
目前大多医院及实验室多通道生化分析仪的试剂加样机构需接触各种试剂成分,因此可能导致生化分析仪试剂之间的交叉污染,如果某一试剂含有下一测试所要测定的底物或含有的某种成分与下一反应所要测定的底物有作用,则直接干扰下一反应的测定结果.实验结果表明,常见十扰物质与试验项间的交叉污染密切相关,对检测结果数据的影响较大,而单独重复检测时,该项目测定值又趋于符合临床.这种结果直接关系到临床的诊断和治疗,已引起检验工作者的高度重视.
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DEM-2型自动洗板机的保养与堵孔排除
我院于1997年购买的一台北京拓普公司生产的DEM-2型自动酶标洗板机,经过七年的日常应用,该仪器性能十分稳定,洗板效果较好.但在日常工作中,经常会遇到清洗头堵孔现象.清洗头一般分为两种(12针和8针清洗头),常用的是12针清洗头.在酶标板清洗过程中,若出现清洗头堵孔现象,则注水不满或不注水,就会直接影响清洗质量,造成酶标记物清洗不干净,导致部分酶标记物附在孔壁,拍板后加底物A、B液,就可能出现假阳性结果.
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吲哚胺2,3双加氧酶对免疫的调节作用
1963年,Shimizu 等[1]分离出 IDO,发现其在哺乳动物体内分布广泛,在各种肝外组织中都有 IDO 的存在,尤以胎盘和肺中表达多。IDO 与肝内的 L-色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)催化的反应相同。IDO 以超氧阴离子(O2-)作为辅助因子,酶解吡咯环,生成 N-甲酰犬尿氨酸和犬尿氨酸。其底物主要包括D-色氨酸、5-羟色氨、5-羟-L-色氨酸和 L-色氨酸,动力学研究表明其适底物是 L-色氨酸。TDO 仅表达在哺乳动物肝脏,底物仅限于色氨酸[2]。人类 IDO 分子量约42kD,pI =69,由403个氨基酸残基组成[3]。IDO 基因启动子长1245bp,含有2个干扰素刺激反应元件(ISRE),这2个 ISRE 阳序列间隔1kb 它们在 IFN-γ诱导 IDO 基因转录中必不可少。
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LISA(利萨)分立任选式多参数全自动生化分析仪故障探讨
我院于九四年购进一台意大利产全自动生化分析仪,该仪器适用于各种不同的分析工作,如临床化学(底物、酶、离子)特殊蛋白及药物检测等.
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艾滋病实验室工作探讨
ELISA是指酶联免疫吸附试验,检测HIV抗体时可使用血液、唾液、尿液样品,HIV抗原或抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体,加底物显色,用酶标仪测定结果,试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定,经过6年的HIV抗体检测工作,总结体会如下.
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狼疮性肾炎治疗现状
霉酚酸酯(骁悉):是霉酚酸的前体,霉酚酸可以抑制腺苷单磷酸脱氢酶,减少DNA聚合酶的底物,从而抑制T细胞的增殖,其他细胞可通过补救途径合成嘌呤而不受影响.
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221名汉族人胰岛素受体底物-2基因G1057D多态性的研究
胰岛素受体底物(IRS)主要连接胰岛素受体和多种效应分子,介导细胞对胰岛素(INS)等的反应.基因剔除研究显示,IRS-1纯合突变(IRS-1-1-)鼠仅出现胰岛素抵抗(IR),而IRS-2-1-鼠具有2型糖尿病(T2DM)的全部特征.本研究用PCR-RFLP方法检测辽宁地区中年汉族人群IRS-2G1057D多态性,并结合T2DM发病机制相关的INS分泌和作用的简易指标的变化,明确IRS-2 G1057D多态性与T2DM的相关性.
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DNA依赖的蛋白激酶复合物研究进展
DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PK)是重组修复系统中重要的组成部分,主要修复由电离辐射所引起的DNA双链断裂(DSBs),并且可以通过磷酸化多种蛋白质底物,广泛参与转录及细胞凋亡等过程.
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水蛭中水蛭素含量测定的改进
水蛭素活性测定方法目前主要有以chromonymTH为生色底物的比色法、光散射法和凝血酶滴定法.2005年版<中国药典>收载了用凝血酶滴定法测定水蛭药材中的水蛭素[1],其原理是水蛭素可与凝血酶以1:1比例结合,而凝血酶已有标准的国际单位NIH,因此可以用抗凝血酶活力单位ATU来表示水蛭素的活性,即1个ATU等于中和1个NIH凝血酶的水蛭素量.
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呼吸链的电子漏路径和线粒体的超氧自由基代谢及其生物学意义
吸入机体的氧气90%以上在线粒体中被还原,呼吸链是执行这一功能的实体.呼吸链如同一条电子传递链,它的底物端有两个脱氢酶直接氧化三羧循环中的底物并将电子经泛醌传递给细胞色素链,细胞色素链的氧端是细胞色素氧化酶,它直接催化还原氧成水的反应.呼吸链电子传递还原氧的过程与ATP酶催化ADP+P→ATP的过程相偶联共同完成线粒体合成ATP的能量代谢,这是近半个世纪以来生物能力学研究的主题.近年来人们发现呼吸链传递电子并不像是一条绝缘很好的导线,而是在呼吸链的底物端(泛醌区)和氧端(细胞色素c)都有漏电现象.呼吸链漏出的电子没有参加合成ATP的能量代谢过程,而是参与了线粒体内生成超氧自由基和双氧水以及由此进一步产生其他活性氧自由基的自由基代谢过程.本文就这几年来我们对呼吸链电子漏现象的研究及其生物学意义做一些介绍.
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Caspase的活化及其在细胞凋亡中的作用
Caspase是执行细胞凋亡的主要酶类,目前已鉴定的哺乳动物Caspase有14种.Caspase以酶原的形式合成,催化活性很低,必须激活以后才能发挥作用.活化的Caspase通过特异性的裂解一套底物而导致细胞凋亡.与Caspase有关的细胞凋亡通路至少有三种:线粒体/细胞色素c通路、死亡受体通路和内质网通路.Caspase总是与其抑制剂共存,以防止Caspase酶原意外激活而对正常细胞造成损伤.
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人类S-亚硝基化蛋白组微阵列芯片检测研究进展
NO通过对蛋白质的S-亚硝基化修饰广泛参与细胞生理活动的调节,然而S-亚硝基化底物尚不完全清楚。来自约翰霍普金斯医学院细胞工程院的研究团队近期利用自发研制的人类高密度蛋白微阵列芯片对16,368种人类蛋白进行了亚硝基化检测,并确定了834种潜在可被亚硝基化修饰的蛋白质,其中95种蛋白质中131条肽链上的138个半胱氨酸残基被证实为亚硝基化位点。
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E3泛素连接酶 VHL 通过调控 HIF-1α维持 Treg 稳态及功能
调节性 T 细胞(regulatory T cell,Treg)是 CD4+ T 细胞的重要亚群,参与了免疫耐受和对自身抗原的耐受反应。Von Hipp-el-Lindau(VHL)基因的失活或者突变促进多种肿瘤发生。HIF-1α是 VHL 复合物的底物,在常氧状态下,HIF-1α经脯氨酸羟化酶(prolyl hydroxylase domain,PHD)的羟化后被 VHL 识别,进而被泛素化修饰,再经由蛋白酶体降解,所以维持在较低水平。有研究表明,HIF-1α参与维持 Th17和 Treg 平衡。本文作者,对于 VHL 是否参与了 Treg 细胞的调控进行了研究。
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氯乙酸酯酶方法的改良
氯乙酸酯酶(CE)属特异性酯酶,它是在萘酚AS-D-氯化醋酸酯为底物时,酯酶活性主要出现于中性粒细胞系中.故萘酚AS-D-氯化醋酸酯酶(简称AS-D-CE)又称中性粒型酯酶[1].除了在肥大细胞见到活性外,其他细胞成分如单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、红细胞系基本阴性.其反应原理为底物在酶的作用下,分解产物与重氮盐结合,引起偶氮偶联,使其形成不溶性沉淀-偶氮染料,以此标识酶的定位.
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白细胞介素-4对哮喘大鼠T淋巴细胞磷脂酰肌醇-3激酶表达的影响
磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)是T淋巴细胞内重要的信号转导分子,它通过催化底物磷脂酰肌醇发生磷酸化而将活化信号传入细胞内.有研究显示PI3K途径介导了生理情况下IL-4受体诱导的T细胞增殖.IL-4是否通过对哮喘T细胞PI3K通路的作用影响了T细胞的增殖目前尚不清楚.通过对IL-4处理的不同组之间T细胞PI3K表达的研究,探讨IL-4对哮喘T细胞PI3K的影响.
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反式作用丁型肝炎病毒核酶体外切割活性的研究
丁型肝炎病毒(HDV)在复制过程中,基因组RNA及复制产生的抗基因组RNA均具有自我裂解的活性--核酶(Ribozyme)活性.HDV核酶是在所发现的核酶类型中唯一在人体的细胞中具有天然裂解活性的核酶.通过对HDV核酶的研究,已经确定了85nt长度的核酶活性区,并且其二、三级结构也有了阐明.本文根据Anne T等人提出的HDV核酶自我裂解时的假结样(pseudoknot-like)二级结构,将85nt的HDV核酶从其J(1/2)连接处分成两段,一段作为核酶,一段作为底物,设计HDV核酶的反式作用形式;将反式作用HDV核酶的基因重组入载体.
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去泛素化酶在病毒感染过程中的调控作用研究进展
蛋白质的泛素化是一种广泛存在且非常重要的翻译后修饰形式,在调控细胞周期、细胞凋亡、损伤修复、机体免疫以及神经元退化等许多生物学功能方面发挥着重要作用,其过程需泛素或类泛素样蛋白(如SUMO、NEDD8、ISG15等)、泛素激活酶 E1、泛素结合酶 E2和泛素连接酶 E3共同完成[1-2]。泛素是由76个氨基酸残基组成的非常保守的小分子多肽,相对分子质量为8.5×103,在真核生物体内广泛存在[3]。泛素本身含有7个赖氨酸残基(lysine, K),分别为K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63,其本身的赖氨酸残基也可以与泛素分子相互结合,即底物蛋白结合泛素分子,后一个泛素分子通过其羧基端的甘氨酸结合到前一个泛素的某一个赖氨酸上形成多聚泛素链。多聚泛素链与被修饰蛋白K48相连常介导靶蛋白进入蛋白酶体降解,而K63连接常活化靶蛋白或使靶蛋白循溶酶体途径降解。在这个过程中E1活化泛素分子, E2决定着形成何种泛素链,而E3则决定着底物蛋白的特异性[4-7]。