144 金雀异黄素对乳腺癌发生的影响

随着对金雀异黄素生物学活性研究的深入,大量资料表明金雀异黄素具有预防乳腺癌发生的作用,但亦有一些资料表明金雀异黄素有促进乳腺癌发生的危险.本文综述了近年来国外关于金雀异黄素对乳腺癌发生影响的流行病学调查、动物实验和体外实验研究结果.

金雀异黄素抑制人胃癌细胞增殖作用的研究——抑制细胞DNA合成与cyclin D1表达的研究

采用细胞增殖、DNA合成实验观察了金雀异黄素(Gen)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用,并观察了Gen对人胃癌细胞细胞周期素D1 (cyclin D1)蛋白的表达情况.结果显示,Gen对胃癌细胞生长及其DNA合成有抑制作用,并降低cyclin D1蛋白的表达,且呈剂量-效应关系.结果证实,Gen抑制胃癌细胞增殖作用的机制之一可能是通过抑制DNA合成及抑制cyclin D1的表达.

金雀异黄素的抗雌激素效应

应用雌激素耗尽的方法诱导乳腺癌细胞株MCF-7和T47D发生凋亡,从而探讨金雀异黄素(genistein, GS)对凋亡的影响作用.结果表明,同抗雌激素药物它莫西芬类似,32×10-6mol/L 及96×10-6mol/L GS可加剧雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用,且这种效应存在着良好的剂量-效应关系.结果提示GS对女性乳腺癌发病率的预防作用是通过其抗雌激素效应诱导细胞的凋亡而实现的.

金雀异黄素对MCF乳腺癌细胞NOS、GSH-Px活性及NO、GSH和MDA含量的影响

目的探讨金雀异黄素对MCF乳腺癌细胞抑制作用的机理.方法在体外培养的MCF乳腺癌细胞中加入不同浓度的金雀异黄素,24h后收集细胞和培养液,分别采用酶法和分光光度法测定了细胞匀浆液和培养液中一氧化氮合酶(NOS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及一氧化氮(NO)、还原性谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量.结果加入金雀异黄素作用后,细胞匀浆液和培养液中NOS、GSH-PX活性及NO含量明显升高(P＜0.05,P＜0.01).GSH、MDA含量则明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论金雀异黄素可影响MCF乳腺癌细胞NO生成系统和抗氧化系统,这可能是金雀异黄素抑制乳腺癌作用机理之一.

金雀异黄素诱导人胃癌细胞凋亡的机制研究

采用4',6-二乙酰基-2-苯基吲哚染色、琼脂糖凝胶电泳实验观察了金雀异黄素(Gen)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用,并采用Western Blot法检测Gen对人胃癌细胞p53、Caspase-3蛋白的表达情况.结果显示,Gen诱导了胃癌细胞凋亡,并抑制突变型p53蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达.结果提示,Gen抑制突变型p53蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一.

金雀异黄素诱导人乳腺癌细胞凋亡作用机制研究

目的探讨金雀异黄素对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及作用机制.方法采用MMT法、凋亡细胞的荧光显微镜、电镜观察和流式细胞仪的检测,观察了不同剂量的金雀异黄素诱导细胞凋亡.同时采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bax和癌基因erbB-2蛋白的表达.结果通过荧光显微镜和电镜技术观察到凋亡的MCF-7细胞.流式细胞仪也检测到了金雀异黄素诱导MCF-7细胞产生凋亡,并随着金雀异黄素浓度的增加,细胞凋亡率显著增加.蛋白水平检测表明金雀异黄素促进MCF-7细胞Bax表达升高,抑制erbB-2表达.结论金雀异黄素可诱导MCF-7细胞凋亡,并主要是通过调节Bax和erbB-2蛋白表达实现的.

金雀异黄素诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡及其机制研究

目的 探讨金雀异黄素对结肠癌细胞HCT-116的细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制.方法 不同浓度金雀异黄素处理HCT-116细胞,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位的变化,并用透射电镜观察细胞的超微结构.结果 金雀异黄素呈剂量和时间依赖性地抑制细胞增殖.0～100μmol/L的金雀异黄素处理细胞24 h后引起G2/M期阻滞,凋亡峰Sub-G1所占细胞比例从(1.63±0.44)％增至(8.33±1.51)％(P＜0.01),早期凋亡细胞从(1.93±0.32)％增至(7.25±0.86)％(P＜0.01).透射电镜下细胞出现凋亡特征性改变.100 μmol/L金雀异黄素处理后细胞内ROS水平在2h时增至处理前的1.81倍,(15.53±1.55)％ vs(8.57±0.35)％,P＜0.01,细胞线粒体膜电位在1h时迅速下降了87.8％,(0.82±0.02)％vs(6.70±0.21)％,P＜0.01.结论 金雀异黄素抑制结肠癌细胞株HCT-116的细胞增殖,引起G2/M期细胞阻滞并促进细胞凋亡,可能与升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位有关.

金雀异黄素对体外小鼠肢芽软骨发育的影响

植物雌激素在结构上与天然及人工合成的雌激素、抗雌激素相似.人类食物中大豆及其制品中植物雌激素含量较高,尤以异黄酮类占优势,金雀异黄素为其主要成分,而且活性也强.本研究以金雀异黄素与第12天胎鼠肢芽作培养,观察其对软骨生长发育的影响,为深入研究植物雌激素与骨代谢的关系提供依据.

金雀异黄素对巨噬细胞RAW 264.7 增殖、形态和细胞周期的影响

目的 研究金雀异黄素对巨噬细胞RAW 264.7增殖、细胞形态及细胞周期的影响,以探讨其对免疫系统的作用.方法 以鼠源巨噬细胞系RAW 264.7为细胞模型,将金雀异黄素用二甲基亚砜(DMSO)溶解,再用培养液稀释成所需终浓度为12.5、25、50、100μmol·L-1的4组及溶剂对照组(DMSO体积含量比低于0.1%).通过WST-1细胞增殖实验、倒置相差显微镜及流式细胞仪分别检测金雀异黄索对巨噬细胞的增殖、细胞形态及细胞周期的影响.结果 金雀异黄素对巨噬细胞的影响呈时间和剂量依赖关系.56~100 μmol1·L-1浓度的金雀异黄素作用巨噬细胞24 h和48 h后均能抑制细胞增殖,细胞增殖率分别为77%～81%、58%~73%(P<0.01);并能影响细胞形态改变,表现为细胞体积增大,并形成较长伪足.流式细胞结果 显示,该浓度金雀异黄素可将巨噬细胞阻滞在S-G2/M期.结论 金雀异黄索能抑制巨噬细胞细胞增殖,影响巨噬细胞形态,可能与干扰细胞周期有关.

植物雌激素金雀异黄素对绝经后妇女血浆NO、ET-1水平以及内皮依赖性血管舒张的影响

金雀异黄素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠血清骨保护素及核因子-κB受体活化因子配体的影响

目的：研究金雀异黄素（genistein，Gen）对Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型（typeⅡ，CIA）大鼠血清骨保护素（OPG）及核因子-κB 受体活化因子配体（RANKL）的影响。方法采用 SPSS 17.0软件随机抽样分为两组，编号1～10为空白对照组、11～60为造模组。造模组的50只大鼠建立CIA模型。造模成功的大鼠再按上述编号分为模型对照组、低剂量Gen组、中剂量Gen组、高剂量Gen组和甲氨蝶呤（MTX）组，于造模次日开始用药，各Gen组灌胃Gen混悬液1 ml/d；甲氨蝶呤组每周灌胃MTX 1 ml/次，浓度为0.1 mg/ml；空白组、模型对照组每天灌胃等量的生理盐水。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠血清RANKL及OPG的水平。结果骨代谢因子RANKL在模型对照组大鼠血清中表达量（0.328±0.044）的显著高于空白对照组（0.180±0.029）（P＜0.05）；Gen中、高剂量对RNAKL的抑制作用（分别为0.144±0.017、0.163±0.020）与甲氨蝶呤组（0.139±0.072）相当。模型对照组大鼠血清中的细胞因子OPG的表达水平（0.103±0.013）低于空白对照组（0.268±0.022）（P＜0.05）；Gen中、高剂量对OPG（分别为0.149±0.012、0.145±0.024）的上调作用与甲氨蝶呤组（0.160±0.056）相当。结论 Gen可影响 CIA 大鼠血清中 RANKL、OPG 水平，从而影响 OPG/RANKL 比值。提示 Gen 可能通过RANKL/OPG/RNAK通路抑制RA骨质破坏。

358 金雀异黄素、大豆黄素对基因损伤的抑制作用

金雀异黄素协同雷公藤多苷治疗去卵巢大鼠类风湿关节炎的药效学研究

目的：观察金雀异黄素协同雷公藤多苷治疗去卵巢大鼠类风湿关节炎的疗效。方法：将SD大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、甲氨喋呤治疗组和金雀异黄素协同雷公藤多苷治疗组（10只/组）。除假手术组外，其余大鼠均行卵巢摘除术并于尾根注射II型胶原诱导关节炎大鼠模型（CIA）。甲氨喋呤（2.7mg·kg-1）、雷公藤多苷（70mg·kg-1）及金雀异黄素（30mg·kg-1）灌胃给药（1次/天，连续2周）。通过测量大鼠关节炎指数、关节肿胀度和血清中ColII抗体、IL-6及IL-10水平评价疗效。结果：模型组大鼠关节炎指数、关节肿胀度及血清中ColII抗体、IL-6及IL-10水平均显著增高（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，甲氨喋呤和金雀异黄素协同雷公藤多苷治疗组大鼠关节炎指数及关节肿胀度均显著下降（P<0.01），甲氨喋呤治疗组大鼠血清中ColII抗体水平明显降低（P<0.05），而IL-6和IL-10水平没有显著改变。与之对应，金雀异黄素协同雷公藤多苷治疗组大鼠血清中ColII抗体及IL-6水平明显降低（P<0.05），IL-10水平显著增高（P<0.01）。结论：金雀异黄素协同雷公藤多苷可显著抑制去卵巢大鼠CIA的发生和发展，且对IL-6、IL-10的调节作用优于甲氨喋呤，提示植物雌激素协同雷公藤制剂对性腺功能异常型RA具有较好的治疗作用，为临床女性绝经后RA的治疗提供了新思路和实验依据。

金雀异黄素对肺泡Ⅱ型上皮细胞发生上皮-间质转化的影响

目的：观察金雀异黄素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肺腺癌 A549细胞发生上皮-间质转化（EMT）的影响，探讨其改善肺纤维化的作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度 GEN 和/或 TGF-β1干预细胞72 h 后的活性；RT-PCR 检测上皮及间质标记物的转变以及在转变过程中发挥关键调节作用的转录因子；Western blot 检测 p38及 JNK 信号通路的变化。结果 TGF-β1连续刺激 A549细胞72 h 可诱导其转化为成纤维细胞表型，表现出更多间质标记物升高，内皮标记物降低；RT-PCR 检测结果显示，金雀异黄素可呈浓度依赖性逆转这种现象；Western blot 检测结果显示，金雀异黄素与 TGF-β1协同刺激 A549细胞24 h 可显著抑制TGF-β1诱导 p38及 JNK 信号通路的磷酸化水平。结论金雀异黄素可抑制 TGF-β1诱导 A549细胞发生 EMT而发挥抗纤维化的作用。

金雀异黄素对脂多糖诱导人肺泡上皮细胞A549炎症及凋亡的影响

目的：观察金雀异黄素对脂多糖（LPS）诱导人肺泡上皮细胞A549发生炎症与凋亡的影响，探讨其改善肺损伤的作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度金雀异黄素和/或 LPS 干预细胞12 h 后的活力；RT-PCR检测金雀异黄素对LPS诱导的炎性因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达；TUNEL法检测细胞凋亡；Western blot检测信号通路的变化。结果金雀异黄素（1、5、10μmol/L）对细胞活力无明显影响，LPS（1μg/mL）可显著降低细胞活力，而金雀异黄素与LPS共同干预则细胞活力呈浓度依赖性升高；RT-PCR结果显示，LPS可显著提高炎性因子的基因表达，而金雀异黄素则可呈浓度依赖和时间依赖抑制其表达；TUNEL染色结果显示，金雀异黄素（10μmol/L）与LPS联合干预12 h可显著减少LPS诱导的细胞凋亡；Western blot结果显示，金雀异黄素（10μmol/L）与LPS（1μg/mL）协同刺激A549细胞30 min可显著抑制LPS诱导的IκBα、p65信号通路的磷酸化水平。结论金雀异黄素可抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞发生炎症和凋亡，从而发挥保护作用。

金雀异黄素壳聚糖微球的制备方法

目的:采用星点设计实验,优化金雀异黄素壳聚糖微球的制备工艺,提高预测性.方法:壳聚糖微球用复乳法制备,利用statistica软件进行多元线性回归和二项式拟合,求得方程,用效应面法选取较佳工艺条件.结果:投药量佳为13%～15%,有机相浓度为30%～40%,油相浓度为 68%～72%.结论:通过星点设计和效应面优化法优化金雀异黄素壳聚糖微球的制备工艺,预测性较好.

大豆异黄酮滴丸的制备工艺及质量标准

目的:确立大豆异黄酮滴丸的佳成型工艺和研究建立大豆异黄酮滴丸剂质量标准.方法:采用均匀设计法和单因素比较的方法,对提取物与基质的用量,药料温度,滴距等进行优选.采用薄层色谱法对大豆异黄酮提取物及滴丸中的大豆异黄酮进行定性研究.以UV法在262 nm测定原料及滴丸中大豆异黄酮含量.结果:根据实验所确定的工艺,制备的3批样品,符合《中国药典》2005年版关于滴丸的规定.大豆异黄酮可以用薄层色谱鉴别;大豆异黄酮在0.407-4.072 μg·mL-1线性关系良好,r=0.999 8;高、中、低浓度加样回收率分别为96.54%,97.27%,97.21%,RSD分别为1.3%,0.71%,0.78%(n=3).结论:优选的制备工艺方法简便可行,所建立的质量标准能检测和评价滴丸及原料中大豆异黄酮含量,且方法简便、快速、准确、稳定可靠.

金雀异黄素对人乳腺癌细胞体外生长的抑制作用

目的:研究金雀异黄素(genistein)对人乳腺癌细胞系的体外生长作用及其作用机理.方法:选用人乳腺癌细胞系 MCF-7(雌激素受体阳性细胞,ER+)和 MDA-MB-231(雌激素受体阴性细胞,ER-)体外培养、MTT 比色法、生长曲线和雌激素受体(ER)免疫组化染色等.结果:genistein 能明显地抑制MCF-7 细胞和MDA-MB-231 细胞的体外增殖,而且在一定浓度范围内均呈剂量依赖性,IC50 分别是32.5,46.8 μmol*L-1 .同时能拮抗外源性雌激素对MCF-7 细胞的生长刺激作用,而对MDA-MB-231 细胞的生长抑制作用与雌激素的存在与否无关.ER 免疫组化染色结果表明,经过30 μmol*L-1 genistein 处理的MCF-7 细胞,细胞核内的阳性颗粒与对照组相比明显减弱(P＜0.001).结论:genistein 能明显抑制MCF-7 和MDA-MB-231 细胞的体外生长,且呈剂量依赖性;genistein 对MCF-7 细胞的生长抑制作用是通过ER途径来介导的,而对MDA-MB-231 细胞是通过非ER 途径来介导的.

高效液相色谱-质谱联用分析鉴别葛根的异黄酮成分

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根茎,为常用中药,有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻的功能;异黄酮类和多酚类是其主要化学成分,已发现的异黄酮类成分有:大豆苷元-4′,7-二葡萄糖苷、3′-羟基葛根素(PG-1)、3′-甲氧基葛根素(PG-3)、3′-羟基葛根素4′-D-脱氧己糖苷、3′-甲氧基葛根素木糖苷、3′-甲氧基大豆苷元、大豆苷元-7-O-甲醚、3′-甲氧基大豆苷元-7-O-甲醚、3′-甲氧基刺芒柄花素、3′-甲氧基大豆苷、鹰嘴豆芽素A、葛根素、葛根素-7-木糖苷、葛根素木糖苷(PG-2)、葛根素-4′-D-β-D-葡萄糖苷(PG-6)、大豆苷、大豆苷元、刺芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷、刺芒柄花素、大豆苷元名-8-C-芹糖基(1→6)-葡萄糖苷、染料木素-8-C-芹糖基(1→6)-葡萄糖苷、染料木苷、金雀异黄素、染料木素-8-C-葡萄糖苷、6″-O-丙二酸单酰大豆苷、3′-羟基-4′-O-β-D-葡萄糖基葛根素.本研究采用高效液相色谱-质谱联用技术对野葛的异黄酮类成分进行鉴别分析.

HPLC同时测定乌灵胶囊中多组分的含量

目的:建立同时测定乌灵胶囊中5-hydroxymellein,5-carboxylmellein,金雀异黄素及5-甲基蜂蜜曲霉素含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,Kromasil KR100-5C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相乙腈-0.2％磷酸溶液,梯度洗脱；流速1.0 mL·min-1；柱温30℃.结果:5-hydroxymellein在7.86～157.2 ng线性关系良好,平均回收率为101％,RSD1.3％；5-carboxylmellein在9.57～191.4 ng线性关系良好,平均回收率为98.6％,RSD 1.5％；金雀异黄素在28.80～576.0ng线性关系良好,平均回收率为98.6％,RSD 1.8％；5-甲基蜂蜜曲霉素在21.46～429.2rg线性关系良好,平均回收率为99.2％,RSD 1.8％.结论:该研究建立的方法可行,重复性好,可用于乌灵胶囊的质量控制.