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实时荧光PCR法检测奶制品中常见谷物成分
目的 建立Taqman实时荧光PCR法对奶制品中掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物源性成分的初筛检测体系.方法 以常见掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物的叶绿体rbcL基因作为靶基因,通过BLAST软件比对,选择其同源保守区域设计引物和探针.经通用性、特异性、灵敏性试验对探针和引物可行性进行验证,并通过模拟含谷物奶粉及市售奶类制品检测对其实际检测能力进行验证.结果 所建立体系可扩增大米、玉米、小麦、高粱、大麦等常见的谷物掺加物的DNA提取物,与市售奶制品的主成分牛奶、羊奶以及其常见添加物香蕉、红枣、菠萝、草莓、西红柿、花生、大豆等动植物源性成分无交叉扩增(Ct ＞35).对小麦纯DNA提取物检出限为0.01 ng.对分别掺加5种谷物成分的模拟奶制品检出限均可达0.5％,对市售的14份奶类食品中的谷类成分的检测结果均与食品标签相符.结论 本研究建立的Taqman实时荧光PCR体系具有通用、相对特异、灵敏、实用等优点,可用于奶制品中掺加或掺杂掺假谷物源性成分的快速定性检测.
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2013年苏州地区肉及其制品掺假情况调查
目的 了解苏州地区肉及其制品的掺假情况,通过对肉类种源与标签明示肉源进行比对,鉴别掺假食品,为加强食品标签管理提供依据.方法 运用自建的动物源性食品种源判定Taqman实时荧光PCR检测体系对苏州地区的肉及其制品进行种源判定,与标签明示肉源进行比对,鉴别掺假食品.结果 本次调查共检验涉及32个生产单位的90份样品,总不符合率为25.6％ (23/90).检测的44份牛肉及其制品中有12份与标签不符,8份用猪肉部分替代牛肉,1份以鸭肉部分代替牛肉进行销售;此外有3份不含有牛肉成分,存在猪、鸡、鸭源性肉类之外的肉类成分.共检测羊肉及其制品16份,有2份用鸭肉代替羊肉出售,3份羊肉样品中掺入了部分猪成分,其中1份样品还存在单个样品掺杂两种外源肉类的现象(猪源性和鸭源性).检测猪肉及其制品19份,其中2份样品含有标签未注明的鸡肉成分.在所检测的11份混合肉类样品中有4份成分与标签不符,主要是以廉价的鸡肉取代/部分取代相对高价的牛肉和猪肉.结论 肉制品掺假情况明显,用猪肉、鸭肉部分代替牛肉和羊肉仍是主要的掺假手段,牛肉掺假样品主要是熟制牛肉制品,而火锅食用羊肉卷样品则是羊肉掺假高危品,开展肉制品掺假检测对规范肉制品市场具有积极意义.此外,3份未知种源成分的牛肉样品提示在现有检测基础上还需扩大检测范围,防患于未然.
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实时荧光PCR快速检测鼠疫耶尔森菌方法的建立
目的 建立一种能快速检测鼠疫耶尔森菌的实时荧光PCR方法.方法 以鼠疫耶尔森菌pla毒力基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,探针的5'端标记荧光报告基团FAM,3'端标记荧光淬灭基团TAMRA;建立一种能快速检测样本中鼠疫耶尔森菌的实时荧光PCR方法,并对方法的特异性和灵敏度进行评价.结果 该实时荧光PCR方法只对鼠疫耶尔森菌进行特异扩增,同种属的小肠结肠炎耶尔森菌以及伤寒杆菌、肺炎衣原体、嗜肺军团杆菌其他症状相似病原体均无扩增;该方法在65 min内即可完成检测,操作方便快速,对菌悬液低可检测至10个菌体.结论 本研究建立的实时荧光PCR检测鼠疫耶尔森菌方法不仅能实现对鼠疫杆菌的快速检测,还可为鼠疫耶尔森菌引发疫情的监控和溯源提供参考.
关键词： 鼠疫耶尔森菌 Taqman实时荧光PCR 快速检测 pla基因 -
基于gyrB序列Taqman实时荧光PCR检测在MTC鉴定中的应用
目的：初步分析基于gyrB序列的Taqman实时荧光PCR在MTC（结核分枝杆菌复合群）鉴定中的应用。方法：根据MTC gyrB序列设计引物和探针，应用荧光定量PCR对14株标准株及90株临床分离株进行临床研究，并与测序法结果进行比较。结果：14株标准株中，非洲分枝杆菌与结核分枝杆菌结果为阳性，其余结果为阴性；30株临床分离株与ITS测序比较，有1株NTM结果为阳性，1株MTC结果为阴性，其余菌株检测结果与测序结果符合，分析特异度高；将60株临床分离株的检测结果与测序结果进行比较，得到该方法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均为100％。结论：采用基于gyrB序列的Taqman荧光PCR可快速检测和鉴别MTC和NTM。
关键词： 结核分枝杆菌 gyrB基因 Taqman实时荧光PCR -
TaqMan-实时荧光PCR快速检测副溶血性弧菌
[目的]建立TaqMan--实时荧光PCR快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)的方法,用于食物中毒快速诊断和食品中VP的污染状况调查.[方法]根据GenBank公布的VP tdh基因序列,设计引物和探针,建立TaqMan--实时荧光PCR快速检测体系,应用于食品中VP检测.[结果TaqMan--实时荧光PCR快速检测体系灵敏度为1.3×104cfu/ml(33 cfu/PCR反应体系),特异性好,无交叉反应.[结论]TaqMan--实时荧光PCR检测体系灵敏度高,特异性强,能提高VP的检出率和准确性,可应用于VP食品污染状况调查和食物中毒的快速诊断.
关键词： 副溶血性弧菌 Taqman实时荧光PCR 快速检测
