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卷曲霉素在罗氏培养基中的稳定性研究
目的 检测卷曲霉素(Cm)在罗氏培养基中的稳定性,了解Cm在罗氏培养基中的降解速率；检测Cm降解对药物敏感性试验结果的影响.方法 用高效液相色谱仪分别检测4℃和37℃2种保存条件下,Cm在罗氏培养基中的稳定性；使用不同保存条件下的罗氏培养基进行药物敏感性试验,以验证Cm降解对敏感性试验结果的影响.结果 在4℃保存时,罗氏培养基中的Cm含量与时间呈反比,保存10d时,罗氏培养基中的Cm降解2.04％,保存40 d时,Cm降解21.5％,保存80 d时,Cm降解41.7％,保存到200 d时,检测不到Cm的存在；在37℃保存10d时,罗氏培养基中的Cm降解46.8％；在37℃保存30 d时,无法在罗氏培养基中检测到Cm的存在.在4℃存储时间为10～160 d的Cm罗氏培养基进行结核分枝杆菌药物敏感性试验(DST)时,MIC在0.8～1.0 μg/ml菌株,在4℃存储时间为40 d的Cm罗氏培养基上生长6周后出现16个菌落.MIC在1.0～1.5 μg/ml菌株,在4℃存储时间为40 d的Cm罗氏培养基上生长6周后出现阳性结果(+).结论 Cm罗氏培养基在37℃保存时不稳定,在4℃保存时相对稳定,但存储时间不应超过40 d.
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肺结核合并糖尿病对抗结核药物血药浓度的影响
目的 研究肺结核合并糖尿病对吡嗪酰胺、左氧氟沙星的血药峰浓度的影响,为糖尿病合并肺结核患者用药提供理论依据.方法 以随机数字表法选取糖尿病合并肺结核的患者为观察组(左氧氟沙星组30例,吡嗪酰胺组20例),单纯肺结核为对照组(左氧氟沙星组30例,吡嗪酰胺组20例),两组分别服用抗结核药物吡嗪酰胺、左氧氟沙星,在服药7d后,用高效液相色谱法(HPLC)测定患者抗结核药物的血药峰浓度,两组间进行对比,采用SPSS 13.0软件进行统计分析.结果 左氧氟沙星在糖尿病合并肺结核组的血药峰浓度较单纯肺结核组明显升高[分别为(8.03±2.60) μg/ml和(6.66±1.76) μg/ml,t=2.39,P=0.02]；而吡嗪酰胺在两组间差异无统计学意义[分别为(14.24±4.79) μg/ml和(14.86±5.74) μg/ml,t=0.37,P=0.71].结论 左氧氟沙星在糖尿病合并肺结核患者体内的血药峰浓度较单纯肺结核患者明显升高,提示糖尿病患者在应用左氧氟沙星时应该注意其血药峰浓度.有无糖尿病对吡嗪酰胺在体内血药浓度没有影响.
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应用高效液相色谱-质谱/质谱联用技术检测贝达喹啉血药浓度
目的 采用高效液相色谱-质谱/质谱联用(HPLC-MS/MS)技术检测人血浆中贝达喹啉浓度,并对其应用效果进行评价.方法 人血浆样品经乙腈沉淀蛋白等处理后检测,液相色谱采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(2.1mm×100 mm,3.5μm)为分析柱,以甲醇-5mmol/L甲酸铵水溶液(含0.1％甲酸)(85∶15,V/V)为流动相,质谱使用电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行检测,分析时间为3 min.结果 本测定方法不受血浆中内源性物质干扰,贝达喹啉母离子和定量子离子的质荷比(m/z)为555.2→58.3,标准曲线线性范围为0.1～5.0 μg/ml,方法的日内、日间精密度(相对标准偏差,RSD)均小于10％,准确率为97.8％～107％.用建立的方法检测了12例服用贝达喹啉的结核病患者,服药剂量为每日400 mg时,贝达喹啉峰浓度为(3.17±1.14) μg/ml,谷浓度为(1.12±0.64) μg/ml;服药剂量为200 mg/次,每周3次时,贝达喹啉峰浓度为(2.01±0.87) μg/ml,谷浓度为(0.65±0.30) μg/ml,48份样本血药浓度均在检测范围内(0.1～5.0 μg/ml).结论 本研究建立了抗结核新药贝达喹啉血浆中药物浓度的HPLC-MS/MS联用方法,该方法适用于临床结核病患者血浆样品中贝达喹啉浓度的快速分析.
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高效液相色谱法测定乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸
[目的] 选择一种前处理简单、方便,灵敏度高、重现性好的乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸的检测方法.[方法] 采用反相色谱法同时测定奶粉、酸奶和其他发酵乳制品的苯甲酸和山梨酸含量;醋酸锌和亚铁氰化钾溶液作为沉淀剂,ZORBAX SB C18柱(150mm×2.1mm i.d5μm)液相色谱柱分离,磷酸盐缓冲溶液-甲醇(体积比90:10)作为流动相,二级管阵列为检测器进行检测.[结果] 样品加标回收率为87.4%～110.0%.pH值为6.5～7.0时苯甲酸与山梨酸与流动相完全分离;检测波长选择227nm;萃甲酸检测限为0.5μg/ml,山梨酸检测限为开为0.5μg/ml.[结论] 该方法可用于乳饮料和奶制品中防腐剂的检测.
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RP-HPLC法测定冬虫夏草发酵液冻干粉中虫草素和腺苷含量
目的 有效地控制冬虫夏草发酵液冻干粉的质量.方法 建立了测定虫草素和腺苷含量的反相高效液相色谱法(RP-HPLC).色谱条件:C18柱(250 mm × 4.6mm ,5μm);流动相为乙腈+水+甲醇(2+85+2);流速为1.0 ml/min;紫外检洲波长260 nm.结果 虫草素浓度在0.45～18.00 μg/ml范围内与峰面积呈线性相关,r=0.999 3,平均回收率为96.5%,RSD为2.3%.腺苷浓度在1.76-17.60μmg/ml范围内与峰面积呈现性相关,r=0.9990,平均回收率为97.3%,RSD为1.0%.结论 该方法样品处理简便,结果可靠,重现性好,可有效地控制冬虫夏草发酵液冻干粉的质量.
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保健食品中吡啶甲酸铬的检测方法研究
为建立保健食品中吡啶甲酸铬的高效液相色谱分析方法，研究了提取方法和色谱柱、流动相等液相色谱分析条件的选择，并对其稳定性进行了长期试验。加标回收率>93%，相对标准偏差3.1，小检出量10.0 mg/kg，结果符合保健食品分析的要求，可以用于片剂、胶囊等类型保健食品中吡啶甲酸铬的分析。2年室温保存证明吡啶甲酸铬稳定性良好。
关键词： 甲基吡啶类营养保健品食品分析色谱法 高压液相 -
HPLC-FL法检测尿液中类雌激素双酚A和烷基酚
目的 建立尿液中类雌激素(壬基酚(NP)、辛基酚(OP)和双酚A(BPA))的HPLC-荧光测定方法.方法 采用β-葡萄糖酸酐酶、硫酸酯酶水解人尿液中的结合型壬基酚、辛基酚和双酚A,酶解后溶液采用OASIS HLB固相萃取柱浓缩、富集和净化.Waters XTerraTM MS C18液相色谱柱分离,甲醇+水作为流动相梯度洗脱.荧光检测,激发波长:225nm;发射波长:310nm.结果 NP、OP和BPA具有良好的线性关系,BPA、NP和OP的检出限分别为3.7、4.9和7.5ng/ml,BPA、NP和OP加标回收率分别为:70.2%~95.7%、73.2%~108.2%和76.3%~109.1%;RSD分别为5.61%~8.19%、6.01%~7.98%和6.23%~8.61%.结论 该方法测定尿液中类雌激素(BPA、OP和NP),具有较高的灵敏度和选择性,结果准确可靠、重现性好.
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高效液相色谱/质谱联用测定保健食品中的西地那非和西力士
目的以紫外定量、质谱定性,测定保健食品的违禁成分西地那非、西力士.方法高效液相色谱/电喷雾质谱联用,色谱柱:RP-C18柱; 流动相:0.5%甲酸+甲醇和0.5%甲酸+水梯度淋洗;流速:1 mL/min; 检测波长:292 nm;质谱扫描范围(m/z):150～550 amu.结果西地那非和西力士在一定的质量范围内呈良好的线性,RSD小于2%,平均回收率分别为96.9%和97.7%.结论方法具有高的灵敏度、精确度和特异性,能对保健食品中所添加的违禁药物西地那非、西力士进行准确的定性和定量检测.
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固相萃取-高效液相色谱法测定保健食品中维生素B12的研究
为监管保健食品中维生素的含量,建立了保健食品中维生素B12的化学分析法,采用固相萃取(SPE)进行试样富集、净化,高效液相色谱(HPLC)进行分离检测.方法的小检出量为0.3 ng,低检出浓度0.2 mg/kg,线性范围在0.334～167μg/mL之间,平均回收率为72.1%～131.7%.该方法具有简便、快速、可靠、容易推广等优点.
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液相色谱-电喷雾串联质谱法定量葱蒜类植物中Se-甲基-硒半胱氨酸的佳提取条件研究
目的 研究适于液相色谱-电喷雾串联质谱法(LC-MS/MS)定量测定富硒葱蒜类植物中Se-甲基-硒半胱氨酸(MSeC)的提取液的佳制备条件.方法 用4种提取剂(纯水、甲醇、丙酮和乙酸乙酯)、2种提取方法(超声提取和沸水提取)、不同水提取温度(70、80、90和100 ℃)和时间(45、60、75和90 min)对富硒大蒜中的MSeC的佳提取条件依次筛选研究,获得满足大量测得MSeC的样品制备方法.按照选择条件提取洋葱、韭葱和大葱加标粉制剂,并采用LC-MS/MS测定MSeC含量,计算加标回收率.结果 4种提取剂的超声提取对比分析发现,纯水提取蒜粉中MSeC的量大,沸水浴加热比单独超声处理能够提高蒜粉中MSeC的提取率.水加热提取温度和时间二因素正交设计优选实验证实,蒜粉中MSeC佳提取制备条件为100℃提取90 min,该提取条件处理其他葱蒜类粉制剂的MSeC加标回收率在91%～108%之间.结论 沸水提取90 min适用于LC-MS/MS在线定量分析葱蒜类植物中MSeC的待测液的制备.
关键词： Se-甲基-硒半胱氨酸 葱属 色谱法 高压液相 串联质谱法 -
HPLC-MS/MS测定油炸及高温烘烤食品中的丙烯酰胺
为检测食品中的丙烯酰胺,建立了饼干、面包、油条、薯片、咖啡多种食品中丙烯酰胺的测定方法.试样经水溶液振荡提取,硅藻土柱净化,采用HPLC-MS/MS和同位素稀释定量技术,以选择反应监测(SRM)方式测定目标化合物.方法的检出限和定量限分别为4 μg/kg和12μg/kg,线性范围10～3 000μg/L,不同食品基质的不同加标水平(20～2000μg/kg)的回收率为90%～105%,RSD＜10%.本方法定量准确、可靠,适用于食品中丙烯酰胺的测定.
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食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的高效液相色谱测定方法
为建立同时测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的高效液相色谱测定方法,将碾磨后的试样经乙腈+水溶液提取、过滤后,以MycoSepTM净化柱净化,吹干净化液后,加入正己烷和三氟乙酸溶液衍生,反相色谱柱测定.黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2能达到完全的基线分离,检出限分别为0.012、0.008、0.036和0.024μg/kg,不同水平的加标回收率均达80%以上,RSD均小于3.0%.该方法快速、准确、灵敏,有利于试验者安全,能同时分离食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2.
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婴幼儿配方奶粉中核苷酸含量的测定方法研究
为检测婴幼儿配方奶粉中胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、次黄嘌呤核苷酸5种核苷酸的含量,建立了奶粉中5种核苷酸的紫外检测器液相色谱法.对试样提取、固相萃取等前处理方式和仪器检测条件进行了研究,试样经0.5%乙酸去除蛋白质,氨基固相萃取柱富集和净化,Symmetry C18柱分离,254 nm紫外检测器液相色谱分析方法定量检测.胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸和次黄嘌呤核苷酸的添加回收率分别是90.0%～94.2%、86.4%～93.2%、85.7%～92.6%、90.0%和85.7%～93.3%,相对标准差分别为6.6%、3.4%、8.2%、6.8%和8.2%,检出限分别为0.04、0.05、0.05、0.06和0.04 μg/mL.3年来对30件送检样品的检测显示,检测结果与标示量基本一致.该方法适用于婴幼儿配方奶粉核苷酸含量的分析.
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番茄和胡萝卜中类胡萝卜素的C30与C18HPLC分离
为提高胡萝卜素的分离水平,在相同的HPLC条件下比较了C30与C18柱对番茄和胡萝卜中类胡萝卜素的分离情况.比较的色谱条件为:C30固定相:YMCTM Carotenoid S-5柱(YMC,250 mm×4.6 mm,5μl);C18固定相:DIAMONSILTM柱(Dikma Technologies,250 mm×4.6 mm,5 μl);流动相A:乙腈+水=9+1;流动相B:乙酸乙酯;线性梯度洗脱:在前15 min内,B由0%增为100%,随后,B保持100%,流速为1.0 ml/min,检测波长为450 nm,进样量为20μl,室温.从二者色谱图的比较可以看出,C30柱反相高效液相色谱在分离几何异构体上显示出明显的优势,可有效分离成分复杂、多样、结构相似的不合氧类胡萝卜素顺反异构体.可以认为,C30柱在分析食品中类胡萝卜素组分的领域中具有良好的应用前景.
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卵磷脂类保健食品中PE、PC的高效液相色谱测定
为准确快速地对卵磷脂保健食品中有效成分进行定量分析,我们建立了卵磷脂保健食品中磷脂主要组分磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)的高效液相色谱测定方法.方法的日间精密度为5.4%～9.0%;PE、PC的加标回收率分别为83.0%～105.6%和81.3%～86.0%,均可满足卫生分析的要求.对5种卵磷脂保健食品中的PC、PE的含量进行了测定,PC、PE的含量分别为15.2%～24.2%和3.1%～6.1%.方法的样品前处理方法简单,且检测灵敏度高,分析速度快,适于在国内推广使用.
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高效液相色谱法测定玉米中的黄曲霉毒素
目的 建立一种定量检测玉米中黄曲霉毒素的高效液相色谱方法.方法 样品用甲醇-盐酸溶液提取、正己烷脱脂,再经二氯甲烷萃取和硅胶柱净化,后与TFA进行衍生反应,以甲醇-乙腈-水为流动相,C18柱分离并通过荧光检测器定量.结果 4种黄曲霉毒素在15 min内得到良好的基线分离,样品中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的检出限分别为0.04、0.02、0.10和0.04 μg/kg.0.10～50.00 μg/kg AFB1加标回收率为78.2%～85.9%,相对标准偏差为10%～16%;10.00和40.00 μg/kg总黄曲霉毒素加标回收率分别为86.5%和89.2%,相对标准偏差分别为13%和9.2%.盲样测定结果在给定浓度范围内.结论 该方法灵敏度高、稳定性好、成本低,可以用于玉米中黄曲霉毒素的定量检测,并具有推广应用的前景.
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大豆中磺酰脲类除草剂残留量的检测
为检测大豆中除草剂的残留量,建立了RP-HPLC和HPLC-MS选择离子监测(SIR)同时检测大豆中10种磺酰脲类除草剂残留量的方法.试样经乙腈提取,正己烷液-液分配,弗罗里硅土填充柱净化,然后采用RP-HPLC-DAD和HPLC-ESI(+)-MS测定.对HPLC和LC/MS分离条件、试样前处理条件进行了研究和优化.建立的方法简便、快速、灵敏.10种磺酰脲类除草剂HPLC法测定,在0.1～10.0μg/ml范围内线性相关系数为0.999 6～0.999 7,在0.05～2.00mg/kg浓度范围之间,加标回收率均在69.8%～100.7%,其多次测定的RSD在1.9%～10.4%之间,低检出限均为20μg/kg.LC-MS法测定在0.025～1.0μg/ml范围内线性相关系数为0.999 5～0.999 8,在0.02～0.1 mg/kg浓度范围之间,加标回收率均在72.1%～98.8%,其多次测定的RSD在0.9%～7.7%之间,低检出限均低于10μg/kg.本方法可满足进、出口大豆中多种除草剂残留量同时检验的工作需要.
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LC-MS-MS同时定量检测硒蛋氨酸和硒胱氨酸
目的 建立同时测定硒蛋氨酸(SeMet)和硒胱氨酸(SeCys)含量的液相色谱-串联质谱法(LC-MS-MS).方法色谱柱:Waters Symmetry C18(150 mm×3.9 mm,5μm);流动相:甲醇+0.1%七氟丁酸水溶液(35+65),流速为500μl/min;以氮气为碰撞气,利用多反应离子监测方式测定SeMet(MRM m/z 198.1→181.0,198.1→152.0)和SeCys(MRM m/z 337.0→248.0,337.0→88.2)信号.结果 SeCys和SeMet检出限分剐为2.0 ng/ml和0.5 ng/ml;以198.1→181.0为定量分析离子对.SeMet的线性回归方程为:y=707x+990,r=0.999 3;以337.0→248.0为定量分析离子对,SeCys的线性回归方程为:y=64.3x+695,r=0.999 9.结论该方法能够使2种含硒化合物在一次进样中实现完全分离和在线测定.能够满足快速准确检测SeCys和SeMet含量要求.
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HPLC法测定食品中金雀异黄素
为保证保健食品的质量,建立了测定食品中金雀异黄素的HPLC方法.试样以乙醚脱脂,甲醇+水(80+20,体积分数)超声提取30 min,定容后过0.45 μm滤膜,上250.0 mm×4.6 mm、粒径10 μm的C18柱,甲醇+醋酸铵(0.050 mol/L,pH 4.6)作流动相,二极管阵列检测器测定.染料木苷、黄豆苷、黄豆苷元对测定不产生干扰.方法回收率85%～110%,相对标准偏差2%～8%,低检出限为0.10 μg.本方法适用于保健食品中金雀异黄素的测定.
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超高效液相色谱-质谱法测定果酱中纳他霉素残留
目的 建立了果酱中纳他霉素的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法.方法 样品加入0.5 g氯化钠、经10 ml丙酮萃取,以甲醇-水溶液为流动相进行梯度洗脱,经 BEH C18色谱柱分离,通过多反应监测模式(MRM)进行测定.结果 纳他霉素在蓝莓果酱、葡萄树莓果酱、香蕉草莓果酱、黄桃果酱、苹果果酱和山楂草莓果酱中的线性范围分别为0.5～25.0、0.5～25.0、1.0～25.0、1.0～25.0、0.5～25.0和1.0～25.0μg/kg,相关系数(R2)均大于0.99.6种果酱中目标化合物的定量限为0.5～1.0μg/kg,3个浓度水平的加标回收率为 80.1%～113.3%,相对标准偏差(RSD,n=5)小于20%.结论 该方法快速、准确、操作简便,可用于果酱中纳他霉素的确证和定量分析.
