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壬基酚对胎鼠海马突触形态可塑性的影响
壬基酚(nonylphenol,NP)作为一种表面活性剂被广泛应用于化学洗涤剂中,随着生活水平的提高和生活方式的改变,洗涤剂在日常生活中被大量使用,NP的安全性越来越受到关注.有关研究已表明NP对性发育方面的影响,但有关NP对大脑形态学的影响尚未见相关的报道[1-2].本实验通过透射电子显微镜及体视学方法研究NP对胎鼠海马结构的改变,探讨其对孕期母鼠暴露下胎鼠脑组织形态结构的影响.
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围孕期持续低剂量暴露PBDE-209对胎鼠心脏毒性影响
目的 针对环境污染中十溴联苯醚(PBDE-209)对母婴健康存在潜在危害日益受到重视,研究经口胃灌十溴联苯醚(PBDE-209)对胎鼠心脏毒性的影响.方法 对母代孕期前后及哺乳期持续高剂量胃灌十溴联苯醚(PBDE-209)后,观察其胎鼠心脏指数及miR-1、miR-126在心脏上表达的变化.结果 实验组出生体重及数目,心脏指数与对照组相比有变化.实验组胎鼠在出生1～2、3、5和6周时,miR-1和miR-126表达量与对照组比较,均有下降,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论 围孕期持续暴露高剂量PBDE-209后,对胎鼠心脏发育存在毒性影响.
关键词： 多溴联苯醚(PBDE) 胎鼠 心脏毒性 -
1-32 美他多辛的一般生殖毒性
目的研究美他多辛对大鼠是否具有生殖毒性.方法按照一般生殖毒性试验规范的要求给药,各组分别灌胃给予美他多辛0、400、800、1 600 mg/kg.结果一般毒性表现:400 mg/kg组大鼠未见明显毒性反应,800 mg/kg组个别大鼠出现后肢麻痹,1 600 mg/kg组雌雄大鼠都有后肢麻痹,消瘦,增重减慢.生殖毒性:雄性800 mg/kg组附睾精子数减少,生育率降低.1 600 mg/kg组睾/体比降低,附睾精子数减少,交配率和生育率降低.雌性800 mg/kg和1 600 mg/kg组受精率、妊娠率降低.胚胎毒性:400 mg/kg组胎鼠体重减轻,800 mg/kg和1 600 mg/kg组着床前死亡率增加,胎鼠身长、尾长、体重均减小,胸骨发育迟缓.致畸性:各组均未发现外观、内脏和骨骼畸形.结论在本实验条件下,美他多辛对SD大鼠无致畸性,对成年大鼠生殖毒性的大无作用剂量为400 mg/kg,胚胎发育毒性的无作用剂量小于400 mg/kg.
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金雀异黄素对体外小鼠肢芽软骨发育的影响
植物雌激素在结构上与天然及人工合成的雌激素、抗雌激素相似.人类食物中大豆及其制品中植物雌激素含量较高,尤以异黄酮类占优势,金雀异黄素为其主要成分,而且活性也强.本研究以金雀异黄素与第12天胎鼠肢芽作培养,观察其对软骨生长发育的影响,为深入研究植物雌激素与骨代谢的关系提供依据.
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超声波生物学效应及产科超声检查的安全性
产科超声检查技术已从原来的二维黑白超声、频谱多普勒超声、彩色多普勒超声发展到现在的三维、四维超声.本文主要介绍自20世纪70年代至今,中外学者对超声生物学效应的大量研究,包括动物研究、人体研究及流行病学研究,并且指出,目前关于三维、四维超声检查对胎儿的生物学效应研究较少,广大超声工作者对这方面研究应重视起来.
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胎鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化与鉴定
目的 探讨胎鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化与鉴定的方法,为胎儿和早产儿骨骼肌发育程序化的研究提供实验基础. 方法 Sprague-Dawley大鼠孕18 d时剖宫取出胎鼠,手术显微镜下取胎鼠四肢骨骼肌肌肉,采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步消化法分离胎鼠骨骼肌卫星细胞,差速贴壁法进行纯化.原代培养的生长培养基为(DMEM/F12+ 20％ FBS+ 10％ HS+5 ng/ml bFGF).分化培养基为(DMEM/F12+ 2％ HS).CCK-8法绘制胎鼠骨骼肌卫星细胞生长曲线图,细胞免疫组化染色鉴定纯化后细胞的肌源性标志蛋白Desmin,观察分化培养基条件下骨骼肌卫星细胞的成肌分化特性. 结果 胎鼠原代骨骼肌卫星细胞在培养的第3天进入对数生长期,5～6d达增殖平台期;纯化后的细胞90％以上表达结蛋白(Desmin).在分化培养基的诱导下细胞之间相互融合形成具有自发节律性收缩特性的多核肌管. 结论 采用消化法和差速贴壁法分离纯化胎鼠骨骼肌卫星细胞,能够获得高活性和高纯度的具有成肌分化能力的骨骼肌卫星细胞.
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清开灵注射液对大鼠胎鼠海马神经细胞凋亡的影响
大量文献报道[1],神经细胞凋亡在神经细胞缺血性损伤中起十分重要的作用,药物可通过干预凋亡过程阻止其进一步发展,而发挥对神经细胞损伤的保护作用.细胞内Ca2+超载是缺血再灌注性脑损伤时发病机制之一,又在缺血后神经元凋亡发生中起着关键作用,而一些钙离子抑制剂或药物可抑制细胞内[Ca2+]i升高,可阻止凋亡的发生[2～4].
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孕鼠肝内胆汁淤积症致胎鼠心肌细胞凋亡
妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是妊娠期特有的并发症,临床表现为妊娠中、晚期出现皮肤瘙痒和/或黄疸;孕妇血液中胆汁酸水平明显增加;并可经胎盘转运至胎儿,致胎儿脐静脉血和羊水中胆汁酸浓度也异常增高.大量临床研究显示,ICP孕妇血液中胆汁酸水平愈高,胎儿窘迫发生率亦愈高[1].药理学和毒理学基础研究表明,胆汁酸对动物组织和细胞具有明显的毒性作用,可以引起细胞凋亡和/或死亡.本研究应用雌、孕激素建立ICP孕鼠模型,探讨ICP时胎鼠心肌细胞凋亡及凋亡调控基因BCI2-和BAX的表达.
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蛋白激酶C在培养神经元突起生长中的作用
为探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在神经再生中的作用,本研究在对培养神经元生长规律与PKC活性作相关分析的基础上,观察PKC活性改变对原代培养的脊髓前角神经元突起生长状态的影响.以5-氟尿嘧啶(5-Fu)抑制有丝分裂代替免疫淘汰法提高神经元的纯度进行胎鼠脊髓前角神经元的原代培养.
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胎鼠心脏离体培养的新方法
在发育学研究领域，胚胎器官的离体培养技术是研究胚胎发育的关键技术之一。目前，胎鼠心脏的离体培养方法主要有两种。一种是完整心脏的离体培养，即将胚胎心脏取出后放置在液态培养基中进行培养。该方法只适用于胎龄小于12．5天的早期胎鼠，晚期胎鼠心脏培养不适用于此方法。另一种是心脏的切片培养，即将心脏切成150～500μm的薄片后放置在多孔膜的液-气交界面处进行培养。本方法能够培养较长时间，且适用于任何年龄段的心脏，包括成年鼠和成人的心脏。但是该方法所需设备较多，且心脏失去了正常的三维结构，因此不能从整体上观察心脏的发育过程。
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H5N1禽流感病毒感染孕鼠的研究
目的 用H5N1禽流感病毒感染昆明孕鼠,检测病毒在感染孕鼠各组织脏器中的复制及分布情况,并证明病毒能否通过孕鼠的胎盘垂直传染给胎鼠.方法 用虎源H5N1亚型禽流感病毒滴鼻感染妊娠10～12 d的昆明孕鼠,观察孕鼠感染后的临床症状.接种病毒后第3、4、5、6和7 d分别处死3只孕鼠,取孕鼠的肺、脑、脾、肾、子宫、胎盘及胎鼠,利用RT-PCR、Real-time PCR和病毒分离方法检测各组织中的病毒核酸和病毒滴度,并进行病理组织学与免疫组织化学检测.结果 昆明孕鼠接种病毒后第3 d,即可在肺、脑、脾、肾、子宫及胎盘组织中检测出H5N1禽流感病毒核酸,并从子宫、胎盘分离出H5N1禽流感病毒;感染后第6 d,从胎鼠体内检测到病毒核酸并分离出H5N1禽流感病毒.结论 H5N1亚型禽流感病毒可以感染孕鼠,在孕鼠子宫和胎盘复制,感染后期可通过胎盘屏障传给胎鼠.
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孕期弓形虫感染对胎鼠体内微量元素的影响
目的 探讨刚地弓形虫感染孕鼠后对胎鼠体内微量元素锌(Zn)、铜(Cu)、铁(Fe)含量的影响.方法 孕中期BALB/c孕鼠经腹腔接种弓形虫速殖子.分别于孕10、12、14、16和18 d剖杀,取胎盘,制作组织压片及病理切片,观察孕鼠胎盘组织的感染及损伤情况;取胎鼠组织,采用原子吸收分光光谱法测定Zn、Cu、Fe含量,采用DAB增强的Perl's铁染色观察胎鼠组织中Fe的分布.结果 感染组孕鼠胎盘组织压片可见大量弓形虫速殖子,病理切片HE染色可见炎症细胞浸润及凋亡小体.感染组胎鼠在孕10 d时体内Zn和Fe含量与未感染组比较差异无统计学意义(P＞0.05),在孕12～18 d均低于未感染对照组(P＜0.05);Cu含量在孕10、12、14 d与未感染组比较差异无统计学意义(P＞0.05),在孕16、18 d均低于未感染组(P＜0.05).感染组胎鼠组织铁染色强度与未感染对照组相比明显减弱.结论 孕期感染弓形虫可损伤胎盘组织,进而影响其转运功能,使胚胎体内Zn、Fe和Cu含量降低,影响胚胎的生长发育.
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彩超照射对中孕胎鼠肾小管上皮细胞凋亡及超微结构的影响
目的应用彩色多普勒超声照射中孕期大鼠,观察胎鼠肾小管上皮细胞凋亡及超微结构的变化.方法 32只孕14 d SD大鼠按彩超照射时间不同随机等分为4组,Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(照射10 min组)、Ⅲ组(照射20 min组)、Ⅳ组(照射30 min组),仪器采用Acuson公司Sequoia-512型彩色电脑声像仪,照射条件:4V1探头,二维频率3.0 MHz,彩色频率CD=3.0 MHz,Tis=1.8,MIcd=1.6.照射后24 h取胎鼠肾脏标本,HE染色光镜观察组织结构;TUNEL法检测凋亡细胞,采用Leica Q500MC型图像分析仪进行图像分析;透射电镜观察超微结构变化.结果各组光镜下观察肾脏组织结构均未见异常;Tunel法检测,各组胎鼠肾小管上皮内均可见散在的棕黄色淡染的Tunel阳性表达,图像分析统计结果显示:Ⅱ组、Ⅲ组胎鼠肾小管上皮Tunel阳性表达强度与Ⅰ组无显著差异(P＞0.05);Ⅳ组表达强度与Ⅰ组有显著差异(P＜0.05).照射30 min组胎鼠肾脏电镜检查发现染色质浓缩边集、线粒体肿胀等超微结构变化.结论彩色多普勒超声照射中孕期大鼠超过30 min可引起胎鼠肾小管上皮细胞凋亡增多,超微结构发生轻微改变.
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叶酸对胚胎大鼠心脏细胞凋亡及 Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
目的：：观察叶酸对妊娠大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,在细胞水平探讨叶酸预防先天性心脏畸形的作用及机制,为临床应用叶酸预防出生缺陷性疾病提供理论和实验依据。方法：成年雌性SD大鼠40只,随机分为对照组、大、中、小剂量叶酸组。叶酸组受孕后灌胃给予2、1、0.5 mg/kg/d等不同剂量叶酸,自受孕日开始持续10天。 ED13.5天处死大鼠并取胎鼠心脏,常规制备组织切片,免疫组化检测Bax、Bcl-2的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果：与对照组比较,叶酸干预组的细胞凋亡率、Bax表达均明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达显著增高(P<0.05)；叶酸不同剂量组间比较,Bax和Bcl-2蛋白表达、细胞凋亡率在大、中剂量组与小剂量组差异显著(P<0.05),大剂量组与中剂量组比较差异无统计学意义( P>0.05)。结论：叶酸干预可降低胎鼠心肌细胞的凋亡率和Bax的表达,提高Bcl-2的表达。一定范围内,叶酸对Bax、Bcl-2表达及细胞凋亡率的影响与剂量有关联。叶酸抑制心脏细胞凋亡的作用可能与预防畸形的作用机制有关。
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三七总皂甙促进离体胎鼠皮层神经干细胞增殖、分化的实验研究
目的:研究三七总皂甙对胎鼠皮层神经干细胞增殖、分化、自我更新及BDNF、bFGF表达的作用.方法:选取E17胎鼠皮层细胞,通过原代细胞培养、传代、单细胞克隆和免疫细胞化学方法.结果:给药组原代、P1、P2细胞都能够形成较多的神经球;给药组P1细胞的单细胞克隆能够形成神经球;与对照组比较,给药组原代细胞培养4dNestin、PCNA、Tuj-1、NF、Vimentin、GFAP、bFGF、BDNF阳性细胞数均明显增多,阳性细胞能够形成明显的团状.结论:体外三七总皂甙可能通过促进胎鼠皮层神经干细胞或前体细胞bFGF、BDNF自身合成增加,通过自分泌或旁分泌作用,促进其存活、增殖、分化和自我更新.
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晚孕期彩超重复照射对胎鼠中枢神经P53蛋白表达及超微结构的影响
目的对比研究诊断用彩色多普勒超声以不同时限单次及重复照射对胎鼠大脑皮层神经元P53蛋白表达及超微结构的影响.方法彩超照射孕16天SD大鼠子宫体表投影区,按照射次数分为单次照射和重复照射两大组,重复照射组为首次照射间隔48 h后,相同声场条件下再照射一次;以上两大组再按每次照射时限的不同各自划分为照射10 min组、20 min组、30 min组及对照组.各组于既定时间照射后24 h取胎鼠脑组织标本,免疫组化方法检测P53蛋白的表达,透射电镜观察超微结构的变化.结果照射10 min时:单次照射组、重复照射组P53蛋白表达与对照组无显著差异(P＞0.05)超微结构亦未见明显异常.照射20 min、30 min时:单次照射组及重复照射组P53蛋白表达均增强,与对照组有显著差异(P<0.05);且重复照射组与单次照射组之间也有显著性差异(P<0.05).电镜观察见神经元染色质浓缩边集、线粒体肿胀变性及神经元突起肿胀变性,重复照射30 min组表现为明显且伴有血管内皮细胞的超微结构改变.结论①晚孕期彩超照射SD大鼠子宫投影区超过20 min,胎鼠大脑皮层神经元p53表达增加,超微结构出现改变;②相同照射时限内重复照射对胎鼠脑组织p53表达及超微结构的改变明显高于单次照射.
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彩色多普勒超声对胎鼠大脑Fos蛋白表达影响的实验研究
目的探讨诊断用彩色多普勒超声对胎鼠中枢神经系统的影响.方法利用彩超照射孕18天大鼠子宫体表投影区,滑行照射30min,间隔不同时间留取胎鼠脑组织标本,分为照射后即刻、30min、2h、4h、8h及24h共6组及各自的对照组.应用免疫组化方法检测Fos蛋白的表达及出现的时间顺序.结果①照射后即刻及30min组仅见极少量着色浅淡的Fos阳性细胞,照射后2h出现密集分布的深染Fos阳性细胞,照射后4h及8h阳性细胞数逐渐下降,而照射后24h再次出现Fos蛋白高表达.②对照组各时间点均未见着色的Fos阳性细胞.结论诊断用的彩超照射孕鼠30min,可激活胎鼠脑组织c-fos基因,并诱导其转录和表达,其高表达时间出现于照射后2h及24h.
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宫内窒息鼠损伤肝NO,SOD和NOS的变化
目的:探讨宫内窒息胎鼠在缺血缺氧再灌注过程中肝脏组织SOD、MDA、NO及NOS的改变,以及肝脏病理变化方法:取胎龄21d缺血缺氧及再灌注后胎鼠肝组织,通过生化方法检测肝组织内SOD,MDA,NO的变化.应用免疫组化SABC法检测eNOS和iNOS活性,图像分析系统分析二种NOS光强度(1)结果:随缺血再灌注时间延长,肝组织SOD活性逐渐下降,至24h活性低(SOD,NU.g-1,32.3±2.4 vs 62.7 ± 4.6,P＜0.01).MDA含量逐渐升高,至24h含量高(MDA,μmol.g1,3.8±0 5 vs 2.5±0.3,P＜0.01);肝组织NO含量在缺血及再灌注早期下降,在再灌注后期明显升高,再灌注6h达高峰(NO,mmol.g-1,1860±350 vs 1250±120,P＜0.01).以上三组数据以缺血30min组改变明显.随缺血再灌注时间延长,eNOS光强度逐渐增强,即活性下降,至24h活性低(eNOS,152.2±4.7 vs 125.1±3.6,P＜0.01).而iNOS光强度逐渐下降,即活性增高,至6h达高峰(iNOS,95.6±4.6 vs 135.1 ± 2.6,P＜0.01).二种NOS活性变化以缺血30min组明显.结论:缺血缺氧及再灌注损伤中肝脏SOD下降,MDA上升,NO大量生成,eNOS活性减弱,而iNOS活性渐增强.
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胎鼠海马神经元培养方法的改进及鉴定
目的 优化海马神经元原代培养方法.方法 取孕17～18d胎鼠海马,经过剪碎、消化、离心和吹打过滤后种板,根据孵育后更换为无血清培养基的时间不同分为A组和B组.A组4h后更换,B组l2h后更换.观察并记录第2、3、4、5天两组神经元生长状况,并于第7d用神经元特异性烯醇化酶荧光染色法鉴定神经元,计算其纯度.结果 (1)4～6h后细胞已贴壁生长,2d后胞体增大,3d时突起长出,5d后突起变长变粗并有分支形成,相互连接呈网状.(2)7d后行免疫荧光染色,为阳性结果,证实为神经元,且A组神经元纯度显著高于B组(P＜0.05).结论 改进后的方法可培养出生长状况良好且纯度更高的神经元.
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同种心肌细胞移植到大鼠瘢痕心肌组织的实验研究
心肌梗死所致的心肌细胞缺失和瘢痕形成是心力衰竭乃至死亡的病理基础.药物治疗、介入治疗和外科搭桥手术虽能改善症状,甚至使闭塞的血管再通,却不能替代坏死心肌,彻底改善心功能.故本研究将胎鼠心肌细胞移植到心肌梗死后瘢痕心肌组织中,本研究旨在观察同种心肌细胞移植到受损心肌组织中能否生存增殖,形成含有血管的心肌样组织,改善心肌梗死后心脏功能.
