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LC-MS-MS同时定量检测硒蛋氨酸和硒胱氨酸
目的 建立同时测定硒蛋氨酸(SeMet)和硒胱氨酸(SeCys)含量的液相色谱-串联质谱法(LC-MS-MS).方法色谱柱:Waters Symmetry C18(150 mm×3.9 mm,5μm);流动相:甲醇+0.1%七氟丁酸水溶液(35+65),流速为500μl/min;以氮气为碰撞气,利用多反应离子监测方式测定SeMet(MRM m/z 198.1→181.0,198.1→152.0)和SeCys(MRM m/z 337.0→248.0,337.0→88.2)信号.结果 SeCys和SeMet检出限分剐为2.0 ng/ml和0.5 ng/ml;以198.1→181.0为定量分析离子对.SeMet的线性回归方程为:y=707x+990,r=0.999 3;以337.0→248.0为定量分析离子对,SeCys的线性回归方程为:y=64.3x+695,r=0.999 9.结论该方法能够使2种含硒化合物在一次进样中实现完全分离和在线测定.能够满足快速准确检测SeCys和SeMet含量要求.
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超高效液相色谱-质谱法测定果酱中纳他霉素残留
目的 建立了果酱中纳他霉素的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法.方法 样品加入0.5 g氯化钠、经10 ml丙酮萃取,以甲醇-水溶液为流动相进行梯度洗脱,经 BEH C18色谱柱分离,通过多反应监测模式(MRM)进行测定.结果 纳他霉素在蓝莓果酱、葡萄树莓果酱、香蕉草莓果酱、黄桃果酱、苹果果酱和山楂草莓果酱中的线性范围分别为0.5～25.0、0.5～25.0、1.0～25.0、1.0～25.0、0.5～25.0和1.0～25.0μg/kg,相关系数(R2)均大于0.99.6种果酱中目标化合物的定量限为0.5～1.0μg/kg,3个浓度水平的加标回收率为 80.1%～113.3%,相对标准偏差(RSD,n=5)小于20%.结论 该方法快速、准确、操作简便,可用于果酱中纳他霉素的确证和定量分析.
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高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定保健食品中水苏糖含量
目的 以质谱定性定量,测定保健品中水苏糖含量.方法 采用高效液相色谱/电喷雾质谱联用法(HPLC-ESI/MS),色谱柱:瑞典Kromasil NH2柱;流动相:甲醇+乙腈+0.1%甲酸氨水溶液=8+52+40(体积比);流速1.0 ml/min.质谱采用电喷雾正离子模式(ESI+),对m/z 689进行选择离子监测,扫描范围(m/z):620～700 amu.结果 水苏糖在80～120μg/ml范围内,峰面积和浓度呈良好的线性关系(r=0.999 2);相对标准偏差(RSD)为0.73%;在3个添加水平下的回收率均在93.0%～105.8%.结论 本方法快速、选择特异性高、分析时间短且无需衍生处理,抗干扰能力强,能准确快速测定水苏糖的含量.
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多维液相色谱质谱组合体系在志贺菌蛋白质组学研究中的应用
目的 建立多维液相色谱质谱组合体系,用以获得福氏志贺菌更完整的蛋白质组信息. 方法 对福氏2a志贺菌301株(Sf2a301)全菌蛋白进行预分离,顺序抽提胞浆蛋白和膜蛋白.应用二维液相色谱基质辅助激光解吸附飞行时间串联质谱(2D LC-MALDI-TOF/TOF)和二维液相色谱电喷雾串联质谱(2D LC-ESI-MS/MS)构成的多维液相色谱质谱组合体系进行蛋白分离和鉴定,分别应用MASCOT和SEQUEST软件搜索NCBI上Sf2a301的蛋白质数据库,并对两种串联质谱的互补性及组合后优势进行分析. 结果 MALDI-TOF/TOF和ESI-MS/MS分别鉴定到Sf2a301株的960个蛋白和729个蛋白,总共鉴定1 231个蛋白;两种技术方法鉴定蛋白质的平均氨基酸序列覆盖率分别为14.3％和13.9％,组合鉴定后覆盖率升高为15.7％.MALDI和ESI两种离子化方式具有互补性,表现为MALDI更倾向于离子化分子质量偏小、碱性、胰酶消化后羧基末端为精氨酸的肽段;ESI更倾向于离子化分子质量偏大、疏水、胰酶消化后羧基末端为赖氨酸的肽段. 结论 应用2D LC-MALDI-TOF/TOF和2D LC-ESI-MS/MS鉴定Sf2a301全蛋白质组,既互相确认又相互补充.多维液相色谱质谱组合体系无论在蛋白质鉴定数量还是可信程度上都优于单一串联质谱,可作为复杂样品的蛋白质组学研究技术平台.
关键词： 福氏志贺菌 基质辅助激光解吸电离 电喷雾电离 蛋白质组学 -
应用蛋白质组学技术筛选胰腺癌生物标志物的研究进展
胰腺癌是一种十分凶险的恶性肿瘤.胰腺癌早期症状不明显,临床确诊的患者多已处于中晚期,大多失去手术治疗机会.蛋白质组技术的快速发展为研究胰腺癌发病机制、发现早期诊断和预后的生物标志物提供了可能.本文就蛋白质组学技术在胰腺癌细胞系、组织、血清和胰液等方面的应用作一综述.
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大鼠急性脊髓牵张损伤相关蛋白质的筛选和鉴定
目的 筛选并鉴定与大鼠急性脊髓牵张损伤相关的蛋白质.方法 SD大鼠10只随机分为2组:假手术组(Sham组)和脊髓牵张损伤组(tractive spinal cord injury,TSCI组),每组5只.术后1d取材,对脊髓组织蛋白进行提取制备、定量、分离,建立差异表达图谱,通过双向凝胶成像分析和人工比对,分别确定差异蛋白质斑点.采用纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱技术鉴定差异蛋白,检索数据库,对差异蛋白进行分类.结果 Sham组与TSCI组两者间完全相同的差异蛋白质点共22个,其中4个下调,18个上调；4个差异蛋白点新出现在TSCI组.鉴定出16种有意义的蛋白质,其中与凋亡相关的蛋白4种,神经信号转导相关的蛋白3种,参与代谢的蛋白6种,未知蛋白3种.结论 鉴定出的蛋白质可能通过神经信号转导、调节细胞凋亡及细胞代谢等途径参与了TSCI的损伤及修复过程.
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结膜松弛症患者泪液蛋白质组学研究
目的 比较结膜松弛症和正常人泪液中蛋白质成分的差异,从而探讨结膜松弛症的发病机制.方法 病例对照研究.收集结膜松弛症组和正常对照组各8例(8只眼),采用毛细管从每只眼收集15ul泪液,应用shotgun方法 检测泪液蛋白质,分别行溶液内酶解、反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离、电喷雾离子化质谱(ESI-MS/MS)行质谱鉴定后生物信息分析.结果 结膜松弛症组泪液中共有蛋白质356个,正常人泪液中共有蛋白质352个,两组中有119个蛋白质相同.对泪液中蛋白质按基因本体注释(GOA)分类后,发现结膜松弛症组中出现的部分调节凋亡相关蛋白质、凋亡相关蛋白质及炎性反应相关蛋白质在正常对照组中缺失,并且在结膜松弛症泪液中发现了防御素.结论 shotgun方法 可有效分离和分析泪液蛋白质,结膜松弛症患者泪液中的特异性成分提示结膜松弛症可能与细胞凋亡和炎性反应有关.(中华眼科杂志,2009,45:135-140)
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电喷雾质谱技术在手性识别中的应用
本文综述了近年来电喷雾等软电离质谱技术用于手性识别的研究进展.其研究方法主要分为对映体标记法、离子-分子反应法以及动力学方法等3类.通过综述对质谱技术用于手性识别的不足之处以及未来主要发展趋势进行了讨论.
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生物质谱技术在蛋白质结构鉴定中的应用进展
本文综述了生物质谱技术在蛋白质结构鉴定中的应用新进展,讨论了生物质谱在蛋白质初步鉴定、蛋白质翻译后修饰的鉴别、蛋白质-蛋白质间相互作用等研究方面的应用趋势,以及生物质谱仪的一些新发展,指出了生物质谱技术现存的主要问题,探讨了可能的解决方案.
关键词： 生物质谱 蛋白质结构鉴定 电喷雾电离 基质辅助激光解吸附电离 -
液相-电喷雾离子化-质谱在DNA加合物检测中的应用进展
DNA加合物是一种判断DNA损伤的重要的生物标志物.对于某些特殊DNA加合物的检测不仅能够获取个体对于这些化合物的接触情况,而且还可以判断其可能产生的效应.DNA加合物有许多检测方法,如32P后标记法、免疫法和液相/气相-质谱联用法等等.随着液相-质谱偶联技术(LC-MS)的发展,离子化方法尤其是电喷雾离子化(ESI)方法在技术上的突破以及离子发射和检测技术的进步,LC-MS可以检测暴露外源遗传毒性化合物后与动物和人组织DNA形成的加合物水平.本文就LC-ESI-MS液相质谱联用技术在检测碱基、核苷和核苷酸DNA加合物方面的应用做一简述.
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流动注射电喷雾串联质谱法分析食物基质中的胆固醇酯
胆固醇酯(cholesterol ester,ChE)是动物细胞膜的重要组分,其代谢异常与心血管、脑血管疾病等疾病[1-2]密切相关.通用的胆固醇酯分析方法是先分别测定总胆固醇与游离胆固醇的含量,然后取两者之差来计算胆固醇酯的量.该方法复杂耗时,误差较大,且不能同时提供胆固醇酯中脂肪酸链的确切信息.
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LC-MS/MS法测定人全血中羟氯喹的浓度
目的 建立测定人全血中羟氯喹浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法.方法 全血样品经特丁基甲醚提取,采用同位素内标(氘4-羟氯喹)进行测定.以Thermo Syncronis C18(50 mm×2.1 mm,5 μm)为色谱柱,流动相A为含10 mmol· L-1乙酸铵、0.1％甲酸的10％乙腈水溶液,流动相B为95％乙腈水溶液,梯度洗脱,洗脱条件为0～ 1.2 min:0％B,1.3 ～ 2.3 min:100％B;2.4～ 5.5 min:0％B,流速为0.4 mL· min-1.电喷雾离子源,正离子MRM扫描分析.结果 羟氯喹血浓度测定的线性范围为1～ 500 μg·L-,定量下限为1 μg· L-1,批内、批间RSD均＜9％,提取回收率57.6％ ～ 69.2％.结论 本方法灵敏度高、专属性好,可检测人全血中羟氯喹的浓度,并用于羟氯喹的药动学研究.
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高效液相色谱-串联质谱法测定人胎盘灌流液中奥司他韦和羧酸奥司他韦浓度
目的 建立人胎盘灌流液中奥司他韦和羧酸奥司他韦的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定方法.方法 以甲硝唑为内标,胎盘灌流液样品经沉淀蛋白处理,色谱柱为Shim-pack XR-ODSⅡ柱(2.0 mm×75 mm,2.2 μm);0.1％甲酸-0.1％甲酸乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-1;电喷雾电离源,正离子多离子反应监测,奥司他韦和羧酸奥司他韦定量离子对分别为m/z 313.0→166.1和m/z 285.1→197.1.结果 奥司他韦和羧酸奥司他韦分别在0.41 ～ 100 ng·mL-1、4.1～1 000ng·mL-1范围内线性关系良好,平均方法回收率89.3％～104.7％,日内及日间RSD均小于15％,稳定性考察结果良好.结论 本方法可用于人胎盘灌流液中奥司他韦和羧酸奥司他韦浓度的检测.
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液相色谱-串联质谱法测定人血浆中瑞芬太尼的浓度及药动学
目的 建立测定人血浆中瑞芬太尼的液相色谱-串联质谱检测方法,并研究其在健康人体内的药动学.方法 采用液-液萃取法,用萃取液(乙酸乙酯:正己烷=4:1,V/V)提取健康志愿者静脉注射瑞 芬太尼不同时间血浆中的瑞芬太尼,选用卡马西平为内标.采用Agilent Zorbax SB-C18(2.1 mm×50 mm,3.5μm)进行分离,流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(80:20,V/V).电喷雾离子源,正离子MRM扫描分析,内标和瑞芬太尼离子对分别是m/z 237→194和m/z 377.5→345、285.结果 瑞芬太尼血药浓度在1.0~50.0μg·L-1范围内线性关系良好(r=0.998 9),低检测限为0.5μg·L-1,相对回收率均在85%～115%范围内,绝对回收率大于75%,日内和日间RSD均小于10%.单剂量注射瑞芬太尼2μg·kg-1,t21/2α为(1.659±0.350)min,CL为(0.003±0.001)L·min-1·kg-1,AUC0-∞为(194.779±36.147)mg·L-1·min-1.结论 本方法操作简便、灵敏度高、精密度好,适用于瑞芬太尼的临床药动学研究.
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液相色谱-串联质谱法快速测定人血浆中头孢哌酮浓度及药动学
目的 建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)电喷雾检测法快速测定血浆中头孢哌酮浓度的方法,并研究其在健康人体内的药动学.方法 采用LC-MS/MS法测定健康志愿者静脉滴注后不同时间血浆中头孢哌酮的浓度.以克仑特罗为内标,采用Agilent Zorbax SB C18(100 mm×3.0 mm,3.5μm)进行分离,通过串联质谱仪,以选择反应监测方式进行测定.用于定量分析的离子对分别为m/z 668→526(头孢哌酮)和m/z 277→203(克仑特罗).结果 头孢哌酮血药浓度在0.507～202.80 mg·L-1范围内线性关系良好(r2=0.999 7),低定量限为0.507 mg·L-1,相对回收率均大于90%,日内和日间RSD均小于10%.单剂量静脉滴注头孢哌酮1.5 g,t1/2为(1.77±s 0.28)h,MRT为(2.34 4±0.12)h, AUC0～10为(300±56)mg·h·L-1.结论 本方法快速、简便、准确、灵敏,适用于头孢哌酮的人体药动学研究.
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替加色罗胶囊与片剂的人体生物等效性
目的 研究替加色罗胶囊与片剂在人体内的生物等效性.方法 24名健康男性受试者随机交叉给药,分别单次口服受试制剂替加色罗胶囊和参比制剂替加色罗片剂12 mg,采用液相色谱-串联质谱法测定替加色罗的血药浓度,用DAS1.0软件计算药动学参数和生物等效性评价.结果 胶囊与片剂的主要药动学参数:AUC0-t分别为(28±s 8)和(28±11)μg·h·L-1,AUC0-t分别为(31±9)和(30±12)μg·h·L-1,ρmax分别为(9.0±2.7)和(9±3)μg·L-1,tmax分别为(1.2±0.4)和(1.1±0.3)h,t1/2分别为(8.5±2.8)和(7±4)h.经置信区间法及双单侧t检验表明,主要药动学参数间差别均无显著意义(P>0.05);受试制剂的相对生物利用度为(112±43)%.结论 2种替加色罗制剂具有生物等效性.
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氨氯地平2种片剂在中国健康志愿者体内的生物等效性
目的 评价2种氨氯地平片剂在中国健康志愿者体内的生物等效性.方法 24名健康男性受试者,随机分为2组,分别单剂量口服氨氯地平受试制剂或参比制剂10 mg.14 d清洗期后再交叉给药.于服药前(0 h)和服药后2、4、6、8、10、14、24、36、48、72、96、120 h抽取静脉血,采用LC-MS/MS法测定血浆中氨氯地平的浓度.利用DAS 2.1.1软件计算主要药动学参数,并对2种制剂进行生物等效性评价.结果 受试制剂和参比制剂的tmax分别为(6.7±s 2.1)h和(6.8±1.8)h,ρmax分别为(7.0±1.3)μg·L-1和(7.3±1.8)μg·L-1,AUC0～120分别为(329±73)μg·h·L-1和(325±83)μg·h·L-1,AU0-∞分别为(383±96)μg·h·L-1和(369±97)μg·h·L-1.受试制剂的相对生物利用度为(105±24)%.结论 2种氨氯地平片剂在中国健康志愿者体内具有生物等效性.
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LC-MS/MS测定健康人体内乌苯美司浓度及其药动学(英文)
目的 建立测定人血浆中乌苯美司的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法.方法 采用Inertsil ODS-3(50 mm×2.1 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-20 mmol·L-1甲酸铵(含0.05%甲酸)(50:50,V/V),流速:0.3 mL·min-1;质谱仪离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子模式检测,监测离子为309.55→119.88(乌苯美司)和339.25→280.8(溴莫普林,内标).结果 乌苯美司在2～3 000 μg·L-1线性关系良好(r=0.998 2),定量限为2μg·L-1.主要药动学参数分别为:ρmax(2 702±s431)μg·L-1,tmax(0.58±0.26)h,t1/2α(0.53±0.17)h,t1/2β(1.9±0.5)h,AUC0-t (3 744±574)μg·h·L-1,Vc/F(0.008 0±0.002 0)L,CL(0.008 2±0.001 2)L·h-1.结论 本方法操作简便、准确、灵敏,适用于乌苯美司的人体药动学研究.
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比索洛尔片在健康人体内的药动学和生物等效性
目的 比较2种进口比索洛尔片剂在健康人体的药动学及生物等效性.方法 24例健康男性受试者随机交叉口服比索洛尔受试制剂和参比制剂5 mg后,采用液相色谱一串联质谱(LC-MS/MS)法测定血浆中比索洛尔的浓度,经DAS 2.0软件计算药动学参数,用方差分析和双单侧t检验评价2种制剂的生物等效性.结果 健康受试者口服比索洛尔受试制剂和参比制剂5 mg后,血浆中比索洛尔的pmax、tmax、AUC(0-t)、AUC(0-∞)和t1/2分别为(18±s 3)和(18.0±2.9)μg·L-1;(2.2±1.2)和(2.5±1.6)h;(266±48)和(263±39)μg·h·L-1;(276±50)和(274±39)μg·h·L-1;(9.0±1.3)和(9.2±1.0)h.以AUC(0-4)计算,受试制剂的相对生物利用度平均为100-3%,2种制剂各主要药动学参数经双单侧t检验及90%置信区间法检验,差异无显著意义(P>0.05).结论 2种比索洛尔片剂在体内具有生物等效性.
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高脂餐对匹伐他汀及其内酯代谢物的人体药动学影响
目的 评价高脂餐对匹伐他汀在健康中国人体内药动学的影响.方法 8名健康男性受试者空腹口服匹伐他汀8 mg,4 d后,同一受试者在高脂餐后再次12服匹伐他汀8 mg.采用液相色谱-串联质谱联用法测定血浆中匹伐他汀和其代谢物匹伐他汀内酯的浓度.结果 空腹和高脂餐后口服匹伐他汀8 mg,匹伐他汀的ρmax唧分别为(96±s 47)和(129±107)μg·L-1,AUC0～48分别为(169±83)和(198±124)μg·h·L-1,tmax中位数分别为0.5 h(0.5,1.5)和1.0 h(0.5,1.5),与空腹结果相比,AUC和ρmax分别增加10%和19%,tmax滞后0.5 h,但无显著差异(P>0.05);匹伐他汀内酯的ρmax分别为(73±17)和(55±11)μg·L-1,AUC0～48分别为(590±1 13)和(483±90)μg·h·L-1,tmax中位数分别为1.5 h(1.0,2.0)和2.0 h(1.5,2.0),与匹伐他汀原型不同,高脂餐后内酯代谢物的AUC和ρmax分别减少18%和24%,存在显著差异(P<0.05).结论 与空腹给药相比,高脂餐对匹伐他汀的吸收速率和吸收程度无显著影响,内酯代谢物生成量减少.
