激肽原-激肽释放酶-激肽系统对哺乳动物生殖系统的调节

激肽原-激肽释放酶-激肽(kininogen-kallikrein-kinin,K-K-K)系统广泛存在于生殖系统各种组织和体液中,在生殖功能调控方面起着重要的作用,而引起了人们广泛关注.

兔外周血内皮祖细胞培养及HTK基因体外修饰

目的 探讨兔外周血来源的内皮祖细胞(EPCs)经体外基因修饰后能否成功表达目的 基因.方法 分离兔外周血单个核细胞进行定向培养,观察细胞摄取DiI-Ac-LDL的能力,免疫荧光法检测EPCs的细胞表面标记.同时PCR扩增人组织激肽释放酶(HTK)基因,构建以GFP为报告基因的重组真核表达载体,转染体外培养的EPCs后,荧光显微镜下观察HTK-EGFP融合蛋白的表达,通过RT-PCR与ELISA方法检测HTK的表达水平.结果 细胞培养5～6 d开始出现成簇的短梭形贴壁细胞,15 d后形成鹅卵石样细胞层,传代后的细胞能摄取DiI-Ac-LDL,免疫荧光显示vWF和CD133+;pEGFP-HTK重组质粒在EPCs中可以稳定表达,表达的融合蛋白具有HTK和EGFP的双重活性.结论 HTK基因修饰兔外周血EPCs对于血管病的治疗可能具有良好的前景.

组织激肽释放酶相关肽酶的作用和治疗潜力的研究进展

组织激肽释放酶家族由15种分泌型丝氨酸蛋白酶组成,是由人类基因组中大的蛋白酶基因簇编码.在过去10年间,关于激肽释放酶的底物、内源性抑制剂以及在体内功能方面的研究已取得巨大进步.研究表明,这些蛋白酶在不同组织中具有病理生理学作用,并且目前认为激肽释放酶是研发气道、心血管、牙齿、皮肤和肿瘤疾病新型药物的潜在靶点.因此,阐述激肽释放酶生理功能和病理意义方面认识的新进展,并了解鉴定激肽释放酶抑制剂中的进步,有助于我们在特定疾病环境下更好地靶向激肽释放酶.

激肽释放酶-激肽系统在阿尔茨海默病发病中的作用

激肽释放酶-激肽系统的异常变化与阿尔茨海默病、脑血管病、多发性硬化和癫痫等神经系统疾病的发生均有较大关系,这一系统与体内其它神经内分泌系统之间的关系错综复杂.通过激肽释放酶裂解激肽原、再不断地产生激肽,而活性激肽与体内多种激肽受体结合、并通过下游多条信号通路和众多细胞因子发挥生物学效应.在阿尔茨海默病患者的血液和脑脊液中均有凝血因子XII驱动的血凝接触系统的活化.本文重点综述激肽释放酶-激肽系统的异常变化与阿尔茨海默病发生的相关性问题.

加贝酯与头孢匹胺钠存在配伍禁忌

我科于2008年8月收治1例胆总管结石行ERCP术病人.在遵医嘱给药过程中,发现一组配伍禁忌,现报道如下.1.临床资料:加贝酯为白色或类白色的疏松块状物或粉末,0.1 g/瓶,由常州金远药业制造有限公司生产.加贝酯是一种非肽类蛋白酶的抑制剂.可抑制胰蛋白酶、激肽释放酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶等蛋白酶的活性,从而制止这些酶所造成的病理变化.

人类激肽释放酶2研究进展及其与前列腺癌的关系

前列腺癌(prostatic carcinoma,PCa)是欧美地区男性常见的恶性肿瘤,在美国居所有恶性肿瘤的第一位,病死率居第二位,仅次于肺癌[1].随着老龄化社会的到来和饮食结构的改变,我国人群前列腺癌的发病率呈逐年上升的趋势.由于前列腺癌生长缓慢,早期常无明显症状,发现时多属晚期,预后不良,因此早期诊断前列腺癌对其治疗及预后具有重要意义.

人类血清激肽释放酶10的检测及其在卵巢癌诊断中的应用

目的探讨人类血清激肽释放酶10(human kallikrein 10,hk10)在卵巢癌诊断和预后判断中的价值.方法 ELISA法检测卵巢癌组、妇科良性疾病组、正常对照组的血清hk10浓度/阳性率并与CA125进行比较,动态观察卵巢癌患者术后第1、5、10天hk10的浓度.结果 hk10诊断卵巢癌的灵敏度为59%,特异性为89%;卵巢癌组hk10浓度/阳性率(浓度为603～1 742 ng/L,平均浓度为1 093 ng/L /59%)明显高于妇科良性疾病组(浓度为52～1 142 ng/L,平均为516 ng/L /3%)和正常健康女性对照组(浓度为73～ 925 ng/L,平均为460 ng/L/0);卵巢癌患者血清hk10浓度于术后第10天降至正常;联合应用hk10和CA125诊断卵巢癌的阳性率明显升高,hk10的浓度与卵巢癌的分级、分期、组织分化程度有关.结论血清hk10是卵巢癌诊断和预后判断的有价值的指标,联合应用hk10和CA125可使卵巢癌,尤其是早期卵巢癌的阳性率提高.

胰激肽原酶对自发性高血压大鼠肾损害的保护作用

背景 胰激肽原酶是一种糖蛋白,作用于激肽原,使之裂解生成激肽,激肽促进内皮细胞释放一氧化氮(NO)与前列腺素I2(PGl2),引起血管扩张、血管渗透性增加,从而发挥降压、保护肾脏、心脏等生理学作用.目的 观察胰激肽原酶干预对自发性高血压大鼠(SHR)肾功能的影响,探讨激肽释放酶激肽系统在高血压及肾脏保护方面的可能机制.方法 36周龄SPF级雄性SHR 12只随机分成高血压对照组(B组)与高血压治疗组[C组,给予胰激肽原酶800 U/(kg·d)灌胃治疗12周],每组各6只.另有年龄匹配的雄性WKY大鼠6只作为正常血压对照组(A组).治疗前、后,观察3组大鼠血压、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、NO、6-酮-前列腺素F1a(6-K-PGF1a)及尿微量白蛋白(MAU)、尿β2微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)浓度及肾脏组织病理改变,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定肾皮质组织型激肽释放酶mRNA的表达.结果 胰激肽原酶治疗后C组血压较B组明显下降(P＜0.01);MAU、β2-MG、NAG定量明显降低(P＜0.01),血清NO、6-K-PGF1a水平升高(P＜0.05);肾皮质组织型激肽释放酶mRNA表达水平增加(P＜0.05).对照组大鼠肾小球小动脉管壁增厚,管腔狭窄,个别小球硬化;胰激肽原酶治疗后肾小动脉结构正常,未见小球硬化.结论 胰激肽原酶能显著减少尿微量蛋白、逆转肾小动脉硬化改变,保护肾功能,其机制可能与血压下降,血清NO、6-K-PGF1a水平及肾脏组织激肽释放酶水平升高有关.

血管紧张素转换酶2与高血压

肾素血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)和激肽释放酶-激肽系统是机体内调控血压稳定的两大体系,它们之间相互对抗,同时又形成多层次的相互作用的网络.在整个血压调控网络中,血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)及其新近发现的同源酶ACE2是其中的关键作用子[1].

加贝酯预防逆行性胰胆管造影术后急性胰腺炎的临床观察

ERCP在肝胆胰疾病诊治中的作用日益突出,术后胰腺炎(PEP)是其常见的并发症,高达2% ～ 20%[1].加贝酯是人工合成的非肽类蛋白酶抑制剂,对胰蛋白酶、激肽释放酶、纤维蛋白溶酶及血管舒缓素等有较强的抑制作用;还可抑制细胞因子的释放、氧自由基和炎症介质的产生,从而减轻全身炎症反应综合征和多器官损害[2].Di Francesco等[3]研究还发现加贝酯能松弛由结石或ERCP引起的Oddi括约肌痉挛.为此,本文对ERCP术后患者应用加贝酯进行前瞻性研究,现报道如下.

HTK基因对脐静脉内皮细胞相关基因表达的影响

目的利用已经构建好的腺相关病毒-人组织激肽释放酶基因重组体(rAAV-HTK),感染体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察HUVEC细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、凋亡蛋白酶(caspase-3)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素B1受体(ETR-B1)以及缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA表达量变化情况,探讨利用rAAV-HTK治疗高血压、缺血性心脏病的可行性.方法将已经构建好的rAAV-HTK重组质粒感染体外培养的HUVEC细胞,应用半定量RT-PCR方法检测感染rAAV-HTK前后HUVEC中eNOS、caspase-3、ET-1、VEGF、ETR-B1以及缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA表达量变化情况.结果转染有rAAV-HTK的HUVEC细胞内其细胞内eNOS的mRNA合成量增加,caspase-3的mRNA表达量降低,VEGF、ET-1、ETR-B1、缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA表达量没有变化.结论rAAV-HTK重组体感染HUVEC细胞能够使HUVEC细胞内eNOS的mRNA表达量增高,caspase-3的mRNA表达量减低,提示HTK能够改善内皮细胞功能,转HTK能够应用于高血压等血管内皮功能异常的心血管疾病的基因治疗.

激肽释放酶腺相关病毒载体的构建及病毒滴度的测定

目的构建人组织激肽释放酶(HK)腺相关病毒载体,并检测其滴度.为HK的真核表达及其临床研究提供实验基础.方法从带有人HK基因的pBluescript Ⅱ KS质粒中扩增出HK-cDNA,并将HK-cDNA克隆到腺相关病毒载体pAAV-MCS中,构建pAAV-HK表达质粒.并将此表达质粒和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC、以及腺病毒辅助质粒pAAV-Helper共转染AAV-293细胞,通过同源重组产生重组HK的腺相关病毒.以pAAV-LacZ和pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞,对报告基因LacZ用X-Gal染色,通过蓝染的细胞计算病毒滴度.结果扩增出的cDNA片段经DNA测序终确定为HK-cDNA.通过LacZ测定HK重组腺相关病毒的滴度为6.2× 107个/ml.结论重组HK的腺相关病毒可以在HT-1080细胞中表达HK,本实验为今后研究HK的生物学活性及心血管病的基因治疗奠定了基础.

人组织型激肽释放酶基因降低果糖诱导高血压大鼠的血压并改善高胰岛素血症

目的:研究人组织型激肽释放酶(HK)基因导入对果糖诱导高血压和胰岛素对抗的作用.方法:雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠饮用10%的果糖水诱导制成高血压动物模型,2周后静脉注入含人组织型激肽释放酶cDNA的重组质粒.然后监测血压,并取血,测定血糖、血胆固醇、血甘油三脂及血胰岛素水平.结果:一次静脉注射含人组织型激肽释放酶基因的重组质粒第3天即可明显降低果糖诱导高血压大鼠的血压,大降压效应在导入基因后第14天,其降压效应持续3周以上.实验组动物在血压下降的同时,血糖、血胰岛素浓度亦明显降低,并在动物主要脏器中检测到HK蛋白质的表达显著增加.结论:人组织型激肽释放酶基因的导人可能有助于降低血压,并纠正了高血压伴随的高胰岛素血症,结果提示人组织型激肽释放酶基因治疗高血压病尤其是合并糖尿病或胰岛素对抗者的可行性.

激肽系统在实验性糖尿病肾病发展中的作用研究

目的观察激肽系统与糖尿病肾病的关系。方法用比色法测定激肽释放酶(TKA)活性，用HOE140和胰激肽释放酶改变激肽系统的功能。结果 18周时糖尿病组TKA活性明显低于8周时的水平(P＜0.01)，与正常对照组比较有极显著差异(P＜0.0001)。胰激肽释放酶治疗组TKA活性升高(P＜0.05)，该组病变较糖尿病组轻。结论糖尿病可抑制激肽系统的活性，而补充胰激肽释放酶对糖尿病肾病的发展有一定的抑制作用。

人组织型激肽释放酶基因对人脐静脉内皮细胞的作用

结直肠癌组织中激肽释放酶10基因的表达及其与临床及病理的关系

目的探讨激肽释放酶10(KLK 10)基因在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌临床及病理特征的关系.方法采用荧光实时定量PCR技术,检测KLK 10 mRNA在63例结直肠癌患者癌及相应正常结直肠组织中的表达;采用免疫组织化学及免疫蛋白印迹法(western blot)定位及检测其蛋白表达.对16例结直肠癌及相应正常结直肠组织基因组DNA KLK 10基因的6个外显子进行直接测序,分析其单核苷酸多态性(SNP).结果97%(61/63)患者的结直肠癌组织中可检测到KLK 10 mRNA表达,结直肠癌组织中KLK 10基因的表达量显著高于相应正常结直肠组织.KLK 10基因于结直肠组织中的表达与淋巴结转移及临床分期显著相关(P＜0.05).79%(50/63)患者的结直肠癌组织中可检测到相对分子质量为30 000的蛋白表达.结直肠癌组织中KLK 10基因外显子3第50密码子有丙胺酸(GCC)-丝氨酸(TCC)改变,其中25%(4/16)为野生型GCC,56%(9/16)为杂合型GCC/TCC,19%(3/16)为纯合型TCC.结直肠癌及相应正常结直肠组织中,KLK 10基因外显子4有4个密码子,即106[甘氨酸(GGC)-甘氨酸(GGA)]、112[苏氨酸(ACG)-苏氨酸(ACC)]、141[亮氨酸(CTA)-亮氨酸(CTG)]及149[脯氨酸(CCG)-亮氨酸(CTG)]为SNP;相应正常结直肠组织中未发现有体突变.结论KLK 10基因在结直肠癌组织中为异常高表达,且与癌淋巴结转移与临床分期显著相关,是结直肠癌潜在的预后标记物.

激肽释放酶5及9在卵巢上皮性癌组织中的表达及意义

卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官恶性肿瘤之一,至今缺乏有效的早期诊断方法,5年生存率仍较低,徘徊在25%～30%,严重威胁妇女的健康[1],如何对卵巢恶性肿瘤做出早期诊断已成为国内外学者共同关注的问题.

卵巢上皮性癌组织中激肽释放酶14、15基因的表达及其意义

激肽释放酶(kallikrein,KLK)基因为一组高度保守的基因簇,在体内许多肿瘤组织中均有表达,KLK基因的生物学功能主要通过其表达产物发挥作用.目前,KLK基因已知的部分生物学功能有:释放激肽,降解胰岛素原与低密度脂蛋白、血管紧张素等,还可裂解精索原[1].KLK14、KLK15基因是KLK基因家族的新成员,参与体内许多生化过程,可能通过作用于细胞外基质,参与肿瘤细胞的生长、转移和浸润[2].本研究采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)连接法检测KLK14和KLK15蛋白在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达情况,并探讨其临床意义.

人尿激肽原酶对兔缺血后脑血管储备的影响

目的 研究人尿激肽原酶(hk)对兔脑缺血后的脑储备功能的影响.方法 健康新西兰白兔17只,随机分为对照组(n=5)、安慰剂组(n=6)和治疗组(n=6),采用线栓法制作兔右侧大脑中动脉脑缺血-再灌注模型,人尿激肽原酶(5×10-3PNAU/kg)(治疗组)或生理盐水(安慰剂组)处理;术后3、7、14 d行神经功能缺损评分并采用18F-FDG PET/CT技术检测缺血脑组织局部葡萄糖代谢水平的变化,从而评价局部脑血流量的变化;14 d检查后取兔脑行荆豆凝集素免疫荧光染色并进行脑微血管计数.结果 (1)脑缺血后安慰剂组与治疗组可见明显的神经功能缺损,安慰剂组3、7、14 d时评分分别为3.90±0.31,3.32±0.23及2.84±0.28;治疗组3、7、14 d时评分分别为3.17±0.32,2.62±0.21及1.09±0.17;随着治疗时间的延长,治疗组神经功能缺损改善明显(3 d和7 d时,P＜0.05;14 d时P＜0.01).(2)PET/CT结果显示对照组兔两侧脑组织代谢水平对称.安慰剂组兔右侧大脑中动脉供血区代谢水平较左侧明显下降,3 d时只有对侧的30%左右,14 d时恢复至对侧的51%左右;治疗组早期(3 d)右侧大脑中动脉供血区代谢水平较左侧下降,为对侧的49%左右,14 d时右侧代谢水平明显改善,恢复至对侧的91%左右.两组间比较差异具有统计学意义(3 d时P＜0.05;14 d时P＜0.01).(3)治疗组14 d微血管计数为(14.12±1.32)条,明显高于对照组的(3.04±0.82)条和安慰剂组的(5.45±0.67)条(P＜0.01).结论 人尿激肽原酶通过促进缺血脑组织的微血管再生,提高缺血侧局部的脑血管储备功能,可用于治疗兔缺血性脑损害.

人体组织激肽释放酶基因5′端调控序列点突变的检测

目的探讨一种能有效检测组织激肽释放酶基因启动子区点突变的实验技术.方法提取16例外周血的人基因组DNA,经PCR反应扩增出目标启动子区后,与寡核苷酸探针杂交,并进行测序,比较2种方法的准确性.结果 12例为纯合子,无G碱基插入;4例杂交结果阳性,其中2例为杂合子;2种方法结果吻合. 结论与测序法相比,本文ASO法经济、简便、灵敏度和准确率高,适合做大规模人群检测.