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婴幼儿配方奶粉中核苷酸含量的测定方法研究
为检测婴幼儿配方奶粉中胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、次黄嘌呤核苷酸5种核苷酸的含量,建立了奶粉中5种核苷酸的紫外检测器液相色谱法.对试样提取、固相萃取等前处理方式和仪器检测条件进行了研究,试样经0.5%乙酸去除蛋白质,氨基固相萃取柱富集和净化,Symmetry C18柱分离,254 nm紫外检测器液相色谱分析方法定量检测.胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸和次黄嘌呤核苷酸的添加回收率分别是90.0%～94.2%、86.4%～93.2%、85.7%～92.6%、90.0%和85.7%～93.3%,相对标准差分别为6.6%、3.4%、8.2%、6.8%和8.2%,检出限分别为0.04、0.05、0.05、0.06和0.04 μg/mL.3年来对30件送检样品的检测显示,检测结果与标示量基本一致.该方法适用于婴幼儿配方奶粉核苷酸含量的分析.
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外源核苷酸对小鼠胸腺细胞凋亡的影响
目的探讨外源核苷酸对小鼠胸腺细胞凋亡的影响.方法首先建立了体内细胞凋亡模型,25只4周龄雄性小鼠腹腔注射地塞米松(25 mg/kg)4、8、16、24 h后取胸腺淋巴细胞进行细胞凋亡检测.确定建立体内细胞凋亡模型的条件为注射地塞米松(25 mg/kg)后16 h 取小鼠胸腺细胞.外源核苷酸对小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的影响,60只小鼠分成阴性对照、阳性对照、核苷酸1组、核苷酸2组,共4组,每组15只小鼠,均饲喂半纯合饲料.对照组每天灌胃生理盐水,核苷酸1组和2组分别灌胃12.5 mg和25 mg的核苷酸,连续饲养14 d后阳性对照组和核苷酸组小鼠腹腔注射地塞米松溶液,诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡,阴性对照组注射等量的生理盐水,16 h后分离脾脏和胸腺,测定脾脏及胸腺指数,并采用琼脂糖凝胶电泳和流式分析方法检测胸腺淋巴细胞凋亡情况以及细胞游离Ca2+ 浓度([Ca2+]i).结果核苷酸1组和2组小鼠的增重分别为3.71、4.01 g,阴性对照组小鼠增重为2.74 g,注射地塞米松后阳性对照组和核苷酸组小鼠的脾脏、胸腺重量以及脏器指数低于阴性对照,添加核苷酸对这些脏器指数没有明显影响;注射地塞米松后小鼠胸腺细胞DNA出现梯形条带,注射地塞米松后阳性对照组和核苷酸组小鼠胸腺细胞内Ca2+水平分别升高至167.37nmol/L、191.16 nmol/L、180.78 nmol/L,高于阴性对照(103.76 nmol/L).细胞凋亡率也分别由阴性对照组的0.31%升高到11.93%、9.82%、11.15%,补充核苷酸对细胞内Ca2+水平和细胞凋亡率均没有显著影响.结论外源核苷酸对地塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡没有显著影响.
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恩替卡韦治疗拉米夫定失效慢性乙型肝炎的疗效预测初探
目的 观察恩替卡韦治疗拉米夫定失效慢性乙型肝炎24周时对HBV的抑制程度,与治疗48周疗效之问的关系,探讨临床实用的疗效预测指标.方法 拉米夫定治疗失效慢性乙型肝炎患者33名,采用恩替卡韦每日1.0 mg治疗.根据治疗24周时血清HBV DNA的水平,将患者分为4组:PCR低于检测下限(QL)组(＜300拷贝/ml)、QL～＜103拷贝/ml组、103拷贝/ml～＜104拷贝/ml组和≥104拷贝/ml组,比较各组治疗48周时HBV DNA低于检测下限、ALT复常、HBeAg血清转换及发生病毒学反弹的比率.结果 治疗48周时,血清HBV DNA自基线下降4.91 log10,HBV DNA低于检测下限的比例为33.3%.24周时HBV DNA水平越低,在48周HBV DNA达到PCR检测不到的水平和ALT复常的比率越高,发生病毒学反弹的比率越低.结论 恩替卡韦治疗拉米夫定失效慢性乙型肝炎治疗24周时,PCR检测不到HBV DNA,提示在48周可达到较佳疗效,24周对HBY DNA的抑制程度可作为48周疗效的预测指标.
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HBV rtA181位点突变的病毒学特点及临床耐药研究
目的 回顾性研究HBV rtA181位点突变模式与临床核苷(酸)类似物耐药的关系及挽救治疗效果.方法 核苷(酸)类似物治疗过程中发现HBV rtA181位点突变的45例慢性乙型肝炎或肝硬化患者,检测其血清HBV DNA水平,PCR产物直接测序检测HBV变异模式及基因型,收集突变前用药史及突变后的挽救治疗方案及疗效相关资料.结果 HBV rtA181位点共发现三种突变形式,其突变率分别为rtA181T 66.67％ (30/45),rtA181V 31.11％ (14/45),rtA181S 2.22％ (1/45),rtA181T多见于HBV C基因型患者(P＜0.05);涉及rtA181的HBV突变模式共发现13种,多位点联合突变率为57.78％ (26/45),其中rtA181与rt236位点联合突变率为40.00％ (18/45),与rt204位点联合突变率为22.2％ (10/45),多位点突变患者较单位点突变患者有病毒载量分布更高的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05),多位点突变与基因型及突变形式无关(P＞0.05);发生rtA181突变的患者97.78％ (44/45)有拉米夫定(LAM)和(或)阿德福韦酯(ADV)治疗史,另外1例有替比夫定(LdT)治疗史.其后的挽救治疗采用加用或换用恩替卡韦(ETV)、LAM联合ADV以及LdT联合ADV均能在一个月内将HBV DNA降低2个lg值,继续随访效果显著的方法为加用或换用ETV.结论 HBVrtA181位点突变模式多样,与LAM、ADV或LdT长期单药或序贯治疗有关,加用或换用ETV可取得显著的挽救治疗效果.
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7株TT病毒部分核苷酸及氨基酸序列分析
目的了解TT病毒(Transfusion transmitted virus,TTV)在我国的流行情况,研究我国TTV株序列特点.方法采用半巢式聚合酶链反应(PCR)扩增TTV DNA,PCR阳性扩增产物直接测序.结果我国7例TTV DNA株部分序列与日本株相比,核苷酸及氨基酸同源性分别为64.7%～98.4%及62.7%～96.4%;7株间的核苷酸及氨基酸同源性分别为63.5%～98.4%及60.2%～96.4%,分别属于两种型及其中一型中的两种亚型.结论我国存在TTV并可能存在多种TTV基因型.
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阿德福韦酯治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者4年疗效观察
目的 观察阿德福韦酯治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者4年的疗效和安全性.方法 95例HBeAg阳性慢性乙型肝炎初治患者,口服阿德福韦酯10 mg,每日1次,观察治疗前后血清ALT和HBV DNA水平及治疗1、2、3、4年ALT复常率、HBV DNA阴转率、HBeAg消失率、HBeAg血清学转换率、病毒学反弹率及药物不良事件.结果 95例患者治疗4年时,ALT复常率、HBV DNA阴转率、HBeAg消失率、HBeAg血清学转换率及病毒学反弹率分别为89.5％、63.2％、47.4％、41.1％及8.0％.治疗过程中均未发现药物相关的肾脏毒性,共有8例患者出现轻度药物不良事件,但均能耐受和缓解.结论 阿德福韦酯初始治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者,能有效抑制HBV DNA复制,促进ALT复常,促使HBeAg/HBeAb血清学转换.延长疗程,可增加HBV DNA阴转、HBeAg消失和血清学转换,具有良好的耐受性和安全性.
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慢性乙型肝炎病毒感染女性孕晚期应用核苷(酸)类似物安全性的回顾性研究
目的 探讨慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染孕妇孕晚期应用抗病毒药物对母儿的安全性.方法 利用医院电子病历系统回顾性收集首都医科大学附属北京地坛医院分娩的慢性HBV感染孕妇,根据孕妇孕28周后是否应用抗病毒药物分为用药组(孕晚期使用拉米夫定、替比夫定或替诺福韦)和对照组(孕期未使用任何抗病毒药物),比较两组孕妇妊娠并发症发生率,以及两组新生儿不良事件的发生率.结果 共收集到符合条件孕妇4 018例,其中用药组1 045例(其中用拉米夫定487例、替比夫定556例、替诺福韦2例),对照组2 973例,两组孕妇剖宫产率相似(49.5％ vs51.7％ P=0.306),围产期胆汁酸增高、羊水过多、羊水过少、产后出血、早产、羊水Ⅲ度粪染等并发症发生率相比均无统计学差异(P值均＞0.05).两组新生儿出生体重、身长、1 min Apgar评分差异均无统计学意义(3 390 g vs 3 389 g P=0.728;50.22 cm vs 50.20 cm P =0.577;9.96 vs 9.94P =0.168),新生儿畸形发生率无差异(1.5％ vs 1.4％ P=0.783).拉米夫定及替比夫定两种药物相比,孕妇围产期胆汁酸增高、羊水过多、羊水过少、产后出血、早产、羊水Ⅲ度粪染等并发症发生率相比差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 孕晚期服用抗病毒药物不增加孕妇围产期并发症的发生率,未影响胎儿宫内发育,不增加新生儿畸形的发生率;抗病毒药物孕晚期使用对母儿基本安全;拉米夫定、替比夫定两组药物孕晚期使用安全性相当;尚需更长期、细致随访观察.
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阿德福韦酯联合胸腺肽α1对HBV感染肝细胞癌术后疗效的影响
目的 探讨阿德福韦酯联合胸腺肽α1对合并HBV感染肝细胞癌(HCC)患者术后疗效的影响.方法 42例行手术切除的合并HBV感染HCC患者随机分为两组:A组20例,为单纯手术切除;B组22例,为手术切除后加用阿德福韦酯联合胸腺肽α1治疗.观察两组的肝功能、HBV DNA清除率、乙型肝炎e抗原(HBeAg)转阴率、肝癌术后复发时间和生存时间.结果 术后6个月B组较A组白蛋白有明显升高(P<0.05),ALT和AST均有明显下降(P<0.05).术后1年B组较A组白蛋白亦有明显升高(P<0.05),总胆红素有明显下降(P<0.05);ALT和AST有极其明显下降(P<0.01).6个月HBV DNA清除率A组和B组分别为0(0/20)和59.1%(13/22).12个月HBV DNA清除率A组和B组分别为5.0%(1/20)和81.8%(18/22)(P均<0.01);6个月HBeAg转阴率A组和B组分别为0(0/11)和30.8%(4/13),12个月HBeAg转阴率A组和B组分别为9.1%(1/11)和53.8%(7/13)(P均<0.05).A组和B组的1年复发率分别为75.0%(15/20)和59.1%(13/22)(P>0.05);中位复发时间分别为8.8个月和12.2个月(χ2=3.621,P=0.057).A组和B组的中位生存时间分别为16.5个月和25.5个月(χ2=6.305,P=0.012).结论 合并HBV感染的HCC患者手术切除术后加用阿德福韦酯联合胸腺肽α1治疗有助于改善患者肝功能状况,提高术后HBV DNA清除率和HBeAg转阴率,推迟肿瘤复发时间,延长患者术后生存期.
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建立依赖型特异性核苷酸的乙型肝炎病毒基因分型方法
目的建立乙型肝炎病毒(HBV)基因型的新分型方法. 方法对HBV全基因序列和S基因片段序列,分别建立系统进化树作基因分型;同时,利用S基因片段序列中基因型特异性核苷酸,建立一种较为简单的基因分型方法.结果 S基因区进化树与全基因进化树在基因族的分布上基本相似.在S基因区,基因型A在核苷酸(nt)451位有型特异核苷酸T;基因型B在nt321位有A,nt324位有T,nt345位有G,nt408位有G;基因型C在nt293位有A,nt294位有C,nt491位有A;基因型D在nt290位有A;基因型E在nt619位有A;基因型F在nt287位有C,nt288位有T,nt294位有G,nt337位有T;基因型G在nt290位有G,nt306位有T,nt347位有T,nt481位有G.对18例基因型B和基因型C分子进化树进行分析,所得的基因型结果与S基因型特异核苷酸方法相同. 结论我们建立的一种依赖基因型特异性核苷酸的HBV基因分型方法,经分子进化树分析证明方法可靠.
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中国人群血管紧张素转换酶基因与血管紧张素Ⅱ -1型受体基因 A1166-C单核苷酸多态性分析
目的研究血管紧张素转换酶(ACE)基因Alu插入(Ⅰ)/缺失(D)多态性与血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)基因A1166-C 单核苷酸多态性(SNP )在中国人群中的分布状态. 方法采用聚合酶链反应(PCR)及PCR -限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对中国人群ACE基因Alu Ⅰ/D多态性和AT1R基因A1166-C SNP频率进行分析比较. 结果中国人群的ACE基因各基因型频率Ⅱ型37.0%,ID型40.5%,DD型22.5%;I,D各等位基因型频率分别为57.3%,42.7%.AT1R基因A1166-C SNP频率分布:AA型76.5%, AC型23.4%, CC型0.1%;等位基因频率A 88.2%, C型11.8%.结论中国人群ACE基因Alu I/D与AT1R基因A1166-C的 SNP频率的分布有明显的种族差异.
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焦磷酸测序法检测乙肝病毒P区基因耐药突变的临床应用研究
目的 探讨焦磷酸测序法检测乙型肝炎病毒(HBV)P区基因耐药突变的可靠性及临床应用.方法 以Sanger测序法为参考,验证焦磷酸测序法检测HBV P区基因耐药突变的性能.选取2009年6月至2012年8月温州医科大学附属第一医院及武汉大学人民医院确诊的慢性乙型肝炎(乙肝)患者1164例,采用焦磷酸测序法检测1164例临床慢性乙肝患者HBV P基因耐药突变,记录HBV DNA定量结果,统计HBV P区耐药基因各突变位点以及突变频率,并统计分析患者耐药突变的特点.结果 焦磷酸测序法和Sanger测序法检测HBV P区基因耐药突变时,所需HBV DNA低量为1×103 KIU/L,但焦磷酸测序法优于Sanger测序法,能稳定、特异地检出突变比例低至10％的突变位点.248例慢性乙肝患者HBV P区基因耐药突变位点均低于检测下限;919例患者有阳性结果,其中61.5％没有发生突变,38.5％发生突变(单个位点突变为47.5％,联合突变为52.5％).除rtI169T位点和rtA194T位点未检到突变外,其他位点都有不同程度的突变;耐药位点以rtM204V/I(32.1％)、rtL180M(19.8％)、rtA181 V/T(6.7％)、rtN236T(5.3％)为主,其中rtA181V/T和rtN236T位点发生部分突变比例较高.结论 焦磷酸测序法具有灵敏、特异、准确等特点,能早期检测核苷(酸)类似物治疗患者的HBV P区基因发生耐药突变,适用于慢性乙肝患者核苷(酸)类似物的治疗监测;HBV P区基因不同耐药位点和耐药频率可能与临床用药习惯相关.
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干扰素与核苷(酸)类似物联合治疗开创HBsAg转阴之路
干扰素与核苷(酸)类似物是目前用于慢性乙型肝炎抗病毒治疗的两大类药物,各有其优缺点,但单药总体治疗效果有限.两类药物联合治疗在10年前并不被推荐,然而近年大型前瞻性、多中心研究及临床实践均证实联合治疗可降低耐药率,提高HBeAg血清转换率,实现更多HBsAg清除.本文拟对干扰素与核苷(酸)类似物联合或序贯治疗的一些新证据进行阐释,并就联合治疗的前景进行展望.
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缩胆囊素对胆管癌细胞凋亡的影响
缩胆囊素(Cholecystokinin,CCK)是具有代表性的消化道激素之一.现有的资料证实其具有生长因子特性,对某些消化道肿瘤细胞的生长有明显的刺激作用,进而参与消化道肿瘤的发生、发展[1].
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核苷(酸)类似物对慢性乙肝病毒感染孕妇焦虑和抑郁状态的影响
目的 探讨核苷(酸)类似物[nucleos(t)ide analogue,NA]抗病毒治疗对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)感染孕妇的焦虑和抑郁状态的影响,并分析其影响因素.方法 2016-06/2017-03解放军302医院妇产科门诊产检的用NA抗病毒治疗的CHB感染孕妇共100例.通过问卷调查了解应用NA抗病毒治疗前后的CHB感染孕妇的精神状况.结果 (1)CHB感染孕妇抗病毒治疗前后焦虑自评量表(Self-rating Anxiety Scale,SAS)得分为(42.23±4.61) vs (35.14±5.60)(t=19.126,P＜0.01),治疗前后抑郁自评量表(Self-ratingDepression Scale,SDS)得分为(44.81±4.67)vs (38.02±5.26)(t=20.896,P＜0.01);(2)抗病毒治疗后乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA＜ 104 IU/mL和≥104 IU/mL的SAS得分下降(4.65±2.22) vs (8.93±3.55),差异有统计学意义(F=13.439,P＜0.01);SDS得分下降(4.94±2.20) vs (8.18±3.23),差异有统计学意义(F=6.196,尸＜0.05).多因素Logistic回归分析显示,HBV DNA显著下降是焦虑和抑郁改善的影响因素,OR值分别为6.078(P＜0.01)和3.314(P＜0.05).结论 NA治疗能改善慢性HBV感染孕妇的焦虑和抑郁状态,HBV DNA显著降低是患者焦虑和抑郁状态改善的独立影响因素.
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消化性溃疡患者HLA-DQA1基因的120例检测
目的研究武汉地区汉族人HLA-DQA1基因与消化性溃疡的遗传关联.方法用HLA基因的聚合酶链的反应-限制性片段长度多态性核苷酸分型技术,以等位基因特异的限制性内切酶(Apal Ⅰ,BsajⅠ,HphⅠ,Fok Ⅰ,MboⅡ,Mnl Ⅰ)消化DQA1座位特异的PCR扩增产物,对120例消化性溃疡(50例胃溃疡、70例十二指肠溃疡)和50例正常人的HLA-DAQ1等位基因进行分析.结果胃溃疡患者和十二指肠溃疡患者DQAl 0301基因频率较对照组显著性增高(P<0.05),且DQA1 0102基因频率较对照组显著性降低(P<0.05).结论 DQA1 0301和DQA1 0102基因与消化性溃疡有一定的关联,消化性溃疡患者与正常人之间存在着免疫遗传异质性的差异.
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特殊营养物质与肠内营养
肠内营养是一种经济、安全有效的营养支持方法,应用日趋广泛.近年来,动物实验和临床实践发现,一些特殊营养物质如谷氨酰胺、精氨酸、ω-3多不饱和脂肪酸和核苷酸等可改变创伤、感染后机体代谢反应,改善免疫功能和氮平衡,促进创口愈合,降低感染发生率,增强肠道屏障功能[1-4].为此,有学者主张将上述这些营养物质联合应用于肠内营养中,并称之为免疫增强型肠内营养制剂.
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微小RNA-146在动脉粥样硬化中的研究进展
动脉粥样硬化是心血管疾病的主要危险因素,在世界范围内亦是主要的致死性疾病之一.目前认为,动脉粥样硬化是一种免疫介导性动脉血管壁慢性炎症,其发病机制十分复杂.在各种因素的作用下,血液中的单核细胞迁移至内膜下转化为巨噬细胞,巨噬细胞在氧化型低密度脂蛋白的刺激下与清道夫受体结合后,转化为泡沫细胞,形成脂质斑块,终导致动脉管壁增厚变硬、失去弹性和管腔缩小,从而发生相应的功能改变口[1-2].
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短暂性脑缺血发作后微小核苷酸-126和1型芽生相关的络氨酸激酶结构域的变化及对预后的影响
目的 探讨微小核苷酸-126(miR-126)和1型芽生相关的络氨酸激酶结构域(SPRED1)在短暂性脑缺血发作(TIA)发病过程中的变化及其对继发脑梗死的预测价值.方法 回顾性分析106例TIA患者的临床资料,检测TIA发病3h内、6h、12h外周血清miR-126、SPRED1、血管内皮生长因子(VEGF)水平,分析miR 126、SPRED1对诊断TIA的特异度和敏感度,并与ABCD2评分进行比较,评估其在TIA发病后30 d内对继发脑梗死的预测价值.结果 miR 126在TIA发作3h内即有所下降,为9.41±1.04;12 h为6.59±2.78,显著低于健康人群9.35±1.76(t=-7.764、P=0.000);SPRED1在TIA发病3h内开始上升,12 h则显著高于健康人群[(82.64±18.60)pg/L比(52.38±13.24)pg/L,t=12.374、P=0.000];TIA发病后12 h时间点miR-126和SPRED1浓度呈负相关(r=-0.278,P=0.004).VEGF在TIA发病后3h内、6h、12 h浓度分别为(345.61±76.76)pg/L、(461.65±103.87)pg/L、(519.22±103.55)pg/L,均显著高于健康人群(107.77±26.04)pg/L(t=26.569、29.756、34.699,均P=0.000).通过ROC曲线比较,ABCD2评分曲线下面积(AUC)为0.716,对于TIA继发脑梗死的评估优于单独的miR-126(AUC=0.627)及SPRED1(AUC=0.629),但差异无统计学意义(Z=1.932、1.802,P=0.053、0.072);ABCD2联合miR-126和SPRED1评分较单一ABCD2评分对TIA继发脑梗死更具有预测价值(Z=2.105,P=0.035).结论 TIA发作后的miR-126、SPRED1表达紊乱对于疾病的预后具有一定的评估价值.
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肝移植术后HBV再感染患者HBV X区基因变异研究
目的 分析肝移植术后HBV再感染患者血清乙型肝炎病毒(hepatitis B viral,HBV)DNA X区基因的变异情况.方法 选择2002年6月至2003年12月期间因乙肝相关终末期肝病在本院行肝移植手术的320例患者,移植术后患者血清采用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBV DNA X区,并做直接测序分析.术后随访1.5～3年.结果 本组11例患者肝移植前、后HBV X区基因序列都有程度不等的点突变(5～39),有6例术前与术后同时具有nt1762(A→T)、ntl764(C→A)变异,11例患者同时存在ntl636～nt1741多处位点变异.结论 HBV DNA X区核苷酸nt1762、nt1764双位点变异在肝移植术后HBV再感染患者中是常见现象,免疫抑制剂不能改变该双位点变异.
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槲皮素联合survivin反义核苷酸对肝癌细胞凋亡协同作用的研究
目的 探讨槲皮素联合survivin反义核苷酸(ASODN)对肝癌SSMC-7721细胞株增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 常规培养SSMC-7721细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价survivin ASODN联合槲皮素对肝癌细胞增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和细胞周期;荧光染色观察细胞形态学变化;并通过RT-PCR和免疫组化方法检测survivin基因表达变化.结果 survivin反义寡核苷酸转染SSMC-7721细胞后,可以显著抑制细胞增殖,其抑制作用具有剂量依赖性,且能诱导肝癌细胞凋亡;联合槲皮索和survivin反义寡核苷酸抑制作用更为显著(t=4.317,P<0.01);RT-PCR及免疫组化显示ASODN和槲皮素均使survivin mRNA和蛋白表达下降.结论 survivin基因反义寡核苷酸联合槲皮素能明显抑制肝癌SSMC-7721细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调survivin基因表达;两者具有协同作用.
