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2,5-己二酮中毒大鼠坐骨神经中PKA、PKC和CDK5含量的变化
目的 探讨蛋白激酶A(PKA),蛋白激酶C(PKC)和细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)在2,5-己二酮(HD)中毒性周围神经病发病过程中的作用.方法 雄性Wistar大鼠200、400mg/kg HD腹腔注射染毒,每周5次,连续8周,建立HD中毒性神经病模型.利用SDS-PAGE和Western Blotting方法检测坐骨神经胞浆和膜组分中PKA、PKC、p35前体、p35、p25和CDK5的相对含量.结果 PKA、PKC、p35前体、p25和CDK5含量在200和400mg/kg染毒组大鼠坐骨神经胞浆蛋白组分中均呈明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);PKC、p35前体和p35在胞膜蛋白组分中变化趋势与胞浆蛋白中相似,也明显升高,并且与对照组相比差异亦有统计学意义(P<0.05),但PKA、CDK5在坐骨神经胞膜蛋白组分中未能检出.结论 坐骨神经中PKA、PKC和CDK5含量明显升高,提示相关蛋白激酶含量的升高可能是HD致中毒性周围神经病的发病机制之一.
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明日叶查尔酮对胰岛素抵抗细胞PI3K-Akt-GLUT4信号通路的影响
目的 研究明日叶查尔酮(Angelica keiskei chalcones,AC)对胰岛素抵抗L6细胞磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶-葡萄糖转运体4(PI3 K-Akt-GLUT4)信号通路的影响.方法 采用高浓度胰岛素诱导的胰岛素抵抗L6细胞,分别加入5、10、20μmol/L终浓度的明日叶查尔酮共同培养24 h,葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测细胞PI3K和Akt的mRNA表达水平,蛋白印迹法检测GLUT4和Akt的蛋白表达水平.结果 胰岛素抵抗组细胞培养液的葡萄糖含量显著高于空白对照组(P<0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则降低(P<0.05);中、高剂量AC组细胞培养液葡萄糖含量均低于胰岛素抵抗组(P<0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则升高(P<0.05).结论 明日叶查尔酮可上调L6细胞胰岛素抵抗模型PI3K-Akt-GLUT4信号通路的表达水平,增强其对葡萄糖的摄取利用,改善胰岛素抵抗.
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铝致tau蛋白异常磷酸化的研究进展
铝是一种常见的环境与职业毒物,具有神经毒性,被认为与阿尔茨海默病的发病相关.阿尔茨海默病的主要病理特征包括老年斑和神经原纤维缠结的形成,其中神经原纤维缠结的形成与tau蛋白的异常磷酸化密切相关.铝通过怎样的机制导致tau蛋白的异常磷酸化,是研究的热点.
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安神汤含药血清对皮质酮损伤的PC12细胞PKC活性的影响
安神汤临床除治疗失眠症外,还用于以情绪或神志障碍为主要表现的精神神经系统疾病,有确切的抗焦虑作用.本研究拟在前期工作的基础上,以高浓度皮质酮诱导PC12细胞凋亡模拟焦虑症神经细胞损伤状态,以细胞凋亡的信号转导机制为背景,以胞内钙信号转导为切入点,观察安神汤含药血清对皮质酮干预的PC12细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响.
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仙甲汤对前列腺增生大鼠前列腺组织蛋白激酶表达的影响
目的观察大鼠前列腺组织蛋白激酶A、蛋白激酶C的表达.方法去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型,原位杂交法检测各组大鼠前列腺组织蛋白激酶A、蛋白激酶C的表达.结果前列腺组织PKA mRNA阳性表达率正常组高,模型组低,与仙甲汤各剂量组比较有极显著性差异(P<0.01);前列腺组织PKC mRNA阳性表达率则相反,正常组低,模型组高,与各治疗组比较有板显著性差异(P<0.01).结论模型大鼠前列腺组织蛋白激酶调控失衡,仙甲汤可通过调控蛋白激酶信号因子抑制前列腺增生.
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儿茶素单体对心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及机制研究
目的:观察没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法:建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤模型,倒置显微镜下观察加入各儿茶素单体(50,20,8 μg·mL-1)后,各组缺氧再给氧前后细胞形态学和搏动频率变化;以MTT法检测各组细胞的存活率;测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;测定心肌细胞膜ATP酶;分别给予蛋白激酶(PKC)阻断剂十字孢碱staurosporine(stau,10 nmol.L-1)和Gi/o蛋白失活剂pertussis toxin(FIX,200 μg·mL-1),以探讨其作用机制.结果:GCG,EGCG均能够增加心肌细胞存活率,增加SOD和ATP酶活性,降低心肌细胞LDH的释放,降低培养液中MDA的含量,给予PKC阻断剂和Gi/o蛋白失活剂后,与单纯GCG组、EGCG组比较,心肌细胞搏动频率和存活率降低,同时LDH,MDA释放量增加,SOD活性下降.结论:GCG和EGCG具有抗体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的作用,其机制可能与其清除自由基、抑制心肌细胞Ca2+超载以及心肌细胞蛋白激酶C和G蛋白的介导有关.
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HPLC测定养血颗粒中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷的含量
养血颗粒由制何首乌、枸杞子、熟地黄、山楂、桑寄生、杜仲等中药组成,具有养血调脂、补肝益肾的作用,用于治疗肝肾精血亏虚、头晕、须发早白、高血脂等症疗效显著.养血颗粒中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷具有降血脂的作用,并对蛋白激酶C活性有一定的抑制作用,是其主要有效成分之一.为控制本品的质量,作者参照文献[1,2],采用HPLC测定了养血颗粒中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷的含量.
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电针对心肌缺血大鼠模型心肌ATP敏感钾通道及蛋白激酶mRNA表达的影响
目的 观察针刺不同经脉穴位对心肌缺血大鼠模型心肌细胞ATP敏感钾通道(Kir6.1、Kir6.2)及其结合蛋白(SUR2A、SUR2B)和蛋白激酶(PKA、PKG、PKCβ2) mRNA表达水平的影响.方法 健康雄性SD大鼠采用皮下多点位(四肢内侧根部和背部)注射ISO(85 mg/kg)制备心肌缺血模型后随机分成模型组、内关穴组、列缺穴组、非经非穴组(每组10只),另选择1 0只健康大鼠作为对照组.给予内关穴组、列缺穴组、非经非穴组大鼠相应电针干预,采用疏密波,强度2~3 mA,频率2~ 20 Hz,留针20 min,每日1次,连续7日.应用Real-time PCR检测左心室肌Kir6.1、Kir6.2及SUR2A、SUR2B、PKA、PKG、PKCβ32 mRNA表达水平.结果 与对照组比较,模型组各指标mRNA表达升高(P<0.01).与模型组比较,内关穴组、列缺穴组各指标mRNA表达降低(P<0.01).与内关穴组比较,列缺穴组、非经非穴组各指标mRNA表达升高(P<0.01);与列缺穴组比较,非经非穴组各指标mRNA表达升高(P<0.05).结论 电针内关穴可逆转缺血心肌细胞ATP敏感型钾通道(Kir6.1、Kir6.2)及其结合蛋白(SUR2A、SUR2B)与蛋白激酶(PKA、PKG、PKCβ2)mRNA表达的变化.
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中医药治疗糖尿病肾病的机制研究
糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病(DM)常见的慢性微血管并发症,其病因和发病机制尚未完全阐明.一般认为,主要包括肾小球高滤过,生化代谢紊乱(多元醇途径、蛋白质非酶糖化及脂质代谢异常等),氧化应激,蛋白激酶C活化,细胞因子异常分泌(包括IL-1,IL-6,TGF-β,TNF,PDGF,IGF,ET,NO等),血液流变学变化及遗传易感性等多因素相互影响,终导致DN的发生(1,2).近年来,有关DN的中医药研究取得一定进展,本文试就中医药治疗DN的机制研究综述如下.
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金叶败毒制剂抑制人巨细胞病毒蛋白激酶pul97的实验研究
目的研究中药金叶败毒制剂对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)蛋白激酶pul97的抑制作用,探讨其治疗HCMV感染的分子机制.方法采用半定量RT-PCR方法,检测中药金叶败毒制剂和更昔洛韦(GCV)干预后感染细胞HCMV pul 97mRNA表达水平,应用MTT法观察两种药物对感染细胞的增殖活性的影响.结果金叶败毒制剂和更昔洛韦对HCMV pul 97mRNA的表达有明显的抑制作用,在HCMV感染72h后两种药物均可明显增强感染细胞的增殖活性.结论金叶败毒制剂可能通过抑制HCMV蛋白激酶pul 97基因的表达而抑制HCMV的表达和复制,从而促进感染细胞的增殖而达到抗病毒作用.
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猪伪狂犬病毒蛋白激酶基因的序列测定与分析
对伪狂犬病毒湖北株(PRV HB株)蛋白激酶(PK)基因进行了克隆和序列测定.分析比较了该序列与PRV NIA-3株、Ka株以及HSV-1、VZV PK基因的同源性.结果显示,在测定全长1?312bp的DNA序列中,包括着一个1?002核苷酸的开放读框,可编码334个氨基酸组成的多肽.PRV-HB株PK与PRV-NIA3、PRV-Ka、HSV-1、VZV PK基因比较,核苷酸的同源性分别为98.7%、97.5%、50.7%和42.0%;基因编码区氨基酸序列的同源性分别为98.2%、95.8%、37.7%和37.2%.PRV PK具有细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域的保守氨基酸共有序列和亚结构域特征序列.
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乳腺癌上皮间质转化标志物的研究进展
转移和复发是乳腺癌的主要死因.近年来研究发现,上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是乳腺癌转移的主要机制之一.EMT是指细胞由上皮表型向间质表型转变的过程,目前许多研究者报道了EMT相关的基因、蛋白、microRNA以及激酶等的改变与乳腺癌侵袭和转移的关系,然而到目前为止,有关EMT标志物与乳腺癌的关系缺乏系统的总结.本文就EMT标志物与乳腺癌侵袭和转移的关系进行综述.
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基于贝叶斯决策理论的磷酸化位点蛋白激酶识别算法
通过提出一种新颖的生物信息学算法,以准确识别已知磷酸化位点的蛋白激酶信息,进而解决蛋白激酶的信息缺乏问题。方法根据人类激酶的聚类规则,首先从新版本的磷酸化数据库Phospho.ELM(9.0)中提取出激酶特异性的磷酸化数据,构建用于激酶识别的数据集。然后基于贝叶斯决策理论,分析阳性数据和阴性数据中磷酸化位点附近的氨基酸分布规律,进而给出相应的统计模型并使用留一法对模型进行评估。结果对 MAPK、PKA 和 RSK 3个激酶家族的测试表明,在假阳性率不超过1%的高置信度水平下,激酶识别的准确率分别达到了23%、24%和33%。同时,该算法的识别结果明显优于 KinasePhos、Netphosk 等蛋白质磷酸化位点预测方法。结论本文提出的基于贝叶斯决策理论的磷酸化位点激酶信息识别算法可有效提高对已知磷酸化位点的蛋白激酶识别性能,有助于理解蛋白质磷酸化的生物机制。
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14-3-3蛋白的新认识
14-3-3蛋白是一个在真核生物中广泛表达的高度保守的酸性蛋白家族,主要以同源/异源二聚体形式存在,在哺乳动物中由7种亚型组成。7种不同亚型的14-3-3蛋白在人类细胞中发挥着重要作用。本文就14-3-3蛋白的序列保守性和独特性、结构特征、结合靶点、调控机制以及作为潜在药物治疗靶点的相关研究进展做一综述。
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低密度脂蛋白诱导肾小管上皮细胞增殖的信号通路
为观察低密度脂蛋白(LDL)对肾上管上皮细胞的影响及涉及的相关信号传导机制,以人近曲肾小管上皮细胞系(HK-2)为对象,采用3H-TdR掺入与细胞计数测定增殖;特异性底物磷酸化法测定细胞外信号调节激酶(ERK)活性;凝胶迁移率法检测转录活化因子(AP-1)DNA结合活性.发现LDL100~500mg/mL刺激HK-2细胞72h可促进其增殖:加入LDL 250mg/ mL 后2~60min 内可使该细胞ERK活性明显增加,10min 时达高峰;不同剂量(50~500mg/mL)刺激时,ERK活性分别较对照组增加1.56~2.19倍.LDL促使核内转录因子AP-1结合活性增加.ERK特异性阻断剂PD098059(50mmol/L)可以分别阻断LDL 刺激的HK-2细胞ERK活性和DNA合成;PMA阻断PKC信号途径后,LDL对于ERK的活化效应明显减弱.
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胰岛素抵抗大鼠骨骼肌蛋白激酶B的表达
蛋白激酶 B(protein kinase B,PKB)具有促进生长、增殖、抑制凋亡的作用,对糖代谢有明显影响.本研究通过高脂喂养诱导Sprague-Dawley(SD)大鼠产生胰岛素抵抗,检测大鼠骨骼肌中胰岛素诱导的蛋白激酶B的表达的改变,揭示胰岛素抵抗与蛋白激酶B表达的关系.
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灯盏花注射液逆转自发性高血压大鼠心肌间质重构
蛋白激酶C (PKC)是细胞内信号传递中重要的中间环节,研究表明灯盏花素是PKC抑制剂[1],灯盏花可能有抑制成纤维细胞增生和胶原合成,逆转高血压心肌间质重构的作用,目前国内外尚未见有关报道.为此,我们观察了灯盏花对自发性高血压大鼠(SHR)心肌间质重构逆转作用.
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CDK4在子宫内膜癌组织中的表达及意义
CDK4是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinases,Cdks)家族的成员之一,是细胞周期G1期的正调控因子.哺乳动物细胞增生及分化的调节大部分发生于细胞周期G0/G1期和/或G1/S期的转变时期,CDK4作为G1期重要的调控因子,已发现它在多种肿瘤中出现表达异常[1].
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2.125大黄素收缩大鼠结肠平滑肌细胞信号机制研究
目的观测大黄素对结肠平滑肌细胞收缩、胞浆钙离子浓度和蛋白激酶Cα的影响,探讨大黄素发挥作用的细胞内信号转导机制.方法取Wistar大鼠远端结肠,采用含0.1%Ⅱ型胶原酶、0.01%大豆胰蛋白酶抑制剂的消化液消化,收集分离的细胞供实验用.
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蛋白激酶C在培养神经元突起生长中的作用
为探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在神经再生中的作用,本研究在对培养神经元生长规律与PKC活性作相关分析的基础上,观察PKC活性改变对原代培养的脊髓前角神经元突起生长状态的影响.以5-氟尿嘧啶(5-Fu)抑制有丝分裂代替免疫淘汰法提高神经元的纯度进行胎鼠脊髓前角神经元的原代培养.