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60Coγ-射线诱导人白血病细胞HPRT基因突变的研究
属于电离辐射的60Coγ-射线的损伤效应早已被证实,但主要集中在对人体正常细胞或实体瘤细胞的影响方面,而有关γ-射线对人白血病细胞的损伤效应,特别是细微分子水平损伤及其生物化学进程还了解得较少.次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(Hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase,简称HPRT)基因由于具有以下的特点而成为研究电离辐射致突变的较为理想的生物标记:HPRT基因是细胞存活非必需的,定位于X性染色体上,人类细胞的HRPT基因结构与序列已经清楚等.以往由于实验条件限制,主要采用放射自显影法、多核细胞检测法以及5-溴脱氧尿嘧啶核苷法,但共同的缺陷是不能进一步进行基因突变的定位与定性[1,2].因此,本研究采用单细胞克隆培养技术,观察不同剂量γ-射线对人体白血病细胞HPRT基因的影响作用,为深入研究电离辐射的致突变效应及其应用提供一定的资料.
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贫铀对细胞存活的影响及基因突变作用
目的研究贫铀(DU)对细胞存活的影响和诱发基因突变的作用,并初步探讨其可能的机制.方法用包含单条人类11号染色体(Hchr 11)的人-中国仓鼠卵巢杂交细胞(AL细胞)为靶,观察DU作用细胞的低密度接种效率;用CD59表面抗原抗体及其补体筛选突变细胞克隆,研究DU诱发的Hchr 11基因突变率.结果 DU可明显降低细胞存活率,并使Hchr 11基因突变率显著增高;二甲基亚砜(DMSO)、Ca2+和Na2SeO3对DU诱发的细胞增殖死亡和基因突变有较好的保护效果.结论 DU对细胞存活的影响和基因突变作用可能与其诱发产生活性氧自由基及其与Ca2+的交换有关.
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mTOR信号途径与乳腺癌分子靶向治疗
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,发病机制复杂,其中涉及到很多信号通路如丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、磷酸肌醇3-激酶(phosphtidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(PKB,protein kinase B,Akt)信号通路的调控.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是PI3K/Akt下游的一种重要的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶,与很多癌症的发病与治疗有着密切的关系,它在细胞存活、生长及增殖中都具有重要的作用,mTOR的调节失常往往与乳腺癌的发生相关.分子靶向药物可通过阻断肿瘤细胞或相关细胞的信号转导,来控制细胞基因表达的改变,而产生抑制或杀死肿瘤细胞.作为mTOR的抑制剂,雷帕霉素(Rapamycin)在乳腺癌的分子靶向治疗中得到了越来越多的关注.本文对近几年来有关乳腺癌中mTOR信号通路及其蛋白的表达的研究和Rapamycin在乳腺癌分子靶向治疗中的临床应用等方面作一综述,并对乳腺癌中mTOR信号通路机理研究的意义进行展望.
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心功能不全的代谢性治疗
心功能不全在临床上是死亡率比较高的一类疾病.尽管β-受体阻滞剂、硝酸酯类、血管紧张素转换酶抑制剂在临床上广泛使用,但没有根本性扭转其死亡率居高不下的现状.以下综述笔者对代谢性治疗心衰的认识与体会.心功能不全代谢状况心脏是一个高效的泵器官,需要氧、需要能量维持其正常代谢,心肌正常收缩与舒张,依靠心肌细胞存活与稳定.ATP、肌酸磷酸、离子转运是不可或缺的条件.能量供给主要依靠葡萄糖、脂肪酸、乳酸,而氨基酸、酮体、丙酮酸通过糖异生供能则较少.游离脂肪酸作为供能物质,高能磷酸键产生量与氧耗量比值(P/O)约2.85,葡萄糖作为供能物质,其(P/O)约3.15,产生同量的高能磷酸键,葡萄糖代谢过程中较游离脂肪酸代谢过程中耗氧量为少.在心肌供血不足、心功能不全情况下,心脏在促进葡萄糖代谢,大限度地利用氧,而产出大量能量,从而在病理情况下维持心肌存活与心脏舒缩功能,有着极大临床意义.
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超声介入甲氨喋呤治疗孕囊型异位妊娠
异位妊娠是妇产科常见的急腹症.近年来,异位妊娠的发生率呈上升的趋势[1].随着血清人绒毛膜促性腺激素(human chrionic gonadotropin in beta subunit,β-HCG)测定敏感性的提高,阴道超声的广泛应用,早期异位妊娠的诊断更加准确,保守治疗已成为发展趋势.其中,甲氨喋呤(methotrexate,MTX)已经成为保守治疗过程中常用的有效药物.超声引导下介入治疗是介于手术和非手术之间的一种微创治疗,在超声引导下,可经阴道穹隆穿刺,直接将药液注入输卵管内的妊娠囊中,以期杀灭异位的胚胎组织;而治疗后血清β-HCG水平下降情况则是反映滋养细胞存活与否的主要指标.
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硒和B-27添加剂在神经干细胞存活与分化中的作用
目的观察微量元素硒和神经细胞培养添加剂B-27对神经干细胞存活与分化的影响.方法采用新生Wistar大鼠神经干细胞体外分离培养技术,应用盖玻片培养法和免疫细胞化学法来观察在无血清培养液中加入添加剂B-27和不含B-27时,硒对神经干细胞存活以及神经元分化标记蛋白β-微管蛋白、星形胶质细胞标记蛋白抗胶质细胞醋酸纤维蛋白(GFAP)和少突胶质细胞标记蛋白抗环核苷酸磷酸二酯酶(CNP酶)表达的影响.结果在培养液中加入B-27添加剂同时加入硒时,神经干细胞能够存活并且分化成熟良好.在不含B-27添加剂同时也不含硒的培养液中神经干细胞不能够存活.在不含B-27添加剂而含有硒时,神经干细胞则能够存活并且能分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,各种细胞的形态典型.显微镜下计数发现神经干细胞在含硒的培养液中向神经胶质细胞方向分化比例较高.其中神经元分化β-微管蛋白阳性细胞每高倍视野为11.2个.胶质细胞分化方向GFAP阳性和CNP酶阳性细胞计数平均每高倍视野分别为16.1个和9.3个.结论硒对于神经干细胞体外存活和分化是必需的营养成分.在不含B-27,但有硒存在时,神经干细胞能够存活并分化成熟.
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丙烯腈对中国仓鼠肺细胞细胞活力和间隙连接通讯功能的影响
目的探讨丙烯腈(ACN)对中国仓鼠肺细胞(CHL)细胞活力及细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响.方法镜下观察细胞形态学改变,采用MTT法测定细胞生长半数抑制浓度(IC50),应用荧光染料示踪技术观测ACN对CHL细胞GJIC的影响.结果 ACN染毒12和24 h,细胞生长IC50分别为435.73和251.09 μg/ml.低剂量组(12.5和25.0 μg/ml)细胞形态与对照组相比无明显改变,较高剂量组(50.0~200.0 μg/ml)细胞轻度受损(0~Ⅰ级),高剂量组(800.0 μg/ml)细胞明显受损(Ⅲ级).ACN原形在无明显细胞毒性剂量(10.0~50.0 μg/ml)时即可抑制GJIC,并呈持续抑制作用,存在剂量-效应和时间-效应关系.ACN经代谢活化后,可加重对细胞GJIC的抑制作用和细胞受损程度,但在染毒12 h后停止接触,该作用在一定程度上可逆转.牛磺酸作为一种重要的抗氧化剂,预处理细胞(牛磺酸剂量为10和20 mmol/L)可明显抑制ACN对细胞GJIC的下调作用.结论 ACN在较高剂量时对CHL细胞具有毒性作用,但在无明显细胞损伤剂量时即能明显抑制细胞GJIC功能,该抑制作用在停止接触ACN或有抗氧化剂存在时可逆转,提示氧化应激在ACN所致细胞GJIC功能下调中具有重要作用.
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中华眼镜蛇毒诱导人类小涎腺腺样囊性癌细胞凋亡报告
我们尝试应用近年发展起来的对恶性实体肿瘤有较高可评估率的新方法三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法),测定眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞株的抑制作用,测定眼镜蛇毒与癌细胞存活的量效和时效关系,应用HE染色观察眼镜蛇毒作用NACC细胞后其细胞形态学的改变,以及流式细胞术检测眼镜蛇毒作用后的NACC细胞凋亡等方面的实验,为眼镜蛇毒的抗肿瘤临床应用提供实验依据.
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99Tcm-TF与99Tcm-HL91心肌乏氧显像评估SMI心肌活力进展
SPECT心肌灌注显像是评价冠心病心肌缺血的无创方法.99Tcm-TF作为新型心肌显像剂,标记简便无需水浴,本底清除快,有效缩短待检时间,诊断心肌缺血/梗死效果佳,但低估了心肌细胞的活性.18F-FDG PET心肌显像是评判心肌活力有效方法,但因其普及率低、费用昂贵,存在一定的检查失败率等因素而无法广泛使用.99Tcm-HL91是近年来研制的乏氧组织显像剂,能直接与乏氧心肌组织结合,乏氧心肌显著摄取,正常心肌摄取少,坏死心肌不摄取.SMI是冠心病发生发展过程中的一种表现,是冠心病其危险的因素之一,但又常被忽视.SMI患者行99Tcm-TF联合99Tcm-HL91乏氧显像,对心肌缺血范围、严重程度及心肌活力的判断、合理治疗方案的选择、预后疗效的判定及减轻患者综合医疗负担等方面均有积极作用.
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钙激活中性蛋白酶介导雌激素增强MCF-7乳腺癌细胞的存活力
目的 探讨雌激素(E2)对MCF-7乳腺癌细胞钙激活中性蛋白酶1(CANP-1)基因表达和CANP蛋白酶活性的影响、以及CANP活性在E2增强细胞存活力中的作用.方法 以MCF-7乳腺癌细胞为研究模型、采用RT-PCR法检测mRNA表达、蛋白印迹法观察CANP特异性底物FAK蛋白剪切、血清饥饿诱导细胞死亡、锥虫蓝染色及细胞计数法检测细胞存活力.结果 E2(10 nmoL/L)可明显刺激乳腺癌细胞CANP-1基因表达上调,CANP抑制剂则可显著抑制E2诱导CANP-1基因上调;在无血清培养条件下,E2激活CANP活性及增加细胞存活力(14.3±4.9%,P<0.05),而CANP抑制剂可显著抑制E2诱导CANP激活以及细胞存活力增强(19.2±3.9%,P<0.05).结论 E2刺激MCF-7乳腺癌细胞CANP-1基因表达上调并增强CANP活性,后者可能参与介导血清饥饿时E2增强MCF-7细胞的存活力.
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VEGF反义核酸增强HL60和K562细胞对柔红霉素敏感性
研究发现恶性血液病细胞高表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),并不同程度表达VEGF受体[1~2],VEGF在白血病中的作用不够明确,可能是通过自分泌作用机制,促进白血病细胞存活和生长、降低白血病细胞对化疗药物的敏感性等.
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培养瘤细胞及瘤株不同冻存方法与细胞存活之间的影响因素初步探讨
在生物学和医学研究中,细胞培养技术是重要的手段之一,肿瘤研究中移植性肿瘤又称瘤株传代也是基本的常用技术.关于瘤细胞培养后和瘤株建成后如何将细胞系和瘤株保存好是很值得研究的内容.
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施万细胞对植入半横断脊髓内的神经前体细胞存活及分化的影响
研究表明,神经前体细胞移植在修复中枢神经系统损伤及其退行性疾病方面具有潜在的应用价值.为了探讨施万细胞对神经前体细胞在损伤脊髓内存活及分化的影响,本实验将施万细胞与神经前体细胞联合植入大鼠脊髓损伤处,主要观察神经前体细胞的存活、迁移和分化情况.
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自噬在细胞存活和死亡中的作用
自噬是亚细胞膜结构发生动态变化并经溶酶体介导对细胞内蛋白质和细胞器降解的过程.通过平衡细胞合成和分解代谢,自噬稳定细胞内环境,维持细胞的存活.然而,过度自噬可导致细胞发生Ⅱ型程序性细胞死亡.自噬与凋亡在细胞死亡过程中的关系十分密切.本文对自噬的过程及其在细胞存活和死亡中的作用作一综述.
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葡萄糖转运体GLUT1对CD4 T细胞激活和功能发挥至关重要
CD4T细胞激活后会增殖分化为效应性T细胞和调节性T细胞,进而介导免疫反应的发生。在离体状态下,不同亚型的T细胞,其代谢方式对糖酵解和氧化磷酸化的侧重不同,对于T细胞葡萄糖摄取和代谢的在体调控机制目前尚不清楚。尽管在T细胞上有诸多葡萄糖转运体的表达,但是GLUT1缺失选择性损伤胸腺细胞和效应性T细胞的代谢和功能。而静息T细胞在未激活之前都处于正常状态。GLUT1的缺失抑制T细胞葡萄糖摄取和糖酵解,生长和增殖,降低效应性T细胞存活和分化能力。更重要的是,Glut1缺失抑制效应性T细胞扩增以及诱导炎症免疫反应疾病发生的能力。相反的,调节性T细胞的数量并未减少,并且能够正常发挥对效应性T细胞的抑制作用,并不受Glut1表达的影响。这些结果提示在体调控CD4 T细胞激活和效应性T细胞扩增于存活中,对于Glut1的选择性需要。
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诱导性一氧化氮合酶是浆细胞存活信号通路的主要中介物
已知许多外源性刺激因子都能促进浆细胞的存活。然而,信号中间介导物是否参与调控浆细胞的存活还不清楚。本文的研究人员发现,诱导性一氧化氮合酶(iNOS)是支持浆细胞存活的一个重要介导分子。iNOS特异敲除的Nos2-/-B细胞在受到刺激后,具有活性的浆细胞的数目会相对减少。进一步研究发现,活性浆细胞数的减少并不是由于敲除鼠B细胞的激活信号不足,增殖缺陷或是浆细胞化缺陷引起的,而是Nos2-/-浆细胞本身存在细胞存活的缺陷。
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周围神经或其组织成分移植修复成年哺乳动物视网膜节细胞的损伤
本综述重点阐述了移植周围神经或其组织成分雪旺细胞、成纤维细胞和神经营养因子,改善成年哺乳动物中枢神经系统抑制神经再生的微环境、增强受损神经元的内在再生潜力,以促进节细胞损伤后的存活和轴突再生。
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pXZ208/gfp-aktl慢病毒表达载体的构建
Akt是蛋白激酶B(PKB)家族成员,是P13K(phosphoinositide 3-kinase)下游激酶.Akt参与胞内许多重要生理过程,包括细胞周期调节、细胞存活、细胞生长、糖原代谢及细胞迁移等[1].Akt具有促心肌存活作用,成为目前治疗心肌缺血研究的热点.本研究首次将 gfp-akt1融合基因克隆入pXZ208慢病毒载体,包装含GFP-Akt1的病毒感染心肌细胞,为揭示Akt促心肌存活的重要意义,以及心肌缺血治疗、缺血性心脏病基因治疗提供关键的实验手段.
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SGK1在多发性硬化机制研究中的意义
多发性硬化( multiple sclerosis ,MS)是中枢神经系统炎性脱髓鞘性自身免疫性疾病,其病因尚未明确。实验性自身免疫性脑脊髓炎模型( expreinmen-tal autoimmune encephalomyelitis , EAE )是MS 公认的动物模型,与MS在临床表现和病理特点等方面有诸多相似之处。 CD4+效应T细胞和相关细胞因子介入自身免疫应答,离子通道、黏附因子、细胞凋亡等诸多因素参与了MS/EAE 病理生理过程。尤其是以IL-23/Th17为主的炎性反应轴进一步揭示了自身免疫性疾病的发病机制。然而IL-23如何诱导Th17产生相应信号转导的机制还尚未明确。近的研究表明,血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1( serum and glucocorticoid-regulated protein kinase1, SGK1)可以作为IL-23的下游节点,促进Th17细胞的分化,上调细胞因子分泌水平,加重MS/EAE 的症状[1-3]。此外,SGK1作为多种细胞信号转导通路以及细胞磷酸化级联反应的功能型交汇点,在调节离子通道、细胞增殖以及细胞存活和凋亡信号转导中起到重要作用。 SGK1诸多的调节功能在 ME/EAE的病理生理过程中发挥了重要作用。
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神经营养素家族与周围神经再生的研究进展
周围神经损伤再生一直是临床医学亟待解决的难题之一.研究表明,神经再生修复是一个复杂的生物学问题,要进一步提高周围神经再生修复的效果,必须深入研究调节神经生长和生长方向的微环境因素.在周围神经再生微环境中,神经营养素家族(neurotrophins)发挥着维持神经细胞存活和再生功能的重要作用,其在临床上的应用也逐渐成为研究热点.神经营养素家族又称为神经生长因子家族,是一类结构和功能上密切相关、在核酸和氨基酸序列上存在高度同源性的蛋白质,属于神经营养因子中的重要家族,主要包括神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophin factor,BDNF)、神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)、神经营养素-4/5(neurotrophin-4/5,NT-4/5)、神经营养素-6(neurotrophin-6,NT-6)、神经营养素-7(neurotrophin-7,NT-7)等.我们现就这一家族在周围神经损伤修复中的应用研究现状及进展情况作一综述.